刘洋, 胡利民, 李怡岚, 范祥, 杜嵘[1]2004年在《一种新来源天然冰片与合成冰片的致突变性比较研究》文中研究说明目的与方法采用鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验),比较天然冰片与合成冰片的致突变作用。结果在标准平板掺入法试验中,天然冰片与合成冰片在0.4～250.0μg/皿范围内,无论有或无S9活化系统,对鼠伤寒沙门氏菌突变株(TA97、TA98、TA100、TA102)的回变菌落数均无明显影响,且回变菌落背景正常。结论新来源天然冰片与合成冰片在该实验室条件下均不具致突变效应。
刘洋[2]2003年在《天然冰片与合成冰片的致突变性比较研究》文中研究指明目的冰片有天然冰片和合成冰片之分，数百年来广泛应用于心脑血管疾病和外科疾病的治疗，但有关冰片的安全性研究较少，尤其是冰片的遗传毒性研究至今尚未有报道。本文将体外试验与整体动物试验相结合，比较新来源天然冰片与合成冰片的致突变性，为冰片及含冰片制剂的合理安全应用提供科学依据。方法应用鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株TA97、TA98、TA100、TA102作为测试菌株，在对四菌株的遗传特性鉴定合格的基础上，以SD雄性大鼠肝脏制备微粒体混合功能氧化酶系（S9），在有和无大鼠肝S9活化系统两种条件下，进行鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶回复突变试验（Ames试验），用以检测基因突变；采用染色体核型为25的中国仓鼠肺成纤维细胞（CHL），在有和无大鼠肝S9活化系统两种条件下，进行细胞染色体畸变（CA）试验以检测受试物DNA的损伤；同时应用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核（MN）试验观察染色体畸变情况，对新来源天然冰片和合成冰片的致突变性在基因及染色体水平上进行综合判定与比较。结果1. 在菌株遗传学标记鉴定中，本试验所采用的TA97、TA98、TA100、TA102的遗传特性（组氨酸需求、rfa突变、紫外线敏感、氨苄青霉素抗性、四环素抗性）均符合试验要求，可以用来检验药物的致突变性。2. Ames试验中，在有或无S9活化系统的条件下，合成冰片与天然冰片在0.4～250μg/皿范围内，其所能诱变测试菌株TA97、TA98、TA100、TA102的回变菌落数与溶剂（二甲基亚砜）对照相比均无明显增加，且回变菌落背景正常。而直接诱变剂、间接诱变剂分别在非活化和活化条件下诱发测试菌株回变菌落数明显增加。3. 天然冰片、合成冰片对CHL细胞50%细胞生长抑制浓度（IC50）分别为207.86、85.74（μg·ml－1），相关系数r＞0.9。天然冰片作用于CHL细胞的终浓度分别为200、100、50、25、12.5（μg·ml－1），合成冰片终浓度分别为80、40、20、10、5（μg·ml－1），分别于加药后24h（＋/－S9mix）、48h（－S9mix）收获细胞制备染色体，各剂<WP=6>量组的染色体畸变率＜5%。4. 在CHL细胞染色体畸变试验中，在非活化条件下丝裂霉素C（0.25μg·ml－1）24h和48h两个时相的染色体畸变率分别为38%、45%，活化条件下环磷酰胺 （20μg·ml－1）作用于细胞24h后的染色体畸变率为34%。5. 天然冰片与合成冰片小鼠灌胃给药的LD50分别为4.656、4.881（g/kg·bw）。天然冰片在2.328、1.164、0.582（g/kg·bw）剂量下，对小鼠骨髓嗜多染红细胞的微核细胞率分别为0.3±0.5‰、0.4±0.5‰、0.3±0.5‰；合成冰片在2.4405、1.2203、0.6010（g/kg·bw）剂量下，微核细胞率为0.4±0.7‰、0.3±0.5‰、0.4±0.5‰。各剂量组微核率与阴性对照组比较差异均无显着性（P＞0.05），而均显着低于阳性对照组（P＜0.01）。结论1. 天然冰片与合成冰片在0.4～250μg/皿受试浓度范围内，无论有无S9活化系统，对鼠伤寒沙门氏菌突变株均未显示致突变性，Ames试验结果为阴性。2. 天然冰片与合成冰片各剂量组均未显示诱发CHL细胞染色体畸变率增高的作用，CA试验结果为阴性。3. 天然冰片与合成冰片均无诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率增高的效应，MN试验结果为阴性。4. Ames、CA、MN试验中阳性对照剂的试验结果均呈阳性，表明本试验系统可靠。
