导读:本文包含了整合素亚单位论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:霍乱弧菌,宿主整合因子,ihfB,克隆表达
整合素亚单位论文文献综述
李晶,王洪霞,阚飙,梁未丽[1]（2016）在《霍乱弧菌宿主整合因子β亚单位的可溶性克隆表达》一文中研究指出目的克隆表达霍乱弧菌全局性调节子宿主整合因子(integration host factor,IHF)β亚单位基因ihfB。方法以C7258染色体为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增ihfB基因,扩增产物经NheⅠ和SapⅠ酶切后克隆入表达载体p XTB1;将ihfB的N端和α亚单位基因ihf A的C端通过搭桥PCR重组,重组片段N-ihfB-C-ihf A经NheⅠ和SapⅠ双酶切后克隆入表达载体p XTB1。重组质粒导入大肠埃希菌ER2566,0.4 mmol/L IPTG诱导表达,超声裂解,上清经CBD柱吸附纯化,二硫苏糖醇(DTT)柱上裂解洗脱。结果成功构建表达野生型ihfB基因和嵌合体N-ihfB-C-ihf A的重组表达质粒p XTB1-ihfB和p XTB1-N-ihfB-C-ihf A,并在宿主菌ER2566中诱导表达。p XTB1-ihfB为不溶性的包涵体表达,p XTB1-N-ihfB-C-ihf A为可溶性表达,并获得高纯度的表达产物。结论克隆表达了IHFβ亚单位基因ihfB,IHF-α的C端可显着提高IHF-β的可溶性,获得可溶性表达的纯化IHF-β嵌合体蛋白,为后续调控功能研究奠定了基础。(本文来源于《疾病监测》期刊2016年04期）
陈思[2]（2013）在《胰岛素样生长因子-1对模拟失重下成骨细胞整合素亚单位表达的影响》一文中研究指出[研究背景]骨质疏松症主要特征是骨量减少,骨的微观结构退化：骨小梁变细、断裂、数量减少；皮质骨多孔变薄等。主要临床表现为骨强度下降、脆性增加以及易于发生骨折的一种全身性疾病。骨质疏松症分为原发性骨质疏松和继发性骨质疏松,绝经后骨质疏松、老年性骨质疏松等属于原发性骨质疏松。而失重性骨质疏松是继发性骨质疏松的一种,目前认为它是由航天失重环境引起的一种特殊的废用性骨质疏松,随着航天事业的蓬勃发展,它已严重的阻碍了人类探索太空的脚步。目前空间飞行采取的运动锻炼、药物预防和营养补充都不能有效防止骨丢失的发生发展；为了确保航天员在未来长期飞行任务中健康、高效工作,需要在细胞分子水平阐明空间骨丢失的发生机制；发展基于细胞分子本质认识的有效对抗防护措施。在航天飞行中宇航员们处于一个完全失重的状态,表现为只有质量而没有重量,我们把这种特殊的力学环境叫做微重力。物体处于微重力环境中时,受到的非引力的力一般都很小,产生的加速度也很小。这种非引力加速度通常只有地面重力加速度的万分之一或更小,其大小通常不超过10-5～1O-4g。为了与正常的重力对比,就把这种微加速度现象叫做“微重力”,微重力越小,失重越完全。失重状态只是理想状态,微重力才是实际情况。失重性骨质疏松就是以力学刺激作用了骨组织导致的骨质疏松。研究发现失重性骨质疏松的骨量丢失的原因主要为骨形成的降低,而骨吸收并没有明显的上升。而成骨细胞的主要作用是感受力学刺激,进而发挥成骨作用,是维持骨量的主要细胞。在失重时成骨细胞的失去正常的代谢规律,他的增殖、分化的功能以及细胞内细胞骨架的聚合与解聚均受到了抑制,这种成骨细胞的数量的变化以及代谢的紊乱就更进一步的降低了成骨细胞的成骨能力,导致骨形成的减少。目前对失重条件下,成骨细胞感受和传导力学刺激的细胞骨架、细胞信号转导及基因表达等发生的变化都取得了一定的进展。目前研究表明胰岛素样生长因子I(IGF-1)的水平与骨质疏松的的发生有密切联系,胰岛素样生长因子-1(IGF-1)是成骨细胞分化调控的重要生长因子,它能减少骨胶原退化、增加骨质沉积、促进成骨细胞分化成熟,其水平与骨密度相关。