导读:本文包含了肿瘤基因表达调控论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,基因,肿瘤,肝癌,卵黄,蛋白,表观。
肿瘤基因表达调控论文文献综述
颜婷[1]（2019）在《PTEN基因沉默调控MAPK/JNK信号表达在结肠癌肿瘤细胞增殖中的作用机制》一文中研究指出目的:探讨抑癌基因PTEN调控MAPK/JNK信号通路对结直肠癌肿瘤细胞的发生、发展及相关分子机制。方法:(1)细胞培养及分组:收集结直肠癌细胞SW620分成3组,各组细胞悬液浓度调至3*10~5 cells/ml;(2)实验分组及转染:运用RNA干扰技术在体外沉默PTEN基因并转染结直肠癌细胞后设立3组对照即:(1)空白对照组(不作任何处理)、(2)干扰空载体组(转染siRNA-NC)、(3)干扰表达组(转染PETN siRNA);(3)将3组转染后的结直肠癌细胞于培养箱中培养72h;(4)RT-qPCR检测结直肠癌细胞系样本中PTEN基因的含量;(5)采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况;(6)流式细胞术检测PTEN对结直肠癌细胞周期的影响;(7)Western blot检测各组结直肠癌细胞中JNK、p-JNK、c-Fos和AP-1蛋白的表达含量。结果:(1)RT-qPCR检测结果显示:与干扰空载体组和空白对照组相比,干扰表达组PTEN的相对含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);(2)MTT分析结果显示:与干扰空载体组和空白对照组相比,干扰表达组的细胞增殖显着增加,差异有统计学意义(P<0.05);(3)流式细胞术发现:与干扰空载体组和空白对照组比较,干扰表达组细胞周期G_2+S期细胞数量上升,差异有统计学意义(P<0.05);(4)Western blot结果显示:与干扰空载体组和空白对照组相比,干扰表达组JNK、p-JNK、AP-1和c-Fos的蛋白表达含量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)PTEN基因沉默可能会促进体外结直肠癌细胞株的增殖和DNA的合成,因此可以通过调控PTEN的表达干预结直肠癌细胞株的恶性增殖;(2)PTEN基因沉默能够上调JNK、AP-1和c-Fos蛋白的表达,从而激活MAPK/JNK信号通路,促进结直肠癌细胞株的恶性发展。(本文来源于《湖南师范大学》期刊2019-06-01）
郭阳,金爱,杨莉,张莹,王旭东[2]（2018）在《钙蛋白酶2介导雌激素调控乳腺肿瘤细胞GREB1基因表达》一文中研究指出目的:探讨钙蛋白酶2(CANP2)对17β-雌二醇(E2)刺激MCF-10A转化细胞增殖能力、GREB1基因表达的影响及其机制。方法:以乳腺癌MCF-10A转化细胞为研究模型,乳腺癌MCF-7细胞为阳性对照,采用E2(50 nmol/L)刺激2种细胞24 h后,平板克隆方法观察细胞的增殖能力;以0.1%的二甲亚砜(DMSO)刺激MCF-10A、MCF-7细胞作为阴性对照组,以CANP抑制剂Calpeptin(Calp)预处理2刺激的MCF-10A转化细胞1 h或shRNA-CANP2转染2刺激的MCF-10A转化细胞沉默基因表达,同时设立E2对照组和转染空载体E2对照组,采用qRT-PCR检测细胞中GREB1基因表达水平,平板克隆方法观察细胞的增殖能力。结果:与阴性对照比较,E2能上调MCF-10A转化细胞和MCF-7细胞中GREB1基因表达(P<0.01,P<0.05);与E2对照组比较,Calpeptin能抑制E2上调MCF-10A转化细胞和MCF-7细胞的GREB1基因表达,并促进细胞的增殖(P<0.01);与转染空载体E2对照组相比,shRNA-CANP2基因沉默能使MCF-10A转化细胞和MCF-7细胞增殖能力减弱(P<0.01),并抑制E2刺激的MCF-10A转化细胞中GREB1表达的上调(P<0.01,P<0.05)。结论:可能通过CANP2 E2诱导恶性转化乳腺上皮细胞GREB1基因的表达和细胞生长。(本文来源于《贵州医科大学学报》期刊2018年06期）
