利用转基因小鼠鉴定肝胆胰世系特征

论文摘要

在哺乳动物早期肝脏和胰腺的形成过程中,两者由同一内胚层的前体细胞发育而来,且在一定的条件刺激下可以实现转分化。在肝脏损伤中有检测到胆管周围的细胞表达lgr5,lgr5阳性的细胞会大量增殖分化为肝细胞和胆管细胞来补充受损伤的肝脏细胞,起到修复损伤的作用,而在成体肝脏中未检测出lgr5的表达,胰腺亦如此。同时决定胰腺发育的pdxl基因和胰岛素基因Insulin在成体的表达也局限于胰岛细胞,其他胰腺细胞均未见有表达。lgr5、pdx1Insulin三种基因在成体肝脏和胰腺中的表达研究已经有许多报道,但是关于这三种基因在肝脏和胰腺的世系表达特征还未见研究报道。因此本试验利用cre-loxp系统和转基因小鼠,通过特异性启动子lgr5、pdx1和Insulin启动的cre重组酶体系,经药物诱导、冰冻切片及免疫染色探讨lgr5、pdx1及Insulin在肝胆胰的世系特征。研究结果显示,Insulin基因在成体小鼠胰腺的胰岛细胞中有表达,胰腺的腺泡细胞和胰腺导管细胞中未检测到表达,在肝脏中的肝实质细胞、肝导管细胞和胆导管细胞也未检测到表达;pdx1基因在成体小鼠肝实质细胞、肝导管细胞和胆管细胞中都有表达,在胰腺的腺泡细胞、胰岛细胞和导管细胞也检测到有表达;lgr基因在成体小鼠肝脏的肝实质细胞、肝导管细胞和胆导管细胞未检测到表达,在胰腺中的腺泡细胞、胰岛细胞和导管细胞也未检测到有表达,不具有世系特征。上述研究结果阐明了lgr5、pdx1和Insulin基因在肝脏和胰腺发育中的世系表达特征,为肝脏和胰腺发育中相关功能基因的研究奠定了基础。

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摘要

Abstract

1 绪论

1.1 肝脏和胰腺的起源

1.2 肝脏

1.3 胰腺

1.4 肝脏和胰腺相关转录因子

1.4.1 转录因子lgr5

1.4.2 转录因子pdx1

1.4.3 转录因子Insulin

1.5 cre/loxp重组酶系统

1.5.1 cre/loxp重组酶系统基本原理

1.5.2 cre/loxp重组酶系统介导对mT/mG小鼠基因编辑的基本原理

1.5.3 cre/loxp重组酶系统的特点

1.5.4 cre-ER

1.6 本研究的目的和意义

2 Insulin-cre转基因小鼠肝胆胰世系特征

2.1 试验材料

2.1.1 试验动物

2.1.2 试验主要试剂

2.1.3 试验仪器

2.2 试验方法

2.2.1 鉴定引物的设计

2.2.2 小鼠总DNA的提取及PCR鉴定

2.2.3 Insulin-cre-mT/mG基因型小鼠的获得

2.2.4 Insulin-cre-mT/mG小鼠组织的提取及处理

2.2.5 免疫染色

2.3 试验结果

2.3.1 Insulin-cre-mT/mG小鼠PCR鉴定及测序结果

2.3.2 小鼠肝脏和胰腺实质以及导管免疫染色结果

2.4 讨论

2.5 本章小结

3 pdxl-cre转基因小鼠肝胆胰世系特征

3.1 试验材料

3.2 试验方法

3.2.1 鉴定引物的设计

3.2.2 小鼠总DNA的提取及PCR鉴定

3.2.3 PCR扩增和电泳检测

3.2.4 pdxl-cre-mT/mG基因型小鼠的获得

3.2.5 小鼠组织的提取及处理

3.2.6 小鼠组织免疫染色

3.3 试验结果

3.3.1 目的基因型小鼠PCR鉴定及测序结果

3.3.2 小鼠肝脏和胰腺实质及导管免疫染色结果

3.4 讨论

3.5 本章小结

4 lgr5-creER转基因小鼠肝胆胰世系特征

4.1 试验材料

4.2 试验方法

4.2.1 lgr5-creER-mT/mG基因小鼠的获得

4.2.2 lgr5-creER-mT/mG小鼠组织的提取和处理

4.2.3 阳性组织十二指肠观察

4.2.4 免疫染色

4.3 试验结果

4.3.1 小鼠基因型PCR鉴定结果

4.3.2 十二指肠荧光显微镜观察结果

4.3.3 肝、胰腺实质细胞免疫染色结果

4.3.4 肝胆胰导管免疫染色结果

4.4 讨论

4.5 本章小结

结论

参考文献

附录

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 艾显辉

导师: 田丽红

关键词: 世系特征,同源性,内胚层,肝脏和胰腺

来源: 东北林业大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 东北林业大学

分类号: Q344

DOI: 10.27009/d.cnki.gdblu.2019.000740

总页数: 51

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