在骨质疏松的病人中发现血清IGF-1水平降低,而在失重条件下IGF-I信号级联受到抑制。整合素是细胞跨膜分子中的重要一种,细胞通过整合素与聚焦粘附激酶、胞外基质蛋白、细胞骨架蛋白等的相互作用,将感应的力信号转化为化学信号,参与细胞各种生理功能的调节,在机械信号转导中发挥重要作用。在模拟失重的条件下,成骨细胞整合素亚单位的表达是下降的。胰岛素样生长因子系统(IGFS)包括IGF1和IGF2,两个IGF受体,六个IGF结合蛋白(IGFBP1—6), IGFBP蛋白酶。IGFS与成骨细胞和破骨细胞的功能及其成骨破骨偶联有着密切关系。IGF-1是IGFS的重要组成部分。IGF-1是长骨生长的一种必需因子,在干骺端,它刺激软骨细胞的增殖分化,在皮质及松质骨的形成过程中发挥作用,刺激成骨细胞的增殖和分化,增加I型胶原的合成,碱性磷酸酶的活性以及骨钙素的产生。抑制由成骨细胞产生的胶原降解,还对无机盐及肾脏1,25(OH)2D3合成产生作用。IGF-1被认为是肠道吸收及细胞外钙和磷的重要调控剂。最新的研究结果表明,绝经妇女的血中IGF-1含量较成年人低30%～40%,由此可见IGF-1与年龄呈负相关。在青春期前,IGF-1缺乏或呈抵抗可延缓长骨生长及峰值骨量的减低。用双能x线骨密度仪测定去卵巢大鼠的骨质疏松模型的椎、胫骨及胫骨远端骨矿物质密度(BMD)。然后将一种特殊的可持续释放IGF-1的装置放入大鼠皮下6周,结果发现实验所测3个位点的BMD均有一定程度的增加,且呈剂量依赖性。该动物模型由IGF-1引起的BMD的增加,主要是通过骨干增粗来实现的。成骨细胞除具有IGF-1受体外,也具有产生1GF-1的机能。因此IGF-1与骨代谢有着重要的关系。整合素是存在于细胞表面的一种重要跨膜分子,细胞感应细胞外基质中的各种刺激(包括物理,化学等)后,胞外基质蛋白将这种刺激传递给细胞表面的整合素,整合素再通过与细胞骨架蛋白以及细胞内各种酶的反应,将感应到的各种刺激转化为化学信号,从而调节细胞的生理机能,机械信号转导的实现很大程度上也是依赖这一途径进行的。研究证实失重或模拟失重环境下骨骼的机械信号传导途径受到抑制,其中一条重要的途径为细胞外基质-整合素-细胞骨架系统,失重情况下整合素亚单位的表达下降,表明失重可能通过抑制整合素的表达来调节下游分子的变化。研究表明IGF-1和整合素信号通路存在相互联系,失重可能通过整合素影响IGF-1通路的作用。本实验旨在探讨失重条件下IGF-1对成骨细胞整合素亚单位基因表达的影响,为失重性骨质疏松的治疗提供理论和实验依据。[目的]本研究主要从细胞分子水平探讨失重导致骨质疏松的可能机制。以小鼠成骨样细胞株(MC3T3-E1)作对象,以回转器模拟微重力效应,探讨失重条件下IGF-1对成骨细胞整合素亚单位基因表达的影响。以期进一步了解IGF-1及整合素在失重性骨质疏松发生中的相互作用,为骨质疏松的治疗提供新的方法。[对象和方法]1.细胞株及培养利用已建株的小鼠成骨样细胞MC3T3-E1(南方医科大学解剖实验室提供),采用同一批冻存细胞复苏,用低糖的DMEM培养基,10%胎牛血清和双抗作常规培养,4d传代,隔天换液。2.成骨细胞株活性鉴定采用茜素红矿化结节染色法检测体外矿化能力。3.建立模拟失重成骨细胞模型及添加干预使用旋转细胞培养系统(RCCS)中50m1容积的高截面纵横比容器(High Aspect Ratio Vessel, HARV)模拟微重力,并联合Cephodex型微载体进行成骨细胞培养。当成骨细胞株复苏后传至第3代时,在细胞对数生长期,细胞性状较稳定时,更换培养基为无血清的低糖DMEM饥饿培养24h,收集细胞按3×105个细胞/ml随机接种于预先放置微载体的5个回旋培养筒中,分为正常重力组,模拟失重组,模拟失重+10ng/mlIGF-1组,模拟失重+50ng/mlIGF-1组,模拟失重+100ng/mlIGF-1组。