导读:本文包含了中性粒细胞活化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:活化蛋白C,VLA-3,中性粒细胞,严重炎症
中性粒细胞活化论文文献综述
董波,沙影丽,闫雯雯,庄金宝[1]（2019）在《活化蛋白C通过靶向VLA-3-中性粒细胞亚群减轻小鼠的严重炎症反应的机制》一文中研究指出研究活化蛋白C通过靶向VLA-3中性粒细胞亚群来减轻小鼠的严重炎症反应的机制。75只小鼠分为3组:对照组(健康小鼠,n=25)、严重炎症组(脓毒症小鼠,n=25)和活化蛋白C组(脓毒症小鼠通过尾静脉注射活化蛋白C,n=25);通过蛋白质免疫印迹检测整联蛋白VLA-3在中性粒细胞中上调表达;通过整联蛋白结合实验,确定与活化蛋白C以高亲和力相互作用整联蛋白;通过流式细胞仪验证活化蛋白C和VLA-3之间对中性粒细胞的相互作用;通过苏木精和曙红染色检测小鼠组织学变化;通过RT-qPCR检测炎症细胞因子(TNF-α、IL-6和IL-10)mRNA表达水平;检测小鼠在手术后静脉注射活化蛋白C后存活率。与对照组(1. 32±0. 21)相比,严重炎症组(4. 57±0. 56) VLA-3表达量升高(P <0. 05),而VLA-5(1. 25±0. 24)和αVβ3(1. 27±0. 13)与对照组(1. 24±0. 33,1. 29±0. 28)相比无统计学意义(P> 0. 05);与VLA-5 (0. 66±0. 05)和αVβ3 (0. 68±0. 08)整联蛋白相比,VLA-3(1. 76±0. 25)对活化蛋白C组表现出高亲和力,且与严重炎症组(0. 66±0. 12)相比升高(P <0. 05);活化蛋白C组与VLA-3发生特异性结合,VLA-5、αVβ3与活化蛋白C组几乎不发生反应结合。与严重炎症组相比,活化蛋白C组值升高,而阻断剂降低活化蛋白C与VLA-3间的结合(P <0. 05);与对照组相比,严重炎症组充血严重,中性粒细胞聚集和血管内微血栓形成,而活化蛋白C治疗后,减少脓毒症所造成的中性粒细胞增加;严重炎症组TNF-α、IL-6和IL-10 mRNA表达水平较对照组提高,与严重炎症组相比,活化蛋白C组TNF-α、IL-6和IL-10 mRNA表达水降低,有较好的抗炎作用(P <0. 05);活化蛋白C组,小鼠存活率(18只,72. 00%)较严重炎症组(7只,28. 00%)高(P <0. 05)。活化蛋白C通过靶向VLA-3-中性粒细胞亚群,降低炎症细胞因子相关基因的表达,从而减轻小鼠的严重炎症反应。(本文来源于《药物生物技术》期刊2019年05期）
张慧[2]（2019）在《烟草诱导的中性粒细胞诱捕网对髓样树突状细胞的活化作用及红霉素干预的实验研究》一文中研究指出第一部分 吸烟者与稳定期慢性阻塞性肺疾病患者痰中性粒细胞诱捕网和外周血髓样树突状细胞的表达及意义目的:探讨吸烟者、稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者痰中性粒细胞诱捕网(NETs)和外周血髓样树突状细胞(mDCs)的表达及意义方法:于2017年5月至2018年5月在广西医科大学第一附属医院门诊收集稳定期慢性阻塞性肺疾病患者32例的诱导痰和外周血。同期收集肺功能正常的吸烟者16例及肺功能正常的非吸烟者16例的诱导痰和外周血。采用免疫荧光法观察各组诱导痰NETs的形成。Picogreen荧光定量法检测各组诱导痰中NET-DNA的含量。流式细胞术检测各组外周血mDCs活化程度的表型特征和辅助性T淋巴细胞1(Th1)和辅助性T淋巴细胞17(Th17)的比例。采用Spearman相关分析对NETs水平与年龄、吸烟指数、体重指数、肺功能等进行相关性评价。最后对痰NET-DNA的水平和外周血mDCs表面共刺激分子CD40、CD86的表达,和辅助性T细胞中Th1和Th17的比例进行相关性分析。结果:(1)与肺功能正常的吸烟者和肺功能正常非吸烟者相比,COPD患者诱导痰中的NET-DNA明显升高,结果具有统计学差异。但肺功能正常的吸烟者和非吸烟者相比,二者诱导痰中NET-DNA水平无统计学差异。(2)COPD患者外周血CD40~+mDCs和CD86~+mDCs和外周血Th1、Th17的比例均较肺功能正常的吸烟者和非吸烟者升高,结果均具有统计学差异。而肺功能正常者中的吸烟者与非吸烟者相比,外周血CD86~+mDCs升高,结果具有统计学差异,但外周血CD40~+mDCs和外周血Th1、Th17的比例无明显差异。(3)COPD患者痰NETs水平与FEV_1/预计值呈负相关,与GOLD分级呈正相关,与年龄、吸烟指数、体重指数无关。(4)COPD患者痰NETs水平与外周血mDCs的CD40和外周血Th1细胞比例呈正相关,与CD86和Th17无明显相关性。