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拟南芥AtGrp7 RRM结构域的纯化及其结构与结合的初步分析(英文)

2020-12-06阅读(524)

拟南芥AtGrp7 RRM结构域的纯化及其结构与结合的初步分析(英文)

论文摘要

富含甘氨酸的RNA结合蛋白AtGrp7是拟南芥（Arabidopsis thaliana）调节生物钟负反馈回路的组分.在使用常规方法纯化AtGrp7 RRM结构域的初始试验中,观察到烟草蚀纹病毒（TEV）酶切后AtGrp7 RNA识别基序（RRM）结构域的紫外吸收峰为蛋白和杂质的混合信号峰.为解决常规纯化中的杂质问题,对AtGrp71-90应用了变性-复性两步纯化方法. AtGrp7 RRM结构域的1H-15N HSQC指纹谱和CS-Rosetta模型结构表明快速稀释重折叠后其结构完全恢复.等温滴定量热法（ITC）和核磁共振（NMR）滴定实验进一步证实,重折叠后AtGrp71-90RRM结构域具有正确结合RNA/DNA的功能.

论文目录

  • Introduction
  • 1 Materials and methods
  •   1.1 Cloning and overexpression of AtGrp7 RRM domain （AtGrp71-90）
  •   1.2 Protein refolding and purification of AtGrp71-90
  •   1.3 Isothermal titration calorimeter measurements
  •   1.4 NMR spectroscopy
  •   1.5 CS-Rosetta model generation
  • 2 Results and discussion
  •   2.1 Construct design, expression optimization and initial purification of AtGrp71-90
  •   2.2 Purification of AtGrp71-90 by denaturing-refolding
  •   2.3 Verification of refolding and binding of AtGrp71-90
  •   2.4 Structure models and binding analysis of AtGrp71-90
  • 3 Conclusions
  • Supplementary materials:

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 迟秀娟,乔晓亚,刘颖,刘惠丽,陈雷,王际辉,艾选军

    关键词: 变性复性,快速稀释,核磁共振,识别基序结构域,结合分析

    来源: 波谱学杂志 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 大连工业大学生物工程学院,洁净能源国家实验室(中国科学院大连化学物理研究所),国家艾滋病性病防治中心病毒与免疫研究室,波谱与原子分子物理国家重点实验室武汉磁共振中心(中国科学院武汉物理与数学研究所)

    基金: The Liaoning Natural Science Foundation(20170520198,20170520043),Project Supported by the State Key Laboratory ofMagnetic Resonance and Atomic and Molecular Physics(T151601)

    分类号: Q943.2

    页码: 1-14

    总页数: 14

    文件大小: 1263K

    下载量: 96

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