正常重力组及模拟失重组灌满无血清的低糖DMEM,其余各组分别灌满含10ng/mlIGF-1、50ng/mlIGF-1、100ng/mlIGF-1的无血清低糖DMEM,排净气泡。正常重力组置于37℃、5%C02、湿度饱和的培养箱中静置培养,其余各组置于回转器上,前8h低速间歇回转,每45min搅动1～2min,之后以30r/min的转速回转培养,每天观察容器内有无气泡产生,如发现气泡,立即在在无菌条件下抽尽气泡,培养48h后消化收集细胞。4.提取RNA进行RT-PCR反应利用Trizol法提取总RNA进行反转录PCR,检测整合素α2α5β1亚单位mRNA的表达,同时以GAPDH基因作为内参照。扫描PCR产物电泳照片,计算integrina2/GAPDH、integrina5/GAPDH、integrinβ1/GAPDH的积分光密度比值,推算integrinα2、integrinα5、integrinβ1基因的相对表达水平。5.统计学方法相同条件的实验重复5次(n=5),实验数据以x±s表示,组间比较利用SPSS19.0统计软件进行单向方差分析(one-way ANOVA)检测各组间差异,LSD方法进行多样本均数两两比较,方差齐性采用Levene检验,显着性检验水准0<0.05。[结果]1.成骨细胞生长情况：MC3T3—E1细胞株经复苏培养后,在相差显微镜下呈叁角形、菱形、多边形等不规则形状,细胞透明度好,细胞膜内未见黑色小颗粒。细胞核为较大的圆球形,内含核仁。细胞有2-3个触突,每个细胞的触突均向外伸展,与周围的细胞的突起连接取来,聚集成团形成集落样生长的趋势。2.各组整合素亚单位表达情况：与正常重力组比较,模拟失重组的integriα2、 integrinα5、integrinβ1的mRNA表达明显下降(P<0.05)；与模拟失重组比较,模拟失重+IGF-1组的integrinα2、integrinα5、integrinβ1的mRNA表达明显升高(P<0.05),且呈明显剂量依赖性。[结论]1.MC3T3-E1成骨细胞株具有和原代培养大鼠成骨细胞相同的生物学特性。2.模拟失重状态下,成骨细胞整合素亚单位表达是下降的。3.在模拟失重环境下,胰岛素样生长因子1能增加成骨细胞整合素亚单位表达,且呈明显的剂量依赖性。(本文来源于《南方医科大学》期刊2013-04-01）
陈思,黄懿文,杨锐,孙靖,黄震[3]（2013）在《胰岛素样生长因子-1对模拟失重下成骨细胞整合素亚单位表达的影响》一文中研究指出目的探讨失重条件下胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对成骨细胞整合素亚单位基因表达的影响。方法以小鼠成骨样细胞株(MC3T3-E1)作对象,以回转器模拟微重力效应,实验共分为5组:正常重力组、模拟失重组、模拟失重+10 ng/mL IGF-1组、模拟失重+50 ng/mL IGF-1组、模拟失重+100 ng/mL IGF-1组。在实验的48 h提取细胞总RNA,进行反转录PCR,检测整合素α2α5β1亚单位mRNA的表达,同时以GAPDH基因作为内参照。扫描PCR产物电泳照片,计算integrinα2/GAPDH、integrinα5/GAPDH、integrinβ1/GAPDH的积分光密度比值,推算integrinα2、integrinα5、integrinβ1基因的相对表达水平。结果与正常重力组比较,模拟失重组的integrinα2、integrinα5、integrinβ1的mRNA表达明显下降(P<0.05);与模拟失重组比较,模拟失重+IGF-1组的integrinα2、integrinα5、integrinβ1的mRNA表达明显升高,且呈明显剂量依赖性(P<0.05)。结论在模拟失重环境下,IGF-1能增加成骨细胞整合素亚单位表达。(本文来源于《广东医学》期刊2013年04期）
