导读:本文包含了中国鲎抗菌肽论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:中国鲎,抗菌肽,基因工程,生物活性
中国鲎抗菌肽论文文献综述
郑伟,韩文瑜,韩俊友,张钫,雷连成[1]（2007）在《中国鲎(Tachypleustridentatus)基因工程抗菌肽的制备及其抗菌活性研究》一文中研究指出本研究从中国鲎血细胞RT-PCR扩增抗菌肽tachyplesins基因,经改造构建原核和真核表达载体pET-KRN、pPIC9-KRY,并分别在大肠杆菌DE3和毕赤酵母GS115中诱导表达。用Tris-TricineSDS-PAGE检测并进一步电洗脱纯化表达产物,经体外生物活性测定表明,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、伤寒沙门菌等具有抑菌作用,表达产物KRN的抑菌环:25、22、16、25mm;MIC值:3.57、7.14、3.57、14.28μg/mL。表达产物KRY的抑菌环:26、22、25、18MIC值:3.72、3.14、3.72、6.28μg/mL,尤其对水霉的抑菌效果显着,抑菌环达35mm。(本文来源于《2007年中国水产学会学术年会暨水产微生态调控技术论坛论文摘要汇编》期刊2007-11-01）
韩艳[2]（2007）在《中国鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅰ原核表达及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出抗菌肽是天然免疫的主要组成部分,是动物体液免疫系统中具有广谱杀菌、抑制病毒、抑杀肿瘤细胞等作用的一类膜活性多肽。抗菌肽因为分子量小而且不具备抗原性、耐热、对原核生物细胞具有很高的生物学活性,而对真核生物的正常细胞没有明显的毒副作用而受到广泛关注。为了避免目的产物对工程菌的毒性作用,保证表达产物的稳定性,可以更简便的获得大量的表达产物以及在后续实验中能有效的对表达产物进行检测,本研究进行了中国鲎抗菌肽TachyplesinⅠ原核表达及其多克隆抗体的制备。本研究从中国鲎抗菌肽真核表达载体pPIC9-KRY中PCR扩增抗菌肽TachyplesinⅠ基因(标记为TPⅠ),插入pQE-40中,切下带有运载蛋白DHFR的融合蛋白DHFR- TPⅠ,构建到pQE-80L中,构建中国鲎抗菌肽tachyplesinⅠ的大肠杆菌表达系统,表达中国鲎抗菌肽tachyplesinⅠ基因的融合蛋白DHFR-TPⅠ。SDS-PAGE检测表达并优化表达条件;利用改进的透析袋电洗脱回收蛋白的方法纯化表达产物,经体外抑菌活性测定表明,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、白色念珠菌具有抑菌作用。利用纯化的蛋白免疫成年獭兔,免疫4次后制备DHFR-TPⅠ的多克隆抗体,间接ELISA检测血清效价,SPSS软件分析融合蛋白DHFR-TPⅠ与DHFR之间的关系,Western-blotting检测表达产物与抗体的特异性。本研究抗菌肽TachyplesinⅠ的原核表达及多抗的制备为以后亲和层析提取中国鲎抗菌肽、建立抗菌肽检测方法、抗菌肽异源表达水平的检测奠定基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2007-04-24）
郑伟,韩文瑜,韩俊友,张钫,雷连成[3]（2007）在《中国鲎(Tachypleus tridentatus)基因工程抗菌肽的制备及其抗菌活性》一文中研究指出从中国鲎血细胞RT-PCR扩增抗菌肽tachyplesins基因,经改造构建原核和真核表达载体pET-KRN、pPIC9-KRY,并分别在大肠杆菌DE3和毕赤酵母GS115中诱导表达。用Tris-Tricine SDS-PAGE检测并进一步电洗脱纯化表达产物,经体外生物活性测定表明,表达产物KRN对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、伤寒沙门菌的抑菌环为25、22、25、16mm;MIC值为3.57、7.14、3.57、14.28mg/L。表达产物KRY对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、伤寒沙门菌和李氏杆菌的抑菌环为26、22、25、18、16mm;MIC值为1.57、3.14、1.57、6.28、6.28mg/L,对水霉的抑菌效果尤其显着,抑菌环达35mm。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2007年02期）
