猪带绦虫Ts14-3-3.3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

论文摘要

目的建立猪带绦虫Ts14-3-3.3蛋白原核表达系统并制备兔多克隆抗体。方法通过逆转录PCR（RT-PCR）技术将猪囊尾蚴总RNA反转录为cDNA,利用特异性引物扩增猪带绦虫Ts14-3-3.3基因,将其克隆至原核表达质粒pCznⅠ中,在大肠杆菌Arctic Express中用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析其表达产物,用HisLink亲和层析柱进行纯化,免疫印迹（Western blot）法鉴定纯化后的Ts14-3-3.3重组蛋白。将纯化的Ts14-3-3.3重组蛋白免疫新西兰兔,制备Ts14-3-3.3多克隆抗体,Western blot和免疫组化法检测Ts14-3-3.3天然蛋白在猪带绦虫成虫和囊尾蚴的分布。结果成功构建猪带绦虫重组表达质粒pCznⅠ-Ts14-3-3.3,经IPTG诱导表达,获得可溶性形式高效表达的Ts14-3-3.3重组蛋白,分子质量约29.31 kD,纯化后带有His标签的Ts14-3-3.3重组蛋白能被抗血清所识别。用纯化的Ts14-3-3.3重组蛋白免疫新西兰兔,获得了Ts14-3-3.3多克隆抗体,其效价为1∶512 000。Western blot和免疫组化结果显示,Ts14-3-3.3天然蛋白在猪带绦虫成虫和囊尾蚴中均有表达。结论成功制备猪带绦虫重组Ts14-3-3.3蛋白,并获得了高纯度、高效价的兔多克隆抗体。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 罗波,李想,周必英

关键词: 猪带绦虫,蛋白,原核表达,多克隆抗体

来源: 中国人兽共患病学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 基础医学

单位: 遵义医科大学寄生虫学教研室

基金: 贵州省科技计划项目（黔科合基础[2018]1190）,省市科技合作专项资金项目（省市科合[2015]52）联合资助~~

分类号: R392-33

页码: 1100-1105

总页数: 6

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标签：猪带绦虫论文;  蛋白论文;  原核表达论文;  多克隆抗体论文;