李锋,吴盛迪[4]（2012）在《整合素受体β3亚单位在非酒精性脂肪性肝病肝组织中的表达》一文中研究指出目的观察在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)不同疾病状态中整合素受体β3亚单位的表达情况。方法清洁级雄性新西兰白兔30只,随机分成两组,一组饲以正常饮食(n=6),另一组饲以高脂饮食(n=24)。高脂饮食组分别在饲养1、2、3个月时随机处死8只白兔,取肝组织行HE染色和天狼星红染色,根据病理结果计算NAFLD活动度积分(NAS)。Western印迹和实时PCR检测肝组织内整合素受体β3亚单位蛋白和mRNA表达,免疫组织化学检测β3亚单位在肝脏细胞内的表达情况。结果根据病理结果,高脂饮食白兔分成3组:单纯脂肪肝组(n=10)、无纤维化的NASt组(n=6)和伴有纤维化的NASH组(n=8),NAS积分分别为2.43±0.79,5.38±1.30和5.13±1.05。与正常对照组相比,单纯脂肪肝组整合素受体β3亚单位的蛋白和mRNA表达差异无统计学意义,而NASH-组的表达明显增加,并且随着肝纤维化的加重,表达量增加更显着(均P<0.05)。此外,与正常对照组相比,单纯脂肪肝组肝组织内表达整合素受体β3亚单位的细胞无明显增多;而NASH组阳性细胞显着增多(均P<0.05),其中伴有纤维化的NASH组阳性细胞最多;这些阳性细胞主要分布于肝细胞间隙内。结论与正常对照组和单纯脂肪肝组相比,NASH组肝组织内有着更显着的整合素受体β3亚单位的表达,并且表达量随着肝纤维化的出现而进一步增加。(本文来源于《肝脏》期刊2012年06期）
傅遍红,吴泽志,秦建[5]（2011）在《整合素亚单位对肝癌细胞与层粘连蛋白趋化迁移运动的影响》一文中研究指出目的:定量描述整合素α_1,α_2,α_3,α_4,α_5,α_6,β_1亚单位对肝细胞癌(HCC)细胞与层粘连蛋白(LN)趋化迁移运动的影响。方法:采用Boyden小室研究肝癌细胞向LN迁移运动,测定HCC细胞迁移的百分数;进一步加入针对整合素亚单位的单克隆抗体(Anti-α_1,Anti-α_2,Anti-α_3,Anti-α_4,Anti-α_5,Anti-α_6,Anti-β_1)处理HCC细胞,观察Anti-α_1～Anti-α_6,Anti-β1对HCC细胞向LN趋化迁移的影响。利用流式细胞仪对HCC细胞表面整合素α_1,α_2,α_3,α_4,α_5,α_6,β_1亚单位的表达进行分析。结果:HCC细胞向200μg/mL LN迁移率为100%,分别加入20μg/ml Anti-α_1～Anti-α_3,Anti-β_1,HCC细胞向LN溶液迁移率分别为(95.2±3.8)%、(5.5±±2.5)%、(29.7±±8.5)%、(90.5±6.8)%、(7.3±5.6)%,(13.2±6.5)%,(8.3±6.8)%。流式细胞仪分析表明,所研究细胞整合素α_1,α_2,α_3,α_4,α_5,α_6,β_1亚单位表达率达分别为95.07%,23.17%,95.55%,2.47%,34%,14.29%和95.78%。结论:整合素α_3,α_6,β_1,α_5,α_2亚单位是HCC细胞的趋化迁移的重要受体,其单克隆抗体对HCC细胞的迁移受到的抑制作用逐渐增加。(本文来源于《渗流力学与工程的创新与实践——第十一届全国渗流力学学术大会论文集》期刊2011-04-28）