马骊,葛倩倩,许杨,彭素晓,李健[3]（2018）在《脊尾白虾翻译控制肿瘤蛋白基因TCTP克隆及自噬调控相关基因在卵巢发育期的表达》一文中研究指出为深入了解脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)卵巢发育和卵黄蛋白原发生的分子机制,本研究克隆得到脊尾白虾翻译控制肿瘤蛋白基因TCTP,并结合自噬调控基因TCTP、Hif-1α、Beclin1和Bcl-2在卵巢发育期的表达水平,阐释脊尾白虾卵黄蛋白原合成过程中的分子调控特征。研究显示,脊尾白虾TCTP基因c DNA全长为732 bp,编码168个氨基酸,具有典型的TCTP1和TCTP2功能域以及PKC和TKⅡ等mTOR信号通路相关的磷酸化位点。同时发现,甲壳动物TCTP普遍缺乏在其他动植物中高度保守的C末端的cys残基。进化分析显示,脊尾白虾TCTP与中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)亲缘关系最近。4种自噬调控基因在脊尾白虾卵巢发育期的表达结果显示,肝胰腺TCTP基因从增殖期到产后恢复期呈递减趋势;肝胰腺Hif-1α、Beclin1和Bcl-2基因表达趋势相似,即从增殖期到小生长期高表达,大生长期极显着下降,表达量最低(P<0.01),这与外源性卵黄蛋白原的合成趋势大致相反。这些自噬调控基因可能通过自噬作用共同调节外源性卵黄蛋白原的合成。卵巢TCTP基因在小生长期表达量最高;卵巢Hif-1α基因从增殖期到产后恢复期持续升高,这与内源性卵黄蛋白原表达趋势相似;卵巢Beclin1基因在大生长期表达量最高,与脊尾白虾卵巢Ec R表达趋势相似,与卵巢Bcl-2基因表达趋势相反,这些自噬调控基因可能通过自噬作用共同促进内源性卵黄蛋白的合成。本研究表明,自噬调控基因TCTP、Hif-1α、Beclin1和Bcl-2在脊尾白虾卵巢发育时期相互协调共同作用,可能通过自噬作用调节脊尾白虾卵黄蛋白原的合成和卵巢发育。(本文来源于《渔业科学进展》期刊2018年04期）
侯小满[4]（2018）在《NOTCH1调控肿瘤干细胞相关基因表达影响卵巢癌细胞增殖和侵袭的研究》一文中研究指出第一部分NANOG和CD44在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床意义研究目的:探究肿瘤干细胞标志物NANOG和CD44在上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)组织中的表达及其临床意义。研究方法:以良性卵巢肿瘤组织为对照,采用免疫组织化学法检测EOC患者肿瘤组织中NANOG和CD44的表达水平。结果:NANOG和CD44在EOC中的阳性表达率均显着高于良性卵巢肿瘤组织(P<0.001),EOC中NANOG和CD44的表达水平呈正相关(r=0.346,P<0.01)。NANOG在EOC中的阳性表达率与临床分期和病理分级有关(P<0.05),与年龄、病理类型、淋巴结转移和肿瘤位置无关;CD44在EOC中的阳性表达率与临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05),与年龄、病理分级、病理类型和肿瘤位置无关。结论:NANOG和CD44参与EOC的发生和发展,且与EOC不良预后有关;NANOG联合CD44可作为EOC恶性程度划分和预后判断的辅助指标。第二部分NOTCH1信号蛋白对卵巢癌细胞肿瘤干细胞标志物的表达及增殖、侵袭能力的影响研究目的:探究NOTCH 1信号蛋白对卵巢肿瘤干细胞标志物表达的调控作用及其对卵巢癌细胞SKOV3和A2780增殖、侵袭及体内成瘤能力的影响。研究方法:慢病毒转染联合RNA干扰技术敲减NOTCH1基因,利用Western blot法和RT-qPCR法检测NOTCH1信号蛋白对卵巢癌细胞SKOV3和A2780中肿瘤干细胞标志物NANOG、OCT-4、CD44和CD117蛋白表达及mRNA水平的影响;通过划痕实验,Transwell迁移和侵袭实验及CCK-8实验检测NOTCH1对SKOV3和A2780迁移、侵袭能力及顺铂敏感性的影响;裸鼠体内成瘤实验检测NOTCH1对SKOV3体内成瘤和增殖能力的影响。结果:shRNA干扰NOTCH1信号蛋白可抑制卵巢癌细胞SKOV3和A2780中肿瘤干细胞标志物NANOG、OCT-4、CD44和CD117的蛋白表达(P<0.05);降低卵巢癌细胞 SKOV3 中 NANOG、OCT-4、CD44 和 CD117 的 mRNA水平(P<0.05),同时降低卵巢癌细胞A2780中NANOG和OCT-4的mRNA水平(P<0.05)。shRNA干扰NOTCH1信号蛋白表达可降低卵巢癌细胞SKOV3和A2780的迁移和侵袭能力(P<0.05),增强其对顺铂的敏感性(P<0.05);降低裸鼠体内移植瘤的增殖能力(P<0.05)。结论:NOTCH1负性调控卵巢癌细胞中肿瘤干细胞相关基因的表达,抑制NOTCH1信号蛋白表达可降低卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力;NOTCH1有望成为控制卵巢癌恶性进展的新靶标。(本文来源于《山东大学》期刊2018-05-02）
