导读:本文包含了文库构建论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:文库,抗体,酵母,抗旱性,噬菌体,库容,粒细胞。
文库构建论文文献综述
简忠领,赵丽丽,王普昶,孙小富,陈超[1]（2019）在《干旱胁迫下耐旱野生百脉根抑制消减文库构建与分析》一文中研究指出百脉根(Lotus corniculatus)是一种具有广阔应用前景的豆科牧草,但推广利用效率受干旱影响严重。为解决这一问题,本课题组经过多年研究,筛选出了高耐旱性百脉根种质B08,为进一步研究B08种质的抗旱机理,本实验运用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization, SSH)技术构建了B08百脉根干旱胁迫诱导基因表达的正反向抑制消减杂交c DNA文库,从正反向文库中各随机挑选600个阳性克隆进行测序分析,结果表明:(1)正反向文库分别得到574条和595条高质量序列,平均长度分别为207.5和242.7 bp。对高质量序列数据进行数据组装,最终得到632条unigenes序列,其中正库获得178条,反库获得454条。(2)将获得的632条unigenes序列与公共数据库进行BLAST比对,最终有147条序列被注释成功,其中80条是功能已知的基因,67条是功能未知基因,此外还发现了485条新基因。(3)对NCBI NonRedundant Protein Sequence Database (nr)注释结果进行物种统计,结果显示与毛果杨(Populus trichocarpa)、苹果(Malus domestica)、菠菜(Spinacia oleracea)、大麦(Hordeum vulgare)、油菜(Brassica napus)、木豆(Cajanus cajan)、鹰嘴豆(Cicer arietinum)、中果咖啡(Coffea canephora)等同源性较高。对正反文库筛选到的序列进行基因本体(Gene Ontology, GO)功能分类,结果显示参与细胞、细胞成分、细胞器、结合活性、代谢过程、催化活性、细胞过程的序列所占比例较大。(4)获得的unigenes涉及植物光合作用、能量代谢、激素的合成、蛋白质代谢、核酸代谢、离子转运和信号转导等。(5)发现了和植物抗旱机制密切相关的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(serine/threonine-protein phosphatase)、类钙调素蛋白(calmodulin-like protein,CML)、吲哚-3-乙酸诱导蛋白ARG7 (indole-3-acetic acid-induced protein ARG7)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)。本研究结果为下一步克隆并验证百脉根抗旱相关基因、发现抗旱相关新基因、研究百脉根抗旱分子机制以及培育高抗旱性百脉根品种提供了基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年12期）
彭华,马金魁,程洁,黄成志,张宏斌[2]（2019）在《Lipocalin噬菌体文库的构建及与FcεRI-α受体结合分子的初步筛选（英文）》一文中研究指出根据Lipocalin蛋白家族的基因序列设计引物,通过PCR重迭延伸得到含随机突变蛋白的基因序列,重组到噬菌粒载体构建随机突变Lipocalin文库。以NSF60细胞对Lipocalin文库进行差减筛选,再用肥大细胞进行亲和筛选,得到结合肥大细胞的Lipocalin次级文库。以FcεRI-α受体蛋白为靶分子对Lipocalin次级文库进行富集筛选,洗脱特异性结合的噬菌体。经过3轮筛选,从第3轮的洗脱克隆中随机挑取8个重组噬菌体克隆。ELISA法检测出3个Anticalins分子能与肥大细胞FcεRI-α受体特异性结合。这为研发肥大细胞FcεRI-α受体阻断药物提供了生物类候选分子,也为Ig E相关的变态反应疾病的生物类小分子药物研发奠定了基础。(本文来源于《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》期刊2019年11期）