朱鸿飞,刘益杰,褚立希,冯伟[6]（2011）在《力学刺激对软骨细胞整合素亚单位的调控》一文中研究指出骨关节炎(osteoarthritis,OA)是以关节软骨退变、关节缘骨质增生为主要改变的疾病。机械应力可以调节细胞的多种功能,而整合素作为细胞表面应力受体之一,主要介导细胞与细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)间的黏附,在传导力学信号从而调节细胞的生理功能方面起着重要作用。因此,在软骨病变早中期选择适当的良性刺激(如推拿手法)作用于软骨,调控整合素的表达影响软骨细胞的功能,修复损伤的软骨细胞,延缓关节软骨退变,这对于骨关节炎的治疗有重要意义。(本文来源于《中国骨伤》期刊2011年03期）
李红艳,林崇韬,李博[7]（2010）在《碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响》一文中研究指出目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响,探讨bFGF在牙周组织再生中的意义。方法体外培养人牙周膜成纤维细胞,分别用质量浓度0.1、1.0、10.0 ng.mL-1的bFGF刺激细胞,培养24、48、72 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA表达的变化。结果 bFGF可促进人牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA的合成,在培养24、48、72 h时,1.0 ng.mL-1组整合素β1亚单位表达均明显高于对照组;培养72 h时各实验组整合素β1亚单位表达均明显高于培养24、48 h时。结论 bFGF通过提高整合素β1亚单位mRNA的表达,促进牙周膜成纤维细胞的黏附,在牙周组织修复再生中起作用。(本文来源于《华西口腔医学杂志》期刊2010年05期）
刘艳巧,刘润侠[8]（2010）在《内异消方剂对子宫内膜异位症不孕患者子宫内膜上皮细胞整合素亚单位β3表达的影响》一文中研究指出目的观察中药内异消方剂对整合素亚单位β3、肿瘤坏死因子(TNF-α)在子宫内膜异位症(EM)不孕患者子宫内膜上皮细胞中表达的影响。方法 EM不孕患者50例,随机分为内异消治疗组30例,丹哪唑对照组20例,治疗前后应用免疫组织化学方法检测种植窗期子宫内膜上皮细胞TNF-α、整合素亚单位β3表达情况。结果整合素亚单位β3在子宫内膜上皮细胞的表达于治疗后两组均明显提高且两组之间具有显著性差异;TNF-α的表达两组均于治疗后明显降低,但两组之间无显着性差异。结论内异消方剂可通过调节子宫内膜的接受性(增强整合素亚单位β3的表达)来提高EM不孕患者的受孕率。(本文来源于《Abstracts of the First Asian Conference on Endometriosis(ACEⅠ)》期刊2010-10-16）
李红艳[9]（2009）在《碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞整合素β1亚单位表达的影响》一文中研究指出牙周病的治疗目的是去除病因,消除炎症,使破坏的组织修复、再生,以恢复其原有的结构和功能。在牙周组织创伤愈合的4种来源细胞中,只有牙周膜细胞具有牙周组织再生的能力。碱性成纤维细胞生长因子具有多种生物学作用,是有丝分裂促进因子,有很好的发展潜能。整合素是一个细胞表面受体家族,是介导细胞与细胞外基质黏附作用的主要因子,由α和β亚基组成,其中β亚基是细胞黏附所必需的,牙周膜细胞在牙齿根面的黏附是牙周组织再生至关重要的第一步,整合素可能在此过程中起了决定性的作用。因此本研究应用碱性成纤维细胞生长因子刺激体外培养的人正常牙周膜细胞,用实时荧光定量PCR法反应检测牙周膜细胞内整合素β1亚单位基因表达的变化来探讨碱性成纤维细胞生长因子促进牙周膜细胞黏附的机制,进一步探讨碱性成纤维细胞生长因子在牙周组织损伤修复和再生中的作用,为牙周组织再生奠定部分理论基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2009-04-01）