王丹[5]（2018）在《miR-1-3p调控PD-L1基因表达抑制肝癌细胞肿瘤生物学功能及其机制研究》一文中研究指出目的:探讨miR-1-3p通过调控肿瘤免疫相关因子抑制肝癌细胞肿瘤生物学功能及其分子机制的研究。方法:第一部分:miR-1-3p调控PD-L1基因的表达;1、利用过表达miR-1-3p的慢病毒转染肝癌细胞系(Hep3B、Hep G2),通过q RT-PCR检测转染效率。采用流式细胞术分选成功转染miR-1-3p的肝癌细胞,提高转染纯度,建立稳定过表达miR-1-3p的肝癌细胞系;2、通过生物信息学软件(RNA-hybridization)预测miR-1-3p的潜在下靶点;3、通过q RT-PCR和Western blotting检测过表达miR-1-3p组、miR-NC组、mock组中下游靶点的表达变化;4、进一步在建立的稳定过表达miR-1-3p的肝癌细胞系中转染miR-1-3p的抑制剂(inhibitor),下调miR-1-3p的表达,并通过q RT-PCR和Western blotting检测inhibitor的抑制效率和下游基因的表达变化。5、双荧光素酶报告实验miR-1-3p与下游基因的靶向关系;的肿瘤生物学功能1、在普通肝癌细胞系和稳定过表达miR-1-3p的肝癌细胞系中,同时转染si RNA沉默PD-L1,使PD-L1的表达下调,并通过q RT-PCR和Western blotting检测si RNA的沉默效率和PD-L1基因的表达变化;2、向稳定过表达miR-1-3p的肝癌细胞系中转染miR-1-3p抑制剂抑制miR-1-3p的表达,观察抑制miR-1-3p的表达后肝癌细胞的生长变化;在加入miR-1-3p抑制剂的过表达miR-1-3p的肝癌细胞系中继续转染PD-L1的si RNA,沉默PD-L1的表达,观察在低表达miR-1-3p的肝癌细胞中,沉默PD-L1基因的表达后对体外细胞增殖、克隆、划痕、侵袭、凋亡以及裸鼠成瘤等各方面产生的影响。第二部分:miR-1-3p通过靶向调控PD-L1基因的表达抑制肝癌细胞结果:第一部分:miR-1-3p抑制PD-L1基因的表达1、转染过表达miR-1-3p慢病毒至肝癌细胞系(Hep3B、Hep G2)后,经q RT-PCR检测结果提示:在肝癌细胞系中成功过表达miR-1-3p。流式细胞术检测结果提示:Hep3B中miR-1-3p的转染纯度提高至93.3%,Hep G2的miR-1-3p转染纯度提高至91.5%;2、生物信息学软件(RNA-hybridization)预测到肿瘤免疫分子PD-L1是miR-1-3p的潜在下游靶点;3、转染过表达miR-1-3p的慢病毒,使肝癌细胞过表达miR-1-3p,经q RT-PCR技术和Western blotting检测下游基因PD-L1的表达变化,两者结果提示:过表达miR-1-3p后,PD-L1在m RNA水平和蛋白水平的表达均下调;4、转染miR-1-3p抑制剂至稳定过表达miR-1-3p的肝癌细胞系后,经q RT-PCR技术和Western blotting结果提示:抑制miR-1-3p后,PD-L1在m RNA水平和蛋白水平的表达均上升。5、双萤光素酶报告实验证明miR-1-3p抑制PD-L1基因的表达。第二部分:miR-1-3p下调PD-L1表达抑制肝癌细胞增殖、克隆、迁移、侵袭、裸鼠成瘤以及促进肝癌细胞凋亡1、转染PD-L1的si RNA至普通肝癌细胞系和稳定过表达miR-1-3p的肝癌细胞系中,经q RT-PCR技术和Western blotting结果提示:si RNA在m RNA水平和蛋白水平有效沉默PD-L1基因的表达;2、向稳定过表达miR-1-3p的肝癌细胞系中转染miR-1-3p抑制剂抑制miR-1-3p的表达后,观察到其促进了肝癌细胞增殖、克隆、迁移、侵袭、裸鼠成瘤以及抑制肝癌细胞凋亡;在加入miR-1-3p抑制剂的过表达miR-1-3p的肝癌细胞系中继续转染si RNA沉默PD-L1的表达后,观察到加入si RNA后,抑制了细胞的增殖、克隆、划痕、侵袭以及裸鼠成瘤,促进了肝癌细胞的凋亡。结论:miR-1-3p通过调控肿瘤免疫相关因子PD-L1基因的表达抑制肝癌细胞肿瘤生物学功能。(本文来源于《西南医科大学》期刊2018-03-01）