结论:COPD患者痰中的NETs水平显着增高并与气流受限程度相关,可作为评价COPD疾病严重程度的生物标志物之一。COPD患者树突状细胞活化和Th1细胞反应可能与痰NETs的升高有关。吸烟状态下气道中NETs的量可能反映了个体对COPD疾病的易感性。第二部分 烟雾提取物诱导的NETs活化树突状细胞并影响Th1和Th17分化的细胞实验目的:探讨烟草烟雾提取物(CSE)诱导的中性粒细胞诱捕网(NETs)对髓样树突状细胞活化作用,观察NETs通过树突状细胞对Th1和Th17分化的影响。方法:使用淋巴细胞分离液分离健康者静脉血中的PBMCs,用贴壁法得到单核细胞,用1000U/ml GM-CSF和500U/ml IL-4诱导6天得到人单核来源的树突状细胞(MoDCs)。用Histopaque 1119+Percoll法分离COPD患者血中的中性粒细胞。用CSE诱导中性粒细胞生成NETs,并用AluI酶切法分离NETs。用以上分离提取的NETs刺激MoDCs并继续培养15小时,流式细胞术检测NETs刺激结束后MoDCs上共刺激分子CD40、CD86和HLA-DR的表达情况,并与未经NETs刺激的MoDCs的以上指标进行对比;ELISA检测各组MoDCs上清中的IL-1β、IL-12、和TNF-α浓度。免疫磁珠法分离健康者PBMCs中的初始CD4~+T淋巴细胞,与经NETs刺激的MoDCs进行共培养4天。流式细胞术检测共培养后初始CD4~+T淋巴细胞的分化成Th1和Th17的比例。结果:(1)经过CSE诱导的NETs刺激的MoDCs表面共刺激分子CD40、CD86和HLA-DR均较未予NETs刺激的MoDCs升高,差异均具有统计学意义。(2)经过CSE诱导的NETs刺激的MoDCs上清中IL-1β、IL-12、和TNF-α的浓度均较单纯MoDCs培养孔上清中的含量明显升高,差异均具有统计学意义。(3)初始CD4~+T淋巴细胞与MoDCs共培养4天,与对照组相比,经NETs刺激的MoDCs与初始CD4~+T淋巴细胞共培养产生Th1和Th17的比例增多,结果具有统计学意义。结论:CSE诱导的NETs可促进MoDCs产生IL-1β、IL-12、和TNF-α,并促进MoDCs的成熟和活化。经过NETs活化后的MoDCs可促进初始CD4~+T淋巴细胞向Th1和Th17分化。第叁部分 红霉素抑制烟草烟雾提取物诱导中性粒细胞诱捕网生成的作用和机制探讨目的:探讨红霉素抑制烟草烟雾提取物(CSE)诱导的中性粒细胞诱捕网(NETs)的作用和可能机制。方法:抽取10例稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者静脉血,用Histopaque 1119+Percoll法分离提纯外周血中性粒细胞。用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)抑制剂二亚苯基碘(DPI)或红霉素(终浓度10μg/ml)对中性粒细胞进行预孵育30min处理,随后加入CSE刺激4小时诱导NETs生成。实验中设置CSE单纯刺激孔、CSE+红霉素干预孔、CSE+DPI干预孔、单纯红霉素孔、单纯DPI孔和培养基空白对照孔。荧光法观察各孔中性粒细胞NETs形成。用Picogreen法观察各孔细胞上清NET-DNA的水平,用蛋白酶底物显色法及ELISA检测各组中NETs相关的中性粒弹性蛋白酶(NE)和髓过氧化物酶(MPO)的浓度。另外抽取6例COPD患者静脉血,相同方法分离中性粒细胞。向中性粒细胞加入DPI或红霉素(终浓度10μg/ml)进行预孵育30min处理,加入CSE刺激1小时后收取中性粒细胞进行2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)标记30min,随后用流式细胞术检测各组中性粒细胞DCFH-DA的平均荧光强度(MFI),即代表胞内活性氧(ROS)水平。结果:(1)与培养基空白对照相比,CSE单纯刺激孔产生更多的NET-DNA,同时NETs相关的NE和MPO的浓度更高,结果具有统计学意义。(2)CSE+DPI干预孔的NET-DNA较CSE单纯刺激孔的NET-DNA减少,结果具有统计学意义,提示DPI可以抑制CSE刺激诱导的NETs。(3)CSE+红霉素干预孔的NET-DNA较CSE单纯刺激孔的NET-DNA减少,同时CSE+红霉素干预孔的NETs相关NE和MPO的浓度较CSE单纯刺激孔减少,结果均具有统计学意义。(4)CSE+DPI干预孔的中性粒细胞的DCFH-DA的MFI较CSE单纯刺激孔的MFI减低;CSE+红霉素干预孔的中性粒细胞的MFI也较CSE单纯刺激孔的MFI减低,结果均具有统计学意义,提示DPI及红霉素均可以抑制CSE刺激诱导中性粒细胞产生ROS。结论:CSE刺激下产生NADPH依赖的活性氧(ROS)反应可能是烟草烟雾暴露诱导NETs生成的机制之一。