孙雪艳[10]（2007）在《C-fos和整合素β_3亚单位在子宫内膜异位症窗口期在位子宫内膜的表达》一文中研究指出目的：通过测定子宫内膜异位症(EM)患者窗口期在位子宫内膜c-fos蛋白、整合素β_3亚单位的表达，以探讨子宫内膜异位症对子宫内膜容受性影响的可能机制，并为子宫内膜异位症所致不孕的治疗提供理论依据。方法：收集EM组(20例)和对照组(10例)窗口期子宫内膜标本。采用免疫组化法测定c-fos蛋白、整合素β_3亚单位在窗口期子宫内膜的表达。用SPSS11.0软件进行两样本T检验和直线相关分析统计处理。结果：子宫内膜异位症患者窗口期在位子宫内膜c-fos蛋白平均灰度值为117.98±12.85，对照组为136.04±17.86，两者相比有显着的统计学差异(P＜0.05)，即EM组窗口期在位子宫内膜上c-fos蛋白含量明显高于对照组。整合素β_3亚单位在EM组窗口期在位子宫内膜上平均灰度值为141.63±13.27，对照组为110.78±12.88，两者相比有显着的统计学差异(P＜0.05)，即对照组窗口期子宫内膜整合素β_3亚单位含量明显高于EM组。窗口期子宫内膜c-fos蛋白与整合素β_3亚单位表达无相关性(r=-0.345，p＞0.05)。结论：1．子宫内膜异位症患者窗口期在位子宫内膜c-fos蛋白表达增高，可能改变子宫内膜环境，影响胚胎着床。2．子宫内膜异位症患者窗口期在位子宫内膜整合素β_3亚单位表达明显降低，导致子宫内膜容受性的降低，妨碍了胚胎的着床。(本文来源于《中南大学》期刊2007-05-01）
整合素亚单位论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
[研究背景]骨质疏松症主要特征是骨量减少,骨的微观结构退化：骨小梁变细、断裂、数量减少；皮质骨多孔变薄等。主要临床表现为骨强度下降、脆性增加以及易于发生骨折的一种全身性疾病。骨质疏松症分为原发性骨质疏松和继发性骨质疏松,绝经后骨质疏松、老年性骨质疏松等属于原发性骨质疏松。而失重性骨质疏松是继发性骨质疏松的一种,目前认为它是由航天失重环境引起的一种特殊的废用性骨质疏松,随着航天事业的蓬勃发展,它已严重的阻碍了人类探索太空的脚步。目前空间飞行采取的运动锻炼、药物预防和营养补充都不能有效防止骨丢失的发生发展；为了确保航天员在未来长期飞行任务中健康、高效工作,需要在细胞分子水平阐明空间骨丢失的发生机制；发展基于细胞分子本质认识的有效对抗防护措施。在航天飞行中宇航员们处于一个完全失重的状态,表现为只有质量而没有重量,我们把这种特殊的力学环境叫做微重力。物体处于微重力环境中时,受到的非引力的力一般都很小,产生的加速度也很小。这种非引力加速度通常只有地面重力加速度的万分之一或更小,其大小通常不超过10-5～1O-4g。为了与正常的重力对比,就把这种微加速度现象叫做“微重力”,微重力越小,失重越完全。失重状态只是理想状态,微重力才是实际情况。失重性骨质疏松就是以力学刺激作用了骨组织导致的骨质疏松。研究发现失重性骨质疏松的骨量丢失的原因主要为骨形成的降低,而骨吸收并没有明显的上升。而成骨细胞的主要作用是感受力学刺激,进而发挥成骨作用,是维持骨量的主要细胞。在失重时成骨细胞的失去正常的代谢规律,他的增殖、分化的功能以及细胞内细胞骨架的聚合与解聚均受到了抑制,这种成骨细胞的数量的变化以及代谢的紊乱就更进一步的降低了成骨细胞的成骨能力,导致骨形成的减少。目前对失重条件下,成骨细胞感受和传导力学刺激的细胞骨架、细胞信号转导及基因表达等发生的变化都取得了一定的进展。