迟莹,张文帅,焦永军[3]（2019）在《禽流感病毒H7N9人源性单链抗体文库的构建及鉴定》一文中研究指出目的构建人源性禽流感病毒H7N9单链抗体文库(scFv),并对文库质量进行鉴定。方法分离11例H7N9恢复期患者外周血中的单个核淋巴细胞(PBMC),提取总RNA,逆转录成cDNA;并以此为模板PCR扩增人源性抗体重链可变区(VH)及轻链可变区(Vκ),再通过重迭PCR法将VH和Vκ基因随机拼接成scFv文库;将构建的scFv文库克隆入噬菌体载体pComb3XSS中,电转化感受态细胞XL1-Blue,制备成完整的人源性禽流感病毒H7N9单链抗体文库;通过计算菌落数量及基因测序检测分析scFv文库的库容量及多样性。结果构建的人源性禽流感病毒H7N9单链抗体文库的库容为1.67×107,测序结果显示scFv文库多样性好,scFv基因阳性率为94.0%,准确率为95.7%。结论成功构建人源性禽流感病毒H7N9单链抗体文库,为后续筛选特异性中和抗体提供了基础。(本文来源于《江苏预防医学》期刊2019年06期）
宋丹丹,王龙,魏红静,史文竞,朱传坤[4]（2019）在《克氏原螯虾微卫星文库构建及多态性分析》一文中研究指出采用磁珠富集法构建了克氏原螯虾(GT)_n重复类型的微卫星富集文库。随机检测了82个克隆,其中有78个为阳性,阳性率达95.1%。对75个阳性单克隆进行测序后,共获得序列57条,其中43条含有微卫星序列,微卫星富集效率为75.4%。根据43条含微卫星的序列共设计了21对引物,其中18对可扩增出稳定条带,并且有9对表现为多态性。在测试群体中对9个多态标记的检测结果显示,等位基因数为2～6个(平均4个),观测杂合度为0.3522～0.6667(平均0.5856),期望杂合度为0.3704～0.8390(平均0.6291),多态信息含量为0.2859～0.8001(平均0.5584)。本研究开发的微卫星标记将为今后克氏原螯虾及其近缘物种的群体遗传结构分析、种质资源保护、遗传图谱构建等遗传学和基因组学研究提供有利工具。(本文来源于《水产科学》期刊2019年06期）
姬凯元,齐淑慧,刘博,蒋书东,范瑞文[5]（2019）在《黑色素瘤细胞单域抗体文库的构建及鉴定》一文中研究指出黑色素瘤作为一种多发于皮肤部位的恶性肿瘤,严重危害着动物和人们的健康。与传统抗体比较,单域抗体具有结构简单、分子量小、免疫原性弱等特点,使其在疾病的诊断及治疗方面具有广阔的应用空间。本研究以B16-F10细胞蛋白质为研究对象,通过反复冻融与超声破碎相结合的方式获得B16-F10蛋白质作为抗原,免疫成年雄性羊驼。采用噬菌体单域抗体展示技术,构建了质量优良的B16-F10细胞蛋白质单域抗体免疫文库,其库容为5.76×10~(10),VHH重组率为96%,文库丰度为3.00×10~(10)个/mL。该结果为研究黑色素瘤的生物学特性提供了新思路,同时也为后续筛选B16-F10单域抗体奠定了基础。(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2019年11期）
王长江,曲光刚,武曰星,管宇,魏凤[6]（2019）在《猪圆环病毒2型特异性纳米抗体文库的构建及鉴定》一文中研究指出为构建猪圆环病毒2型(PCV2)特异性纳米抗体文库,并对其库容和多样性进行鉴定分析,使用PCV2全病毒灭活疫苗免疫羊驼,经四次免疫后采血分离外周血淋巴细胞,提取总RNA,通过RT-PCR反转录合成cDNA;根据羊驼重链抗体基因序列设计特异性引物,通过巢式PCR扩增羊驼单域重链抗体(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody,VHH)基因片段vhh,并将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB 5E中,构建pCANTAB-vhh重组质粒;通过电穿孔法将重组质粒导入E. coli TG1获得抗PCV2特异性纳米抗体基因文库。