红霉素可能通过抑制中性粒细胞的NADPH氧化酶依赖的ROS反应从而减少NETs的产生。红霉素亦可能通过抑制NE和MPO减少NETs形成。第四部分 红霉素抑制小鼠体内中性粒细胞诱捕网及树突状细胞活化对烟草相关肺部炎症的影响目的:探讨红霉素抑制小鼠体内中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)及树突状细胞活化及对烟草相关肺部炎症的影响。方法:领取30只野生型雄性C57BL/6J小鼠(鼠龄6-8周),由广西医科大学动物实验中心提供。用随机数字表法将30只小鼠分为烟草烟雾暴露组(CS)、烟草烟雾暴露下红霉素干预组(EM)和空气暴露对照组(Air)。CS组和EM组给予烟草烟雾暴露24周。其中,EM组从第12周末开始给予红霉素(100mg/kg/d)灌胃处理,至24周结束。Air组给予空气伪暴露24周。第24周末,将各组小鼠处死。留取各组肺泡灌洗液(BALF),用Picogreen法检测各组BALF中的NET-DNA水平,并用ELISA方法检测BALF中NETs相关成分NE、MPO、组蛋白3和瓜氨酸化的组蛋白3(CITH3)的浓度。各组小鼠左肺上叶经固定、包埋、切片后行病理HE染色并计算平均内衬间隔(MLI)。各组小鼠的脾脏和肺脏制备单细胞悬液并用流式细胞术检测肺髓样树突状细胞(mDCs)上CD40和CD86的表达,以及脾肺中Th1、Th17比例。结果:(1)与Air组相比,CS组小鼠BALF中的NETs水平、游离NE、MPO、Histone 3和CITH3及中性粒细胞比例明显升高,结果均具有统计学差异;与CS组相比,EM组小鼠BALF中的NETs水平、游离NE、MPO和Histone 3和中性粒细胞比例明显降低,结果均具有统计学差异。(2)与Air组相比,CS组小鼠肺部mDCs的共刺激分子CD40和CD86升高,肺部和脾脏Th1和Th17比例升高;与CS组相比,EM组小鼠肺部mDCs的共刺激分子CD40和CD86降低,肺部和脾脏Th1和Th17比例降低,结果均具有统计学差异。(3)CS组的MLI较Air组升高,而EM组的MLI较CS组降低,结果均具有统计学差异。相关性分析结果提示MLI与NETs水平、m DCs上CD40和CD86的表达、Th1和Th17比例均呈正相关,结果具有统计学意义。结论:烟草暴露下小鼠气道内的NETs水平与树突状细胞的活化和Th1和Th17细胞反应成正相关。红霉素干预可减少小鼠气道内NETs,同时减轻获得性免疫反应。红霉素可能通过减少NETs的产生从而对树突状细胞活化产生一定负向调控作用从而减轻烟草相关肺部炎症。(本文来源于《广西医科大学》期刊2019-05-01）
王静文,杨涛,仝延萍,康越之,程翠翠[3]（2019）在《补肾益髓胶囊对缓解期视神经脊髓炎患者外周血上皮嗜中性粒细胞活化肽78表达水平的影响》一文中研究指出目的:观察补肾益髓胶囊对缓解期视神经脊髓炎(NMO)患者上皮嗜中性粒细胞活化肽78(ENA 78)及相关细胞因子白介素-1β(IL-1β)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的影响,探讨补肾益髓胶囊调节缓解期NMO患者中性粒细胞活性的作用机制。方法:评估25例缓解期NMO患者规律使用补肾益髓胶囊治疗3个月前后的扩展残疾状态量表(EDSS)评分及中医症状评分,使用人高敏感性多细胞因子试剂盒检测治疗前后血浆ENA 78、IL-1β和TNF-α表达水平。结果:经补肾益髓胶囊干预3个月后,患者中医症状评分较前降低(P<0.01),EDSS评分差异无统计学意义,血浆中细胞因子ENA 78、IL-1β、TNF-α表达量较治疗前均降低(P<0.01,P<0.05)。结论:补肾益髓胶囊可以降低缓解期NMO患者的中医症状评分,其部分机制可能是通过降低缓解期NMO患者外周血IL-1β与TNF-α水平进而降低ENA 78的表达水平,减轻由ENA 78介导的中性粒细胞炎性反应。(本文来源于《中华中医药杂志》期刊2019年03期）
苗笛,陈旻,赵明辉[4]（2018）在《血小板活化在抗中性粒细胞胞浆抗体相关小血管炎发病机制中的作用》一文中研究指出抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophil cytoplasmic antibody,ANCA)相关小血管炎(ANCA-associated vasculitis,AAV)是我国常见的自身免疫性疾病,可累及全身多系统,其中肾脏和肺脏是最常受累的时候器官,常表现为大量血尿、急性肾衰竭和肺出血,疾病进展迅速,预后凶险。血小板作为免疫和炎症细胞,与多种自身免疫性疾病的发病机制相关。本课题旨在研究AAV中血小板活化机制及在发病机制中的作用。回顾性分析525例AAV患者在急性期和缓解期血常规检查中血小板计数和平均血小板体积。