张益群[6]（2017）在《MicroRNA 483对肿瘤IGF2基因印记表达的调控及机制》一文中研究指出研究背景:胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ),是一个促细胞分裂分子,具有促进生长和代谢的作用。正常情况下,IGF-Ⅱ主要在胚胎和人类肝脏中表达,而在多种人类恶性肿瘤中存在异常表达。IGF-Ⅱ通过自分泌、旁分泌和内分泌通路,结合一型IGF受体(IGF1R),促进MAPK和/或PI3-K/AKT信号通路,减少肿瘤细胞凋亡,促进细胞增殖和耐药。所以,人们将IGF2和IGF1R作为肿瘤特异性基因治疗的靶点进行研究。编码IGF-Ⅱ的基因,IGF2,位于染色体11p15,是一个母源印记的基因。个体出生后,IGF2表达受四个启动子调控;启动子P1启动双等位基因表达,而P2-P4刺激除了脑组织之外其他组织中的父源单等位基因表达。单等位基因表达受等位基因特异性表观调节,该调节元件名为印记控制区,在染色体11p15.5上,位于IGF2和H19之间。失去IGF2基因印记(LOI),即双等位基因都表达,是很多人类肿瘤的标志,尤其是儿童肿瘤和肿瘤干细胞。LOI与增加IGF1R信号通路敏感性、加速肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞耐药性相关。研究目的:在IGF2 LOI肿瘤细胞中,原本沉默的母源IGF2被激活的机制我们知之甚少。印记控制区(ICR)在各报道中并不一致,且IGF2启动子区的表观遗传操控元件还没有被研究清楚。所以,我们通过研究与IGF2启动子相互作用的分子,来揭示IGF2表达的调控机制。本研究表明,miR-483能够导致IGF2 LOI。研究方法:1.使用Cas9引导的染色体免疫共沉(Cas9-guided chromatin immunoprecipitation,Cas IP)拉下来与IGF2启动子相互作用的候选分子。在这个实验中,携带有突变Cas9(d Cas9)和两个Cas9 g RNA的慢病毒载体稳定转染入靶细胞。d Cas9是一个没有剪切活性的CRISPR Cas9突变,不能进行DNA切割,但是可以结合到g RNA引导的基因靶点上。我们用Cas9抗体和免疫磁珠将Cas9-g RNA-IGF2启动子染色质复合物沉淀,并用miRNA测序试剂盒检测其中的miRNA。与Cas9-g RNA-随机序列沉淀物相比,我们发现IGF2内含子来源的miR-483-5p与IGF2启动子特异性结合。运用miR483-5p亲和结合共沉淀(miR483-5p IP)验证二者结合,即借助生物素标记的miR-483-5p转染肿瘤细胞系HCT116和ASPC-1,链霉素磁珠沉淀miR-483-5p,继而通过PCR验证复合物中包括IGF2启动子。2.确定了miR-483-5p与IGF2启动子的结合后,我们制作了miR-483、miR-483-5p、anti-miR-483、anti-miR-483-5p、空白对照质粒和相应慢病毒,用于研究miR-483的功能。用上述病毒感染HCT116和ASPC-1肿瘤细胞,并筛选出稳定转染细胞。接下来,我们对稳定转染细胞和正常肿瘤细胞系的增殖、侵袭、迁移、克隆形成等功能,和下游IGF2 m RNA、IGF-II蛋白、磷酸化AKP水平进行比较分析,研究miR-483对细胞功能和IGF2信号通路的影响。3.研究miR-483和miR-483-5p对IGF2基因印迹的影响。因为IGF2是一个印记基因,在HCT116和ASPC-1肿瘤细胞中我们能够通过Apa1多态位点检测两个等位基因的表达。在过表达miR-483和miR-483-5p和未处理细胞中,我们通过PCR和Apa1酶切检测了IGF2的印记水平。4.为了研究miR-483-5p介导的IGF2 LOI机制,我们运用用染色质免疫共沉淀(Ch IP)检测IGF2启动子区域H3K27甲基化水平。在IGF2启动子H3K27单等位基因甲基化中,CTCF(CCCTC接合因子)和SUZ12(多梳蛋白复合物的接合因子)与染色质的作用是必要的,我们通过Ch IP检测了IGF2印记调节蛋白CTCF和SUZ12的总量和其在miR-483-IGF2复合物中的水平,来揭示miR-483-5p影响IGF2表达的分子机制。实验结果:1.通过Cas IP实验发现,IGF2启动子P2可与IGF2第7内含子来源miR-483-5p结合。运用miR-483-5p IP实验,我们沉淀了miR-483-5p和其结合成分,对产物进行q PCR也验证了二者的相互作用。