文库菌梯度稀释后计数单克隆菌落数,并通过菌液PCR鉴定重组菌阳性率,计算抗体文库库容量;对PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序,分析抗体文库多样性。结果显示,构建的PCV2特异性纳米抗体文库重组菌阳性率为92.0%,库容量为2.75×1010CFU/m L;测序后序列比对分析结果表明,纳米抗体文库包含的基因序列具有丰富的多样性。本研究成功构建了PCV2特异性纳米抗体文库,且文库质量满足后续试验要求,为进一步获得针对PCV2抗原的纳米抗体奠定了基础。(本文来源于《中国兽药杂志》期刊2019年11期）
董道英,孔凡娜,崔正彩,孙斌[7]（2019）在《条斑紫菜酵母双杂交文库的构建及PyMAPK5互作蛋白的筛选》一文中研究指出为进一步研究条斑紫菜促分裂原活化激酶家族PyMAPK5的下游互作蛋白,理解其生物学功能,本研究通过酵母双杂交的方法进行其相互作用蛋白的筛选。提取不同温度和失水逆境胁迫下的RNA,利用Invitrogen体系构建条斑紫菜酵母双杂交cDNA文库,其库容为1.44×107CFU,重组率为91.8%。以pGBKT7-PyMAPK5为诱饵蛋白载体,利用共转化方法,从文库中筛选得到26个与PyMAPK5互作的候选蛋白。候选蛋白集中在光系统II相关蛋白、捕光蛋白、微管蛋白、ATP酶、GTP结合蛋白及假设蛋白等。微管蛋白、捕光蛋白、光系统II蛋白一对一验证结果为阳性,表明在酵母体内存在互作。本研究为阐明条斑紫菜PyMAPK5与其互作蛋白的关系及解析PyMAPK5下游作用机制奠定了基础。(本文来源于《海洋与湖沼》期刊2019年06期）
李晓月,王春来,倪宏波[8]（2019）在《猪肾上皮细胞（PK-15）酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定》一文中研究指出应用SMART技术构建猪肾上皮细胞(PK-15)酵母双杂交cDNA文库,为进一步筛选与副猪嗜血杆菌(HPS)细胞致死膨胀毒素(CDT)不同亚基蛋白相互作用蛋白奠定基础。提取PK-15的总RNA,经LD-PCR合成双链cDNA,运用SMART技术,再通过同源重组的方法,构建了PK-15细胞的酵母cDNA文库。经检测,文库滴度达到了2.8×108CFU·mL-1,插入的双链cDNA片段范围为300～1 000 bp,片段平均大小为500 bp。此文库可用于筛选与HPS CDT不同亚基蛋白相互作用的蛋白,这将为治疗靶点的选择、基因缺失弱毒活疫苗的设计提供科学依据。(本文来源于《黑龙江八一农垦大学学报》期刊2019年05期）
张曦,潘玉卿,李静芳,杨伟,高艳章[9]（2019）在《人早幼粒细胞cDNA文库的构建及其鉴定》一文中研究指出目的:构建人早幼粒细胞HL60的cDNA文库,阐明文库内相关基因在急性早幼粒细胞白血病(APL)发生发展中的相关机制。方法:采用Trizol法提取HL60细胞总RNA,离心柱法分离纯化样本中的mRNA,逆转录PCR法合成cDNA第一链,酶促法直接合成cDNA第二链,胶回收目的长度的cDNA片段后将其与pPR3-N载体连接,通过同源重组方法在酵母Y187菌株中构建人早幼粒细胞cDNA文库。将培养的菌液涂布于LB平板进行库容量鉴定,PCR法鉴定插入片段大小及分布。结果:提取到的HL60细胞RNA条带清晰无降解且弥散度低,以纯化后的细胞mRNA为模板成功合成cDNA,经胶回收cDNA片段后顺利将其与pPR3-N载体连接。将重组载体转化至酵母菌株Y187,通过同源重组方法在菌株中成功构建人早幼粒细胞cDNA文库。在原始电转化菌稀释100倍后取10μL涂板,共长约250个克隆子,库容量为2.5×10~(6 )CFU·mL~(-1),转化后原始菌液共计5mL,总库容量为1.25×10~(7 )CFU。文库的插入片段电泳检测,平均插入片段大于1 200bp,阳性率为100%。结论:成功构建人早幼粒细胞的cDNA文库,为白血病的发病机制及治疗机制的研究奠定了基础。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2019年05期）