应用流式分析检测血小板活化状态、白细胞与血小板的粘附水平和血小板释放的微颗粒。急性期和缓解期患者血小板各15例,应用凝血酶激活后,利用生物芯片技术定量测定血小板释放物中640种细胞因子。这些数据与临床和肾脏病理指标进行相关性分析。进一步研究AAV患者中血小板的活化机制,在患者血浆中加入凝血酶抑制剂PPACK或酶激活受体1结合位点阻断剂SCH79797,研究凝血酶-酶激活受体信号通路在血小板激活中的作用。将患者血浆激活的血小板与Ca/Mg-Tyrode's和Mg-EGTA的反应液共孵育,检测液相中补体活化产物水平以及血小板表面补体沉积,阐明血小板活化补体的途径。AAV患者血小板计数急性期显着高于缓解期,而平均血小板体积则急性期显着低于缓解期。血小板表面P-selectin (CD62P)表达水平及与中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞的粘附水平均显着高于缓解期者,同时活动期患者血小板释放的微颗粒,约占43%,显着高于白细胞和内皮细胞释放的。活动期患者微颗粒中含有147个高表达的促炎因子显着高于缓解期者。临床相关分析发现,血小板的活化水平与疾病活动度、炎症指标及肾脏损伤高度相关。与健康人血浆相比,患者急性期血浆在体外可以激活血小板,凝血酶和酶激活受体抑制剂均可抑制血小板的活化。患者急性期血浆激活的血小板可活化补体旁路途径,液相中补体旁路蛋白浓度显着增加,血小板表面沉积的补体旁路蛋白显着高于对照组。在AAV患者体内血小板是激活的,其活化是通过凝血酶-酶激活受体信号通路实现的。血小板在激活后发挥了一系列致病作用,包括活化补体旁路途径、释放含有的大量促炎因子的微颗粒。从而ANCA-中性粒细胞-补体-血小板形成的正反馈环路,可能导致血管炎的发生发展。(本文来源于《第十叁届全国免疫学学术大会分会场交流报告》期刊2018-11-07）
王伟,曲春生,陈佳琦,丁友法[5]（2018）在《胃癌患者外周血中性粒细胞凋亡、活化状态及功能研究》一文中研究指出目的观察胃癌患者外周血中性粒细胞凋亡、活化状态; ROS产生能力;对胃癌细胞MGC-803的杀伤能力。方法 20例来自作者医院的胃癌初发患者,以及20例健康献血者。在提取中性粒细胞之后,用流式细胞技术检测2组中性粒细胞的Caspase3和CD66b的表达情况;用ELISA法检测2组中性粒细胞的活性氧含量;与胃癌细胞株MGC-803共培养检测2组中性粒细胞的肿瘤细胞杀伤能力。结果 Caspase3在胃癌患者外周血中性粒细胞中的表达(13. 05%±14. 46%)较健康人群(48. 08%±35. 31%)明显降低,差异有统计学意义(P <0. 01);但CD66b的表达在两者中差异无统计学意义(P> 0. 05)。胃癌患者外周血中性粒细胞活性氧含量明显低于健康对照组(P <0. 001),且对肿瘤的杀伤能力降低。结论胃癌患者外周血中性粒细胞的凋亡率降低,但是活化程度未有变化。胃癌患者外周血中性粒细胞活性氧释放能力降低,且杀伤能力降低。(本文来源于《中国卫生检验杂志》期刊2018年20期）
张振凯[6]（2018）在《sDR5-Fc抑制中性粒细胞浸润及活化减轻心肌缺血—再灌注损伤》一文中研究指出背景:为避免长时间缺血导致心肌受损加重,利用溶栓、经皮冠状动脉介入术、冠状动脉搭桥等方式,使缺血的心肌恢复血液灌注。但血液再灌注能够引起心肌损伤加重,这种现象称为心肌缺血-再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)损伤。多重因素参与心肌I/R损伤,其中来自外周血中的中性粒细胞是导致心肌损伤加重的因素之一。中性粒细胞是心肌I/R损伤中的一种标志性细胞。当心肌发生I/R后,大量的中性粒细胞聚集在心肌损伤区域。一部分中性粒细胞在心肌毛细血管处聚集,堵塞毛细血管,使再灌注的心肌出现“无复流”现象;另一部分中性粒细胞趋化到受损的心肌组织,使心肌组织炎症反应加剧。我们先前的研究结果显示sDR5-Fc能够减轻心肌I/R损伤,但其保护作用的潜在机制并不完全清楚。中性粒细胞浸润及活化能够使心肌I/R损伤加重,因此我们猜想sDR5-Fc能否通过调控中性粒细胞发挥其对心肌组织的保护作用。目的:通过构建急性心肌I/R损伤动物模型以及H9c2细胞缺氧-复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)模型,验证sDR5-Fc能否通过抑制中性粒细胞浸润及活化减轻心肌I/R损伤。方法:为验证sDR5-Fc抑制中性粒细胞浸润到受损的心肌组织。