文静[3]2017年在《开窍药对永久性局灶性脑缺血模型大鼠神经血管单元的保护机制研究》文中提出目的:探讨艾片(左旋龙脑)、天然冰片(右旋龙脑)、冰片(合成龙脑)、苏合香、安息香五味开窍药的神经血管单元(NVU)保护作用及其相关机制,以阐释开窍药开窍醒神功效的科学内涵;同时比较五味开窍药的药效强弱,为临床组方选药提供参考。方法:(1)采用线栓法制备永久性大脑中动脉栓塞(pMCAO)大鼠模型,记录各组大鼠从麻醉到苏醒的时间,并参照Longa评分法对大鼠神经功能损伤进行评分。(2)采用干湿重法测定pMCAO模型大鼠脑含水量、脑指数及脑水肿率。(3)采用2,3,5-氯化叁苯基四氮唑(TTC)染色法对pMCAO模型大鼠脑组织进行染色观察脑组织梗死情况,并测计算脑梗死率。(4)采用苏木精-伊红(HE)染色法观察pMCAO模型大鼠缺血半暗带脑组织细胞形态,并计算神经元变性细胞指数(DCI)。(5)采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定pMCAO模型大鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。(6)采用实时定量荧光PCR(RT-PCR)法、免疫印迹法(WB)法、免疫组织化学法测定pMCAO大鼠模型缺血半暗带脑组织中Wnt3a、β连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、大肠腺瘤样息肉蛋白(APC)、紧密连接蛋白5(Claudin-5)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA及蛋白的表达。(7)采用透射电镜观察pMCAO大鼠缺血半暗带脑组织中神经元以及血脑屏障超微结构。结果:(1)叁种冰片能显着延长模型大鼠麻醉后苏醒时间(P<0.01),苏合香与安息香对苏醒时间无明显影响;艾片与安息香能显着降低模型大鼠术后24 h的神经行为评分(P<0.05),天然冰片与冰片有降低行为评分的趋势。(2)艾片、冰片、苏合香、安息香能显着降低模型大鼠缺血侧脑含水量、Δ含水量、Δ脑指数(P<0.01);艾片、冰片、安息香能显着降低模型大鼠脑水肿率(P<0.01)。(3)TTC染色结果显示,造模后脑组织可见明显的苍白梗死区,开窍药对脑梗死有不同程度的改善作用,艾片、冰片、苏合香、安息香能显着降低模型大鼠脑梗死率(P<0.01)。(4)HE染色结果显示,造模后大鼠缺血半暗带脑组织出现明显病理学变化,表现为神经组织坏死、液化,形成筛网状病灶,与周围组织有较明显分界,五味开窍药可不同程度改善脑组织病理学变化。艾片、冰片、苏合香、安息香可显着降低模型大鼠缺血脑组织神经细胞DCI(P<0.01)。(5)五味开窍药均能显着升高模型大鼠血清中VEGF的含量,显着降低模型大鼠血清中TNF-α的含量(P<0.05或P<0.01),对NGF及IL-1β无明显影响。(6)总体来看,开窍药有升高pMCAO模型大鼠缺血半暗带脑组织中Wnt3a蛋白、β-catenin mRNA、Dsh1 mRNA、GSK-3βmRNA与蛋白、Claudin5 mRNA与蛋白、Bax mRNA与蛋白、Bcl-2 mRNA与蛋白表达的作用趋势,有降低Wnt3a mRNA、β-catenin蛋白、LEF1 mRNA、APC mRNA与蛋白、Caspase-3 mRNA与蛋白表达以及Bax与Bcl-2表达比值的作用趋势。(7)透射电镜结果显示,模型组大鼠缺血半暗带脑组织神经元的细胞核溶解、双层核膜结构不连贯、细胞浆内细胞器溶解消失,胞浆呈空泡状,毛细血管壁层次增厚,内皮细胞、基底膜和胶质细胞之间的突起之间的间隙增宽,而五味开窍药能不同程度改善模型大鼠脑组织神经元和BBB的超微结构。结论:五味开窍药有促进pMCAO模型大鼠神经功能恢复、降低脑含水量及脑梗死率、减轻神经细胞损伤的作用,可能是开窍药发挥“开窍醒神”功效的主要药效学基础。五味开窍药的药效作用强弱依次为艾片>冰片>安息香>苏合香>天然冰片,提示临床在选用开窍药组方治疗脑缺血相关疾病时首推艾片。开窍药通过调节Wnt/β-catenin信号通路、抑制细胞凋亡、促进微血管新生以及保护BBB而保护神经血管单元,这可能是其综合表达“开窍醒神”的主要生物学机制。五味开窍药的NVU保护机制聚类不同可能与开窍药的寒热药性差异有关。冰片、天然冰片的抑制细胞凋亡可能与其寒凉药性有关,而苏合香与安息香的促微血管新生及保护BBB可能与其温热药性有关。本研究以NVU为切入点探讨开窍药的脑保护作用及机制,研究思路具有中医药整体观特色,研究借助了RT-PCR、免疫印迹及免疫组化等分子生物学手段,并结合了透射电镜等光学成像技术,研究手段具有集成创新,研究结果提示艾片改善脑缺血药效最优,为临床有效合理使用开窍药提供了参考。
参考文献：
[1]. 一种新来源天然冰片与合成冰片的致突变性比较研究[J]. 刘洋, 胡利民, 李怡岚, 范祥, 杜嵘. 中药新药与临床药理. 2004
[2]. 天然冰片与合成冰片的致突变性比较研究[D]. 刘洋. 天津中医学院. 2003
[3]. 开窍药对永久性局灶性脑缺血模型大鼠神经血管单元的保护机制研究[D]. 文静. 成都中医药大学. 2017
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