邹禹,刘园园,钱宝云,占新春,郑乐娅[10]（2019）在《水稻高盐胁迫下的酵母双杂交文库构建及OsRPK1胞内互作蛋白质的筛选》一文中研究指出为了挖掘水稻OsRPK1胞内互作蛋白质,阐明OsRPK1参与高盐胁迫的分子机制,本研究利用SMART技术,构建水稻高盐胁迫下根尖的酵母双杂交文库。PCR扩增获得OsRPK1基因编码胞内区域的碱基序列,构建诱饵表达载体(pGBKT7-OsRPK1-CD),检测诱饵表达载体在酵母中的毒性和自激活活性,筛选OsRPK1胞内互作蛋白,进一步分析高盐胁迫下候选基因的表达模式。结果表明,构建的cDNA文库库容量为1.11×10~7 CFU,文库重组率为96%,文库插入片段多态性较好。成功构建了诱饵表达载体(pGBKT7-OsRPK1-CD),经检测诱饵表达载体无毒性,无自激活活性。诱饵表达载体与cDNA文库进行双杂交筛选,经测序和比对分析获得了11个重要的候选基因,检测候选基因在高盐处理下的表达情况,其中8个候选基因受高盐诱导表达,2个候选基因受高盐胁迫抑制表达,1个候选基因受高盐胁迫瞬时诱导表达后表达量又受到显着抑制。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2019年04期）
文库构建论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
根据Lipocalin蛋白家族的基因序列设计引物,通过PCR重迭延伸得到含随机突变蛋白的基因序列,重组到噬菌粒载体构建随机突变Lipocalin文库。以NSF60细胞对Lipocalin文库进行差减筛选,再用肥大细胞进行亲和筛选,得到结合肥大细胞的Lipocalin次级文库。以FcεRI-α受体蛋白为靶分子对Lipocalin次级文库进行富集筛选,洗脱特异性结合的噬菌体。经过3轮筛选,从第3轮的洗脱克隆中随机挑取8个重组噬菌体克隆。ELISA法检测出3个Anticalins分子能与肥大细胞FcεRI-α受体特异性结合。这为研发肥大细胞FcεRI-α受体阻断药物提供了生物类候选分子,也为Ig E相关的变态反应疾病的生物类小分子药物研发奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
文库构建论文参考文献
[1].简忠领,赵丽丽,王普昶,孙小富,陈超.干旱胁迫下耐旱野生百脉根抑制消减文库构建与分析[J].农业生物技术学报.2019
[2].彭华,马金魁,程洁,黄成志,张宏斌.Lipocalin噬菌体文库的构建及与FcεRI-α受体结合分子的初步筛选（英文）[J].JournalofChinesePharmaceuticalSciences.2019
[3].迟莹,张文帅,焦永军.禽流感病毒H7N9人源性单链抗体文库的构建及鉴定[J].江苏预防医学.2019
[4].宋丹丹,王龙,魏红静,史文竞,朱传坤.克氏原螯虾微卫星文库构建及多态性分析[J].水产科学.2019
[5].姬凯元,齐淑慧,刘博,蒋书东,范瑞文.黑色素瘤细胞单域抗体文库的构建及鉴定[J].中国生物化学与分子生物学报.2019
[6].王长江,曲光刚,武曰星,管宇,魏凤.猪圆环病毒2型特异性纳米抗体文库的构建及鉴定[J].中国兽药杂志.2019
[7].董道英,孔凡娜,崔正彩,孙斌.条斑紫菜酵母双杂交文库的构建及PyMAPK5互作蛋白的筛选[J].海洋与湖沼.2019
[8].李晓月,王春来,倪宏波.猪肾上皮细胞（PK-15）酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定[J].黑龙江八一农垦大学学报.2019
[9].张曦,潘玉卿,李静芳,杨伟,高艳章.人早幼粒细胞cDNA文库的构建及其鉴定[J].吉林大学学报(医学版).2019
[10].邹禹,刘园园,钱宝云,占新春,郑乐娅.水稻高盐胁迫下的酵母双杂交文库构建及OsRPK1胞内互作蛋白质的筛选[J].江苏农业学报.2019
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