我们通过结扎大鼠冠状动脉构建大鼠急性心肌梗死模型,利用小动物心电图仪检测急性心肌梗死模型是否构建成功,利用TTC染色检测大鼠心肌I_1R_(24)h模型是否构建成功;通过Evans blue-TTC染色、ELISA检测肌钙蛋白I(cTnI)的含量,评估sDR5-Fc能否减轻大鼠心肌I/R损伤;通过MPO免疫组织化学染色检测心肌组织中中性粒细胞的含量,评估sDR5-Fc对中性粒细胞浸润的抑制作用;利用流式细胞术、MPO免疫组织化学染色检测中性粒细胞抗体(Anti-Rat PMN)耗竭大鼠中性粒细胞的效果;通过TTC染色、HE染色、TUNEL,对比sDR5-Fc与Anti-Rat PMN对心肌组织的保护作用。为验证sDR5-Fc对中性粒细胞活化的抑制作用,我们利用中性粒细胞分离液,分离大鼠外周血中性粒细胞;利用低氧工作站建立H9c2细胞H_2R_3h模型;利用Hoechst、MTS检测sDR5-Fc是否通过抑制共培养体系中中性粒细胞的活化,减轻H9c2细胞损伤;利用qPCR、ELISA验证sDR5-Fc阻断TRAIL诱导的中性粒细胞的活化。结果:大鼠冠状动脉结扎后,大鼠心电图S-T段明显抬高,大鼠急性心肌梗死模型构建成功;TTC染色显示:I_1R_(24)h组大鼠心脏梗死区重量约占左心室重量的50%,大鼠心肌I_1R_(24)h模型构建成功;Evans blue-TTC染色以及ELISA结果显示:与PBS组相比sDR5-Fc组能够明显减少大鼠心肌梗死面积以及外周血cTnI的含量;MPO免疫组织化学染色结果显示:sDR5-Fc能够抑制中性粒细胞对受损心肌组织的浸润;TTC染色、HE染色、TUNEL结果显示:sDR5-Fc能够抑制中性粒细胞浸润减轻大鼠心肌I/R损伤。以上结果说明:sDR5-Fc通过抑制中性粒细胞对受损心肌组织的浸润减轻大鼠心肌I/R损伤。在细胞实验中,血细胞计数仪、流式细胞术以及瑞氏-吉姆萨染色结果显示:分离得到的中性粒细胞的纯度占89%以上,中性粒细胞分离成功;MTS、LDH结果显示:心肌细胞在H_2R_3h时,H9c2细胞活力降低,LDH释放增多,因此选择H_2R_3h为H9c2细胞H/R的最佳时间点;Transwell实验显示:H9c2细胞在H_2R_3h时有大量中性粒细胞从上室穿到下室,说明H/R后的H9c2细胞对中性粒细胞产生强烈的趋化作用;Hoechst结果显示:中性粒细胞能够增加H9c2细胞凋亡,sDR5-Fc能够抑制由中性粒细胞引起的H9c2细胞凋亡;MTS结果显示:sDR5-Fc能够减轻中性粒细胞对H9c2细胞造成的活力受损,说明sDR5-Fc能够通过抑制中性粒细胞活化发挥对H9c2细胞的保护作用;qPCR、ELISA结果显示:sDR5-Fc能够阻断TRAIL诱导中性粒细胞表达TNF-α、IL-1β。以上结果说明sDR5-Fc可通过抑制中性粒细胞活化减轻共培养体系中H9c2细胞的损伤。结论:1、sDR5-Fc通过抑制外周血中性粒细胞的浸润减轻心肌I/R损伤。2、sDR5-Fc通过抑制中性粒细胞活化减轻共培养体系中H9c2细胞的损伤。(本文来源于《河南大学》期刊2018-06-01）
李志勇[7]（2018）在《IL-36γ在慢性鼻—鼻窦炎中性粒细胞性炎症中的活化及作用》一文中研究指出背景中性粒细胞性炎症反应在慢性鼻-鼻窦炎中得到越来越广泛的重视,然而中性粒细胞在慢性鼻-鼻窦炎中的功能和调控仍没有得到完全揭示。IL-36家族成员在中性粒细胞性炎症反应中可能起着重要的作用。目的研究IL-36家族成员在慢性鼻-鼻窦炎中的表达和作用。方法慢性鼻-鼻窦炎患者作为实验组,鼻中隔偏曲患者作为对照组。采用RT-PCR 方法检测组织中 IL-36α、IL-36γ、IL-36γ、IL-36Ra、IL-38 和 IL-36R 的 mRNA表达水平;利用免疫组织化学方法检测上述指标的组织学分布和表达量,并进一步以ELISA方法加以验证。采用免疫荧光技术及流式细胞学技术测定IL-36R的表达情况。分离并纯化外周血中的中性粒细胞进行培养。培养鼻息肉粘膜原代上皮细胞,用相关细胞因子进行刺激,并检测目的基因的表达情况。采用Western blotting技术检测全长型IL-36γ的表达水平及裂解。培养游离鼻息肉组织细胞(Dispersed nasal polyp cell,DNPCs)并分别予以全长型IL-36γ(伴或不伴弹性蛋白酶)及地塞米松进行刺激。结果中性粒细胞浸润程度、IL-36家族成员及IL-36R表达水平在伴有或不伴有鼻息肉的鼻窦炎组织中均较对照组明显上调。IL-36γ是表达量最高的IL-36家族成员,其主要表达部位为鼻窦炎组织上皮细胞。中性粒细胞是鼻窦炎组织中表达IL-36R的最主要细胞。外周血中性粒细胞几乎不表达IL-36,但其在IL-6、IL-1β和Dermatophagoides pteronyssinus group 1(Der p1)的作用下可上调 IL-36R的表达水平。在鼻息肉组织中,弹性蛋白酶的活性增强并可裂解全长型IL-36γ。与此一致地,裂解型IL-36γ在鼻息肉组织中较对照组显著增多。