2.感染慢病毒使结肠癌细胞系HCT116和胰腺癌细胞系ASPC-1稳定表达miR-483和miR-483-5p,与对照组肿瘤细胞系相比,miR-483组和miR-483-5p组增殖、侵袭性、迁徙速度、克隆形成能力均增加,且IGF2 m RNA、IGF-II蛋白量、磷酸化AKT水平均增高。而转染anti-miR-483-5p的细胞miR-483-5p水平下贱,上述指标表现出相反的改变。3.结肠癌细胞系HCT116和胰腺癌细胞系ASPC-1均为IGF2印记正常的肿瘤细胞系,即只表达父源等位基因。这两个细胞系均可用多形性限制酶Apa1来区分父源和母源等位基因,从而进行印记分析。基因组DNA(g DNA)包含“A”和“C”两个等位基因。在正常印记的c DNA中,只有“A”等位基因产物(不能被Apa1酶切,171 bp)能被检测到,表现出典型的单等位基因表达。但是,在miR-483和miR-483-5p克隆中,我们发现“C”等位基因(Apa1酶切产物为111 bp和60 bp)也能被检测到。这些数据提示,对于MOI的细胞系HCT116和ASPC-1细胞,印记的母源等位基因被miR-483和miR-483-5p激活。4.miR-483和miR-483-5p的LOI HCT116和ASPC-1细胞与MOI对照组比较发现,LOI细胞印记IGF2启动子(P2-4)的H3K27甲基化显着减少。且CTCF和SUZ12与IGF2印记启动子(P2-4)结合减少,而非印记启动子(P1)不受影响。实验结论1.IGF2内含子来源miR-483-5p可与IGF2启动子P2结合;2.外源表达miR-483-5p可促进IGF2表达,通过IGF1R/AKT通路促进肿瘤发生发展;3.IGF2印记正常的结肠癌细胞系HCT116和胰腺癌细胞系ASPC-1中,外源表达miR-483-5p可使IGF2印记缺失(LOI),母源等位基因表达;4.Mi R-483-5p使IGF2印记缺失(LOI)的机制为:减少CTCF和SUZ12与IGF2启动子的结合,降低H3K27甲基化水平,从而使沉默的母源基因表达。本实验的意义在于:发现了miRNA在基因印记调节中的作用。miR-483-5p是一个促癌内含子miRNA,是一个重要的IGF2印记调节分子。与IGF2启动子P2结合后,减少了CTCF、SUZ12与IGF2启动子的结合,进而减少了H3K27甲基化,使母源等位基因表达,即IGF2印迹缺失。miR-483-5p通过改变IGF2印记上调IGF2表达,同时增强肿瘤复制、迁移、侵袭和克隆形成能力。miR-483-5p造成的IGF-II生长因子过表达可能通过IGF1R/AKT通路促进肿瘤发生,而加入anti-miR-483-5p可逆转这一效应。这些数据表明了致瘤的miR-483-5p促进肿瘤生长的一个新的作用途径,也给调控肿瘤IGF2表达提供了新的思路。(本文来源于《吉林大学》期刊2017-05-01）
张琪[7]（2017）在《宫颈肿瘤相关巨噬细胞中IL-10基因的转录调控表达机制研究》一文中研究指出目的宫颈癌的发病趋势已呈现低龄化。白介素-10(IL-10)作为一种具有免疫抑制作用的细胞因子对宫颈癌变的发生、发展具有重要作用。当其在人体内大量合成可抑制免疫系统的调控,引起HPV病毒入侵,导致宫颈癌的发生。在宫颈肿瘤生长的微环境中,肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)通过分泌多种细胞因子参与肿瘤的生长、侵袭和迁移。TAMs作为表达IL-10的主要来源之一,其在宫颈癌变中调控IL-10表达的分子机制未曾报道。课题组前期研究已证实,宫颈肿瘤局部组织IL-10表达明显升高,且该基因启动子的低甲基化修饰促进其表达,这提示DNA甲基化修饰在应对病毒入侵和局部炎症环境的变化过程中具有重要影响。生物信息学分析显示:E26转录因子-1(Ets1)和特异性蛋白1(Sp1)在IL-10基因启动子上结合的顺式作用元件含有CG位点,且有报道称Ets1和Sp1的表达与宫颈癌的发生相关,但其是否参与TAMs表达IL-10的调控机制及其在宫颈癌中的作用研究未见报道。因此,本研究利用人单核巨噬细胞、人宫颈癌细胞和人不同病理宫颈组织,探讨TAMs中DNA甲基化参与Ets1和或Sp1介导IL-10基因转录调控的分子机制及其在宫颈癌变中的作用,旨在为以TAMs作为靶点的宫颈癌靶向治疗提供新思路。方法选取2014年9月至2016年3月就诊于唐山市工人医院并行宫颈活检及手术治疗患者160例,其中正常宫颈47例(对照组)、子宫颈上皮内瘤变Ⅰ级27例(CINⅠ组)、子宫颈上皮内瘤变Ⅱ-Ⅲ级46例(CINⅡ-Ⅲ组)和宫颈鳞癌40例(CSCC组)。