韩艳,韩文瑜,雷连成,冯新,程福亮[4]（2006）在《中国鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅰ基因克隆和原核表达载体构建》一文中研究指出以含有tachyplesin I基因的质粒pPIC9-KRY(郑伟博士构建表达载体)为模板,设计引物PCR扩增tachyplesin I基因,得到69bp目的DNA片段,克隆到pMD18T-simple载体进行序列鉴定。酶切后连入载体PQE-40,筛选阳性重组子,进行PCR鉴定和酶切鉴定,阳性重组子命名为PQE-40-SH16。对PQE-40-SH16进行酶切,构建于原核高效表达载体PQE-80L,(本文来源于《2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集》期刊2006-10-01）
张钫[5]（2005）在《中国鲎抗菌肽polyphemusinⅡ基因的改造、克隆及原核表达》一文中研究指出鲎素(tachyplesin)为鲎血液中抗菌肽的总称,具有广谱的杀菌、抑病毒和抗肿瘤作用,因此,已引起国内外学者的广泛关注。但天然鲎的数量有限,人工养殖难度大,利用从鲎血细胞中提取的鲎素天然制品远不能满足需求,而利用分子生物学技术,开发可生产鲎素的工程菌株,是一个切实可行的办法,具有广阔的应用前景。因此,本研究利用经典的分子生物学手段将改造过的中国鲎抗菌肽polyphemusinⅡ的编码序列引入大肠杆菌中表达,以期获得可高效表达抗菌肽polyphemusinⅡ工程菌,使其产业化生产变为可能。本研究的第一部分开展了中国鲎抗菌肽polyphemusinⅡ基因改造和克隆的工作。采集中国鲎的血液,用Trizol试剂提取鲎阿米巴血细胞的总RNA。根据NCBI已发表的美洲鲎抗菌肽polyphemusinⅡ氨基酸序列,设计引物时对原抗菌肽基因进行改造:在其开放阅读框末端添加了Asn密码子,使抗菌肽羧基末端酰胺化,旨在提高其稳定性和抗菌活性,随后以RT-PCR获得经改造的抗菌肽目的片段rr,再将其克隆于载体pMD18-T,并测序,筛选得到中国鲎抗菌肽polyphemusinⅡ基因的阳性克隆。第二部分是原核表达载体的构建、表达及检测。将重组克隆质粒pMD18-T-rr用NdeⅠ、EcoRⅠ进行双酶切消化后,与经相应限制性内切酶消化处理的原核表达载体pET-28c(+)进行连接,并转化E.coli JM109感受态细胞,经PCR和测序确证,得到阳性重组质粒,在宿主菌E.coli..BL21(DE3)中,进行诱导表达。SDS-PAGE检测结果发现表达菌的裂解产物与对照菌相比出现了一条新的蛋白条带,其大小约为2.5KD。薄层扫描结果表明,表达的抗菌肽蛋白占菌体总蛋白的27.21%。经Western blot检测,大约在2.5KD处出现特异性的反应带,说明该表达产物可与天然鲎素阳性血清发生特异性反应.将提取包涵体得到的抗菌肽初提物作抑菌实验,结果发现其在体外表现出明显的抗菌活性。综上所述,本研究成功地将抗菌肽polyphemusinⅡ基因加以改造,并转化大肠杆菌表达,获得具有高效抗菌活性的表达产物,从而为鲎素基因工程研究及其产业化开发和应用奠定了基础。(本文来源于《新疆农业大学》期刊2005-06-01）