采用全长型IL-36γ刺激 DNPCs,可以促进 MMP-9、IL-17A、CXCL1、CXCL2 和 CXCL8 的产生,加入弹性蛋白酶抑制剂后可以抑制上述产物的表达,然而,加入地塞米松不能抑制上述的IL-36γ的促炎作用。结论本文首次全面研究了 IL-36家族在慢性鼻-鼻窦炎中的表达情况,对IL-36a、β、γ、IL-36Ra和IL-38在慢性鼻-鼻窦炎中的表达水平以及组织学定位获得了明确的结果。发现IL-36γ在CRS中具有最高的表达量。并首次寻找到IL-36受体(IL-36R)在CRS中的表达和定位,发现主要表达IL-36R的细胞是中性粒细胞。本研究首次揭示了 IL-36γ在慢性鼻-鼻窦炎中的功能,并进一步证实了全长IL-36γ的功能在中性粒细胞来源酶的活化后得到显著增强,活化后的IL-36γ直接作用于中性粒细胞表面的IL-36R而发挥功能。本研究初步揭示了地塞米松不能抑制活化的IL-36γ所导致的鼻息肉组织中性粒细胞炎症反应,从而提示了IL-36γ的作用可能是部分慢性鼻-鼻窦炎患者激素治疗效果不佳的原因。(本文来源于《华中科技大学》期刊2018-05-01）
周艳,黄瑜[8]（2018）在《促性腺激素释放激素激动剂治疗子宫内膜异位症的效果及对血管内皮生长因子和中性粒细胞活化肽78表达的影响》一文中研究指出目的探讨促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-α)在治疗子宫内膜异位症(EM)中的临床效果及对血管内皮生长因子(VEGF)和中性粒细胞活化肽78(ENA-78)表达的影响。方法选择2016年1月-2017年1月在武汉市蔡甸区人民医院妇产科住院治疗的120例EM患者为研究对象。随机分为观察组和对照组,每组各60例,对照组单纯接受腹腔镜或开腹手术,观察组在此基础上给予GnRH-α3.75 mg注射于腹腔前壁皮下,4周1次,持续治疗6个月。分别测定两组患者治疗前、治疗后1个月、6个月血清VEGF、ENA-78、血清癌抗原125(CA125)、抗子宫内膜抗体(EMAb)的水平。结果观察组治疗总有效率为81.67%,对照组为61.67%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组患者ENA-78、VEGF、CA125、EMAb水平比较,差异无统计学意义(均P>0.05);治疗后,观察组ENA-78、VEGF、CA125、EMAb水平下降明显优于对照组(均P<0.05)。治疗前,两组患者血清E2、P、FSH、LH水平相近,但差异无统计学意义(均P>0.05);治疗后,观察组血清激素E2、P、FSH、LH水平下降明显优于对照组(均P<0.05)。EM患者血清ENA-78、VEGF水平与CA125、EMAb的水平呈正相关(均P<0.05),与血清激素E2、P、FSH、LH的水平无相关性(均P>0.05)。结论术后使用GnRH-α能提高EM治疗效果,且能明显降低患者血清ENA-78、VEGF水平,ENA-78、VEGF可作为EM治疗效果的评估指标。(本文来源于《中国妇幼保健》期刊2018年02期）
王妍[9]（2017）在《p38调节/活化的蛋白激酶(PRAK)对于中性粒细胞胞外诱捕网(NET)形成的影响》一文中研究指出研究背景:中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil extracellular trap,NET)由Brinkmann等人于2004年研究发现,是中性粒细胞特有的死亡方式。目前,越来越多的报道提示,自噬过程在NET发生过程中发挥重要作用。已有的研究表明在用佛波酯(PMA)、溶酶体膜蛋白-2(lysosomalmembrane protein-2,LAMP-2)或尿酸(MSU)(本文来源于《第十二届全国免疫学学术大会分会场交流报告集》期刊2017-10-26）
胡静,钱炜,李红,李琪,沙红[10]（2017）在《川崎病急性期中性粒细胞功能的活化及与冠脉脉损伤的关系》一文中研究指出川崎病(kawasaki disease,KD)是一种以全身性血管炎为主要病理改变的发热性疾病,主要影响中小动脉,尤其是冠状动脉,目前是儿童后天性心脏病最常见的病因。其病因目前仍未明确,可能与感染及异常免疫反应有关。及时大剂量IVIG治疗可以明显减少冠状动脉损害的发生,但仍然有10%~15%的KD患儿发生冠状动脉损害。目前,KD的病因和冠状动脉损害的发病机制尚不清楚。有研究者发现,KD急性期炎症细胞如单核巨噬(本文来源于《实用医学杂志》期刊2017年19期）
中性粒细胞活化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