在线查看所有患者的电子病例并了解患者的基本信息情况。采用免疫双荧光染色检测各组人宫颈组织中IL-10、Ets1和Sp1分别同CD68的共表达;临床分析IL-10+TAMs、Ets1+TAMs和Sp1+TAMs水平与宫颈鳞癌临床病理特征的关系;采用人单核细胞THP-1体外诱导形成宫颈TAMs;利用si RNA干扰以及q RT-PCR和Western blot技术分析TAMs中转录因子Ets1和(或)Sp1对IL-10基因表达水平的影响;生物信息学分析转录因子Sp1和Ets1在IL-10基因启动子近端2000bp范围内可能的结合位点,并通过对TAMs甲基化干预、荧光素酶报告基因、染色质免疫沉淀(CHIP)和甲基化特异性PCR(MSP)等分子生物学方法分析在宫颈TAMs中DNA甲基化对转录因子Sp1、Ets1与IL-10基因启动子的结合及其转录活性的影响。结果1对照组、CINⅠ组、CINⅡ-Ⅲ组和CSCC组患者的基本信息(包括:年龄、初潮年龄、月经周期、经期天数、怀孕次数、流产次数、吸烟情况、饮酒情况)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2免疫双荧光染色检测不同病理宫颈组织中IL-10、Ets1和Sp1与TAMs的共表达结果显示,伴随宫颈病变的进展,宫颈组织中TAMs以及IL-10+TAMs、Ets1+TAMs和Sp1+TAMs的表达百分比均逐渐增加,且与正常组相比,CINⅠ组、CINⅡ-Ⅲ组和CSCC组中的表达逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。3在CSCC组织中IL-10+TAMs、Ets1+TAMs和Sp1+TAMs的表达水平与年龄、肿瘤大小无关(P>0.05);与分化程度、FIGO分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。4在TAMs中采用干扰si RNA敲低Ets1、Sp1或同时敲低Ets1和Sp1基因表达,q RT-PCR和Western blot实验结果显示:敲低Sp1或同时敲低Ets1和Sp1基因均可下调IL-10的表达,且双敲抑制其表达更为明显,而仅敲低Ets1对IL-10的表达影响较小。5在甲基化干预实验以及MSP测序和Ch IP实验结果显示,在TAMs中IL-10基因启动子区的去甲基化促使转录因子Sp1与其结合并上调IL-10的表达。6进一步CHIP和免疫荧光染色实验结果表明,Ets1在Sp1调控IL-10基因启动子活性过程中起协同作用。结论1 TAMs源IL-10的表达与宫颈癌变呈正相关性。2在宫颈癌中转录因子Ets1和Sp1的表达上调且与TAMs源IL-10的表达相关。3在TAMs中Sp1结合位点DNA去甲基化在调控IL-10基因启动子活性及其在宫颈癌变发生中具有重要促进作用,而Ets1表达促进Sp1调控IL-10基因启动子的转录活性。(本文来源于《华北理工大学》期刊2017-04-18）
袁龙[8]（2017）在《NgAgo-gDNA系统基因表达调控功能的验证及其抗肿瘤作用的初步研究》一文中研究指出目的:在哺乳动物细胞中验证NgAgo-g DNA系统是否具有基因编辑和调控基因表达的功能;对利用NgAgo-g DNA系统靶向致癌突变基因杀灭肿瘤细胞进行初步探索研究。方法:提取肿瘤细胞基因组DNA,通过PCR的方式扩增基因突变序列。将扩增片段克隆入T载体中,测序突变序列,鉴定肿瘤细胞系突变位点。构建致癌突变基因与EGFP共表达载体,将共表达载体、NgAgo载体以及靶向突变部位或EGFP的g DNA通过Lipofectamine 2000瞬时转染到293FT细胞中,流式检测EGFP的表达。以EGFP荧光表达率为指标判断基因编辑的效果。之后,探究在不同血清浓度(10%、5%、2.5%)及不同效靶比(EGFP:NgAgo-g DNA=1:3、1:6、1:12、1:24)条件下的基因编辑效果。随后,我们对实验条件进行优化。在进行基因编辑时,我们常使用EGFP作为报告分子。但由于EGFP蛋白相对稳定,降低了其对微弱基因编辑效果的报告敏感性。为此,我们的研究尝试构建EGFP-PEST融合蛋白表达载体,利用PEST序列可通过泛素蛋白酶体途径降解蛋白的功能,加快EGFP的降解,从而使得EGFP能够更为灵敏的指示基因编辑效果,为实现基因编辑的可视化筛选奠定基础。