郑伟[6]（2005）在《中国鲎（Tachypleus tridentatus）基因工程抗菌肽的制备及其生物活性研究》一文中研究指出本研究从中国鲎血细胞RT-PCR 扩增抗菌肽基因,经改造构建原核和真核表达载体,并在大肠杆菌和酵母菌中诱导表达。用Tris-Tricine SDS-PAGE 检测并进一步纯化表达产物,经体外生物活性测定表明,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、伤寒沙门菌等具有抑菌作用,尤其对水霉的抑菌效果显着,抑菌环达35mm;对人恶性黑色素瘤细胞(A375)、人宫颈癌细胞(HeLa)有毒性,使其脱离细胞培养瓶壁变成球形,还出现细胞碎片。而对正常鸡胚成纤维细胞(CEF)、猪肾细胞(PK)和地鼠肾细胞(BHK)的生长无影响。同时,还进行了表达中国鲎抗菌肽的基因工程酵母菌在感染高致病性大肠杆菌的雏鸡体内治疗,获得与常规药物羟氨苄青霉素相同的疗效。本项研究弥补了从天然中国鲎中提取抗菌肽缺陷,获得了具有生物学活性的抗菌肽基因工程原核和真核表达株,为用基因工程方法生产无毒副作用、无有害残留、不易使细菌产生耐药性的具有多种生物活性中国鲎抗菌肽奠定了基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2005-05-01）
中国鲎抗菌肽论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
抗菌肽是天然免疫的主要组成部分,是动物体液免疫系统中具有广谱杀菌、抑制病毒、抑杀肿瘤细胞等作用的一类膜活性多肽。抗菌肽因为分子量小而且不具备抗原性、耐热、对原核生物细胞具有很高的生物学活性,而对真核生物的正常细胞没有明显的毒副作用而受到广泛关注。为了避免目的产物对工程菌的毒性作用,保证表达产物的稳定性,可以更简便的获得大量的表达产物以及在后续实验中能有效的对表达产物进行检测,本研究进行了中国鲎抗菌肽TachyplesinⅠ原核表达及其多克隆抗体的制备。本研究从中国鲎抗菌肽真核表达载体pPIC9-KRY中PCR扩增抗菌肽TachyplesinⅠ基因(标记为TPⅠ),插入pQE-40中,切下带有运载蛋白DHFR的融合蛋白DHFR- TPⅠ,构建到pQE-80L中,构建中国鲎抗菌肽tachyplesinⅠ的大肠杆菌表达系统,表达中国鲎抗菌肽tachyplesinⅠ基因的融合蛋白DHFR-TPⅠ。SDS-PAGE检测表达并优化表达条件;利用改进的透析袋电洗脱回收蛋白的方法纯化表达产物,经体外抑菌活性测定表明,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、白色念珠菌具有抑菌作用。利用纯化的蛋白免疫成年獭兔,免疫4次后制备DHFR-TPⅠ的多克隆抗体,间接ELISA检测血清效价,SPSS软件分析融合蛋白DHFR-TPⅠ与DHFR之间的关系,Western-blotting检测表达产物与抗体的特异性。本研究抗菌肽TachyplesinⅠ的原核表达及多抗的制备为以后亲和层析提取中国鲎抗菌肽、建立抗菌肽检测方法、抗菌肽异源表达水平的检测奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
中国鲎抗菌肽论文参考文献
[1].郑伟,韩文瑜,韩俊友,张钫,雷连成.中国鲎(Tachypleustridentatus)基因工程抗菌肽的制备及其抗菌活性研究[C].2007年中国水产学会学术年会暨水产微生态调控技术论坛论文摘要汇编.2007
[2].韩艳.中国鲎抗菌肽TachyplesinⅠ原核表达及其多克隆抗体的制备[D].吉林大学.2007
[3].郑伟,韩文瑜,韩俊友,张钫,雷连成.中国鲎(Tachypleustridentatus)基因工程抗菌肽的制备及其抗菌活性[J].中国兽医学报.2007
[4].韩艳,韩文瑜,雷连成,冯新,程福亮.中国鲎抗菌肽TachyplesinⅠ基因克隆和原核表达载体构建[C].2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集.2006
[5].张钫.中国鲎抗菌肽polyphemusinⅡ基因的改造、克隆及原核表达[D].新疆农业大学.2005
[6].郑伟.中国鲎（Tachypleustridentatus）基因工程抗菌肽的制备及其生物活性研究[D].吉林大学.2005