第一部分 吸烟者与稳定期慢性阻塞性肺疾病患者痰中性粒细胞诱捕网和外周血髓样树突状细胞的表达及意义目的:探讨吸烟者、稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者痰中性粒细胞诱捕网(NETs)和外周血髓样树突状细胞(mDCs)的表达及意义方法:于2017年5月至2018年5月在广西医科大学第一附属医院门诊收集稳定期慢性阻塞性肺疾病患者32例的诱导痰和外周血。同期收集肺功能正常的吸烟者16例及肺功能正常的非吸烟者16例的诱导痰和外周血。采用免疫荧光法观察各组诱导痰NETs的形成。Picogreen荧光定量法检测各组诱导痰中NET-DNA的含量。流式细胞术检测各组外周血mDCs活化程度的表型特征和辅助性T淋巴细胞1(Th1)和辅助性T淋巴细胞17(Th17)的比例。采用Spearman相关分析对NETs水平与年龄、吸烟指数、体重指数、肺功能等进行相关性评价。最后对痰NET-DNA的水平和外周血mDCs表面共刺激分子CD40、CD86的表达,和辅助性T细胞中Th1和Th17的比例进行相关性分析。结果:(1)与肺功能正常的吸烟者和肺功能正常非吸烟者相比,COPD患者诱导痰中的NET-DNA明显升高,结果具有统计学差异。但肺功能正常的吸烟者和非吸烟者相比,二者诱导痰中NET-DNA水平无统计学差异。(2)COPD患者外周血CD40~+mDCs和CD86~+mDCs和外周血Th1、Th17的比例均较肺功能正常的吸烟者和非吸烟者升高,结果均具有统计学差异。而肺功能正常者中的吸烟者与非吸烟者相比,外周血CD86~+mDCs升高,结果具有统计学差异,但外周血CD40~+mDCs和外周血Th1、Th17的比例无明显差异。(3)COPD患者痰NETs水平与FEV_1/预计值呈负相关,与GOLD分级呈正相关,与年龄、吸烟指数、体重指数无关。(4)COPD患者痰NETs水平与外周血mDCs的CD40和外周血Th1细胞比例呈正相关,与CD86和Th17无明显相关性。结论:COPD患者痰中的NETs水平显着增高并与气流受限程度相关,可作为评价COPD疾病严重程度的生物标志物之一。COPD患者树突状细胞活化和Th1细胞反应可能与痰NETs的升高有关。吸烟状态下气道中NETs的量可能反映了个体对COPD疾病的易感性。第二部分 烟雾提取物诱导的NETs活化树突状细胞并影响Th1和Th17分化的细胞实验目的:探讨烟草烟雾提取物(CSE)诱导的中性粒细胞诱捕网(NETs)对髓样树突状细胞活化作用,观察NETs通过树突状细胞对Th1和Th17分化的影响。方法:使用淋巴细胞分离液分离健康者静脉血中的PBMCs,用贴壁法得到单核细胞,用1000U/ml GM-CSF和500U/ml IL-4诱导6天得到人单核来源的树突状细胞(MoDCs)。用Histopaque 1119+Percoll法分离COPD患者血中的中性粒细胞。用CSE诱导中性粒细胞生成NETs,并用AluI酶切法分离NETs。用以上分离提取的NETs刺激MoDCs并继续培养15小时,流式细胞术检测NETs刺激结束后MoDCs上共刺激分子CD40、CD86和HLA-DR的表达情况,并与未经NETs刺激的MoDCs的以上指标进行对比;ELISA检测各组MoDCs上清中的IL-1β、IL-12、和TNF-α浓度。免疫磁珠法分离健康者PBMCs中的初始CD4~+T淋巴细胞,与经NETs刺激的MoDCs进行共培养4天。流式细胞术检测共培养后初始CD4~+T淋巴细胞的分化成Th1和Th17的比例。结果:(1)经过CSE诱导的NETs刺激的MoDCs表面共刺激分子CD40、CD86和HLA-DR均较未予NETs刺激的MoDCs升高,差异均具有统计学意义。(2)经过CSE诱导的NETs刺激的MoDCs上清中IL-1β、IL-12、和TNF-α的浓度均较单纯MoDCs培养孔上清中的含量明显升高,差异均具有统计学意义。(3)初始CD4~+T淋巴细胞与MoDCs共培养4天,与对照组相比,经NETs刺激的MoDCs与初始CD4~+T淋巴细胞共培养产生Th1和Th17的比例增多,结果具有统计学意义。结论:CSE诱导的NETs可促进MoDCs产生IL-1β、IL-12、和TNF-α,并促进MoDCs的成熟和活化。经过NETs活化后的MoDCs可促进初始CD4~+T淋巴细胞向Th1和Th17分化。第叁部分 红霉素抑制烟草烟雾提取物诱导中性粒细胞诱捕网生成的作用和机制探讨目的:探讨红霉素抑制烟草烟雾提取物(CSE)诱导的中性粒细胞诱捕网(NETs)的作用和可能机制。方法:抽取10例稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者静脉血,用Histopaque 1119+Percoll法分离提纯外周血中性粒细胞。用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)抑制剂二亚苯基碘(DPI)或红霉素(终浓度10μg/ml)对中性粒细胞进行预孵育30min处理,随后加入CSE刺激4小时诱导NETs生成。