因此,以NFATx6-m Pro-EGFP-PEST-YES为模板,PCR扩增EGFP-PEST序列,克隆入逆转录病毒载体p QCXIP-EGFP-N1构建p QCXIP-EGFP-PEST-N1,病毒包装后感染293FT细胞获得稳定细胞系。用蛋白酶体抑制剂(MG-132)处理细胞,Western Blot检测EGFP的表达变化。成功建立稳定表达p QCXIP-EGFP-PEST-N1的293FT后,将NgAgo的表达载体以及靶向EGFP的g DNA通过Lipofectamine 2000瞬时转染到293FT细胞中,流式检测EGFP的表达,分选出俩群差异表达EGFP的细胞,分别提取基因组DNA和RNA,PCR扩增基因突变部位,测序突变序列,逆转录RNA,利用q PCR检测RNA水平的表达。最后,利用脂质体Lipofectamine 2000将NgAgo以及靶向突变序列的g DNA转入到肿瘤细胞中,连续72小时监测肿瘤细胞增殖。结果:1.在我们所选择的肿瘤细胞系中,大部分细胞系均与文献报道的突变位点相符,仅H820细胞系并没有发现文献报道的T790M的突变。2.在不同血清浓度及不同效靶比条件下,NgAgo-g DNA系统靶向突变部位或EGFP后,EGFP的荧光表达率未见明显降低。3.瞬转靶向EGFP的NgAgo-g DNA到稳定表达EGFP-PEST的293FT细胞系中,通过流式分析发现EGFP的荧光表达强度有所降低,但基因序列分析未见DNA序列改变。4.NgAgo-g DNA系统可以靶向致癌突变抑制肿瘤细胞的增殖。结论:在哺乳动物细胞中,NgAgo-g DNA系统可以敲低基因表达,但基因编辑能力在本研究中未得到证实;基于NgAgo-g DNA系统治疗肿瘤值得进一步研究。(本文来源于《山西医科大学》期刊2017-04-10）
廖怀东[9]（2017）在《原癌基因CT45A1促进肿瘤转移基因SULF2在乳腺癌细胞中异常高表达的分子调控机制研究》一文中研究指出乳腺癌发病率居女性恶性肿瘤发病率之首,虽然早期可以通过外科手术及联合放疗化疗等治疗手段,使乳腺癌的五年生存率可达70%以上。但许多的乳腺癌患者在确诊时便已发生转移,外科手术已无能为力,更有甚者,转移性乳腺癌还常常耐放疗化疗,目前没有很好的治疗方法。并且乳腺癌在治疗后也易出现复发和转移,目前我国每年乳腺癌死亡人数高达7万人。因此,乳腺癌仍然是造成女性死亡主要恶性肿瘤之一。肿瘤转移是导致乳腺癌病人死亡的最重要原因,研究显示,90%病人死亡是由于肿瘤转移所致。乳腺癌为何在一部分病人易发生转移的机制目前尚不清楚,现有抗乳腺癌转移药物的疗效都不佳。因此,阐明乳腺癌转移的机制已经成为全球癌症研究亟待解决的科学难题,也是目前转移性乳腺癌的早期诊断和防治研究的科学前沿。乳腺癌的转移机制非常复杂,涉及多个基因多个信号通路。到底哪些癌基因和促癌基因乳腺癌转移中起关键作用,迄今知之甚少。CT45A1是癌睾抗原CT45家族的成员之一,在胚胎发育过程中高表达,促进干细胞增殖,而在人出生后该基因仅在男性睾丸的精原(干)细胞中表达,在其他各种组织中都不表达。最近我们报道了 CT45家族成员CT45A1作为新的原癌基因能诱导多种癌基因异常高表达,包括肿瘤转移性基因SULF2(硫酸酯酶Ⅱ),促进乳腺癌转移(Shang B,et aL Cell Death Dis 2014)。但有关SULF2基因在肿瘤差异高表达的调控机制不明,CT45A1如何促进SULF2基因异常高表达的机制在国内外迄今尚未见报道。鉴于CT45A1是定位于细胞核的核蛋白,且能与DNA结合,我们提出科学假设:CT45A1可能作为基因转录激活物,通过与SUFL2基因启动子序列结合,增强其启动子活性,并通过与转录因子相互作用,促进SULF2基因异常高表达。为了证明这一设想,我们采用了 Luciferase基因报告系统、核酸-蛋白结合实验、免疫共沉淀实验和特异性抑制剂实验等研究策略和方法。通过一系列研究,我们发现:(1)CT45A1显着提高乳腺癌细胞中SULF2蛋白表达水平。(2)Luciferase基因报告系统揭示,CT45A1能明显增强SULF2启动子活性,从而促进SULF2基因转录。(3)DNA-蛋白质结合实验显示,CT45A1能够结合于SULF2基因启动子片段(-107bp至-145bp),该结合片段含有转录因子Sp1的核心结合位点ATGCCCCCTGG。(4)免疫共沉淀证明,CT45A1能够与Sp1相互作用,增强SULF2基因转录,这一作用能够被Sp1特异性抑制剂阻断,提示CT45A1能够作为转录因子Sp1激活物促进SULF2的高表达。综上所述,我们发现CT45A1能够通过结合到SULF2启动子上,并与转录因子Sp1相互作用,作为转录因子Sp1的激活物,从而促进转移性基因SULF2在乳腺癌细胞中异常高表达。揭示了 CT45A1激活乳腺癌中转移基因SULF2的异常高表达的机制。因此,本研究对阐明乳腺癌转移机制有重要的意义,为乳腺癌转移机制研究提供了新视角,也为抗乳腺癌转移新药研发提供了新思路和靶标。(本文来源于《苏州大学》期刊2017-04-01）