实验中设置CSE单纯刺激孔、CSE+红霉素干预孔、CSE+DPI干预孔、单纯红霉素孔、单纯DPI孔和培养基空白对照孔。荧光法观察各孔中性粒细胞NETs形成。用Picogreen法观察各孔细胞上清NET-DNA的水平,用蛋白酶底物显色法及ELISA检测各组中NETs相关的中性粒弹性蛋白酶(NE)和髓过氧化物酶(MPO)的浓度。另外抽取6例COPD患者静脉血,相同方法分离中性粒细胞。向中性粒细胞加入DPI或红霉素(终浓度10μg/ml)进行预孵育30min处理,加入CSE刺激1小时后收取中性粒细胞进行2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)标记30min,随后用流式细胞术检测各组中性粒细胞DCFH-DA的平均荧光强度(MFI),即代表胞内活性氧(ROS)水平。结果:(1)与培养基空白对照相比,CSE单纯刺激孔产生更多的NET-DNA,同时NETs相关的NE和MPO的浓度更高,结果具有统计学意义。(2)CSE+DPI干预孔的NET-DNA较CSE单纯刺激孔的NET-DNA减少,结果具有统计学意义,提示DPI可以抑制CSE刺激诱导的NETs。(3)CSE+红霉素干预孔的NET-DNA较CSE单纯刺激孔的NET-DNA减少,同时CSE+红霉素干预孔的NETs相关NE和MPO的浓度较CSE单纯刺激孔减少,结果均具有统计学意义。(4)CSE+DPI干预孔的中性粒细胞的DCFH-DA的MFI较CSE单纯刺激孔的MFI减低;CSE+红霉素干预孔的中性粒细胞的MFI也较CSE单纯刺激孔的MFI减低,结果均具有统计学意义,提示DPI及红霉素均可以抑制CSE刺激诱导中性粒细胞产生ROS。结论:CSE刺激下产生NADPH依赖的活性氧(ROS)反应可能是烟草烟雾暴露诱导NETs生成的机制之一。红霉素可能通过抑制中性粒细胞的NADPH氧化酶依赖的ROS反应从而减少NETs的产生。红霉素亦可能通过抑制NE和MPO减少NETs形成。第四部分 红霉素抑制小鼠体内中性粒细胞诱捕网及树突状细胞活化对烟草相关肺部炎症的影响目的:探讨红霉素抑制小鼠体内中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)及树突状细胞活化及对烟草相关肺部炎症的影响。方法:领取30只野生型雄性C57BL/6J小鼠(鼠龄6-8周),由广西医科大学动物实验中心提供。用随机数字表法将30只小鼠分为烟草烟雾暴露组(CS)、烟草烟雾暴露下红霉素干预组(EM)和空气暴露对照组(Air)。CS组和EM组给予烟草烟雾暴露24周。其中,EM组从第12周末开始给予红霉素(100mg/kg/d)灌胃处理,至24周结束。Air组给予空气伪暴露24周。第24周末,将各组小鼠处死。留取各组肺泡灌洗液(BALF),用Picogreen法检测各组BALF中的NET-DNA水平,并用ELISA方法检测BALF中NETs相关成分NE、MPO、组蛋白3和瓜氨酸化的组蛋白3(CITH3)的浓度。各组小鼠左肺上叶经固定、包埋、切片后行病理HE染色并计算平均内衬间隔(MLI)。各组小鼠的脾脏和肺脏制备单细胞悬液并用流式细胞术检测肺髓样树突状细胞(mDCs)上CD40和CD86的表达,以及脾肺中Th1、Th17比例。结果:(1)与Air组相比,CS组小鼠BALF中的NETs水平、游离NE、MPO、Histone 3和CITH3及中性粒细胞比例明显升高,结果均具有统计学差异;与CS组相比,EM组小鼠BALF中的NETs水平、游离NE、MPO和Histone 3和中性粒细胞比例明显降低,结果均具有统计学差异。(2)与Air组相比,CS组小鼠肺部mDCs的共刺激分子CD40和CD86升高,肺部和脾脏Th1和Th17比例升高;与CS组相比,EM组小鼠肺部mDCs的共刺激分子CD40和CD86降低,肺部和脾脏Th1和Th17比例降低,结果均具有统计学差异。(3)CS组的MLI较Air组升高,而EM组的MLI较CS组降低,结果均具有统计学差异。相关性分析结果提示MLI与NETs水平、m DCs上CD40和CD86的表达、Th1和Th17比例均呈正相关,结果具有统计学意义。结论:烟草暴露下小鼠气道内的NETs水平与树突状细胞的活化和Th1和Th17细胞反应成正相关。红霉素干预可减少小鼠气道内NETs,同时减轻获得性免疫反应。红霉素可能通过减少NETs的产生从而对树突状细胞活化产生一定负向调控作用从而减轻烟草相关肺部炎症。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
中性粒细胞活化论文参考文献
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