杨成魁[10]（2017）在《坏死基因Rip3在肿瘤细胞中表达调控机制及其在肿瘤发生发展中的作用研究》一文中研究指出坏死是一种具有典型形态学特征的细胞死亡方式,包括细胞器肿胀、细胞膜破裂等。程序性细胞坏死(Programmed necrosis,necroptosis)被视为是一种可调控的细胞死亡的方式,可由死亡配体(包括TNF?、TRAIL、FasL等)、干扰素、Toll样受体的配体以及病原体感染等调控启动。受体相互作用蛋白3(RIP3)是程序性坏死信号通路中的核心调控蛋白。然而,在绝大多数肿瘤细胞和肿瘤组织中RIP3蛋白的表达是缺失的,使得这些肿瘤细胞无法启动RIP3-依赖的程序性坏死通路。有报道发现RIP3的缺失表达跟基因组甲基化水平有关,但是肿瘤细胞中RIP3表达调控的详细机制及其在肿瘤发生发展中的作用还有待进一步解答。本论文中我们的研究结果表明,转录因子Sp1对RIP3的表达具有重要的调控作用。通过RNA干扰技术沉默肿瘤细胞中Sp1的表达能够显着降低坏死基因Rip3的转录活性和RIP3的表达。更为重要的是,Sp1的沉默能够显着抑制程序性细胞坏死的发生。而且,在稳定沉默Sp1的肿瘤细胞中,重新表达野生型Sp1能够恢复RIP3的表达及细胞对程序性细胞坏死的响应。此外,我们还发现在RIP3表达缺失的肿瘤细胞中沉默表观调控蛋白UHRF1能够降低坏死基因Rip3启动子区域DNA甲基化水平,并能有效诱导RIP3蛋白的表达。在RIP3缺失的肿瘤细胞中,UHRF1沉默诱导的RIP3表达依赖于转录因子Sp1的作用。我们的结果还证实组蛋白去乙酰化酶抑制剂不能诱导肿瘤细胞中RIP3的表达。值得关注的是,当我们在RIP3表达缺失的肿瘤细胞中过表达RIP3能够显着抑制肿瘤在小鼠体内的生长。综上所述,我们的研究揭示了转录因子Sp1和表观遗传因子UHRF1调控RIP3表达的分子机制,并且通过动物模型证明了肿瘤细胞中RIP3的表达能够促进肿瘤细胞的坏死,从而抑制体内肿瘤生长。(本文来源于《苏州大学》期刊2017-03-01）
肿瘤基因表达调控论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨钙蛋白酶2(CANP2)对17β-雌二醇(E2)刺激MCF-10A转化细胞增殖能力、GREB1基因表达的影响及其机制。方法:以乳腺癌MCF-10A转化细胞为研究模型,乳腺癌MCF-7细胞为阳性对照,采用E2(50 nmol/L)刺激2种细胞24 h后,平板克隆方法观察细胞的增殖能力;以0.1%的二甲亚砜(DMSO)刺激MCF-10A、MCF-7细胞作为阴性对照组,以CANP抑制剂Calpeptin(Calp)预处理2刺激的MCF-10A转化细胞1 h或shRNA-CANP2转染2刺激的MCF-10A转化细胞沉默基因表达,同时设立E2对照组和转染空载体E2对照组,采用qRT-PCR检测细胞中GREB1基因表达水平,平板克隆方法观察细胞的增殖能力。结果:与阴性对照比较,E2能上调MCF-10A转化细胞和MCF-7细胞中GREB1基因表达(P<0.01,P<0.05);与E2对照组比较,Calpeptin能抑制E2上调MCF-10A转化细胞和MCF-7细胞的GREB1基因表达,并促进细胞的增殖(P<0.01);与转染空载体E2对照组相比,shRNA-CANP2基因沉默能使MCF-10A转化细胞和MCF-7细胞增殖能力减弱(P<0.01),并抑制E2刺激的MCF-10A转化细胞中GREB1表达的上调(P<0.01,P<0.05)。结论:可能通过CANP2 E2诱导恶性转化乳腺上皮细胞GREB1基因的表达和细胞生长。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肿瘤基因表达调控论文参考文献
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[9].廖怀东.原癌基因CT45A1促进肿瘤转移基因SULF2在乳腺癌细胞中异常高表达的分子调控机制研究[D].苏州大学.2017
[10].杨成魁.坏死基因Rip3在肿瘤细胞中表达调控机制及其在肿瘤发生发展中的作用研究[D].苏州大学.2017
论文知识图