目前研究表明胰岛素样生长因子I(IGF-1)的水平与骨质疏松的的发生有密切联系,胰岛素样生长因子-1(IGF-1)是成骨细胞分化调控的重要生长因子,它能减少骨胶原退化、增加骨质沉积、促进成骨细胞分化成熟,其水平与骨密度相关。在骨质疏松的病人中发现血清IGF-1水平降低,而在失重条件下IGF-I信号级联受到抑制。整合素是细胞跨膜分子中的重要一种,细胞通过整合素与聚焦粘附激酶、胞外基质蛋白、细胞骨架蛋白等的相互作用,将感应的力信号转化为化学信号,参与细胞各种生理功能的调节,在机械信号转导中发挥重要作用。在模拟失重的条件下,成骨细胞整合素亚单位的表达是下降的。胰岛素样生长因子系统(IGFS)包括IGF1和IGF2,两个IGF受体,六个IGF结合蛋白(IGFBP1—6), IGFBP蛋白酶。IGFS与成骨细胞和破骨细胞的功能及其成骨破骨偶联有着密切关系。IGF-1是IGFS的重要组成部分。IGF-1是长骨生长的一种必需因子,在干骺端,它刺激软骨细胞的增殖分化,在皮质及松质骨的形成过程中发挥作用,刺激成骨细胞的增殖和分化,增加I型胶原的合成,碱性磷酸酶的活性以及骨钙素的产生。抑制由成骨细胞产生的胶原降解,还对无机盐及肾脏1,25(OH)2D3合成产生作用。IGF-1被认为是肠道吸收及细胞外钙和磷的重要调控剂。最新的研究结果表明,绝经妇女的血中IGF-1含量较成年人低30%～40%,由此可见IGF-1与年龄呈负相关。在青春期前,IGF-1缺乏或呈抵抗可延缓长骨生长及峰值骨量的减低。用双能x线骨密度仪测定去卵巢大鼠的骨质疏松模型的椎、胫骨及胫骨远端骨矿物质密度(BMD)。然后将一种特殊的可持续释放IGF-1的装置放入大鼠皮下6周,结果发现实验所测3个位点的BMD均有一定程度的增加,且呈剂量依赖性。该动物模型由IGF-1引起的BMD的增加,主要是通过骨干增粗来实现的。成骨细胞除具有IGF-1受体外,也具有产生1GF-1的机能。因此IGF-1与骨代谢有着重要的关系。整合素是存在于细胞表面的一种重要跨膜分子,细胞感应细胞外基质中的各种刺激(包括物理,化学等)后,胞外基质蛋白将这种刺激传递给细胞表面的整合素,整合素再通过与细胞骨架蛋白以及细胞内各种酶的反应,将感应到的各种刺激转化为化学信号,从而调节细胞的生理机能,机械信号转导的实现很大程度上也是依赖这一途径进行的。研究证实失重或模拟失重环境下骨骼的机械信号传导途径受到抑制,其中一条重要的途径为细胞外基质-整合素-细胞骨架系统,失重情况下整合素亚单位的表达下降,表明失重可能通过抑制整合素的表达来调节下游分子的变化。研究表明IGF-1和整合素信号通路存在相互联系,失重可能通过整合素影响IGF-1通路的作用。本实验旨在探讨失重条件下IGF-1对成骨细胞整合素亚单位基因表达的影响,为失重性骨质疏松的治疗提供理论和实验依据。[目的]本研究主要从细胞分子水平探讨失重导致骨质疏松的可能机制。以小鼠成骨样细胞株(MC3T3-E1)作对象,以回转器模拟微重力效应,探讨失重条件下IGF-1对成骨细胞整合素亚单位基因表达的影响。以期进一步了解IGF-1及整合素在失重性骨质疏松发生中的相互作用,为骨质疏松的治疗提供新的方法。[对象和方法]1.细胞株及培养利用已建株的小鼠成骨样细胞MC3T3-E1(南方医科大学解剖实验室提供),采用同一批冻存细胞复苏,用低糖的DMEM培养基,10%胎牛血清和双抗作常规培养,4d传代,隔天换液。2.成骨细胞株活性鉴定采用茜素红矿化结节染色法检测体外矿化能力。3.建立模拟失重成骨细胞模型及添加干预使用旋转细胞培养系统(RCCS)中50m1容积的高截面纵横比容器(High Aspect Ratio Vessel, HARV)模拟微重力,并联合Cephodex型微载体进行成骨细胞培养。当成骨细胞株复苏后传至第3代时,在细胞对数生长期,细胞性状较稳定时,更换培养基为无血清的低糖DMEM饥饿培养24h,收集细胞按3×105个细胞/ml随机接种于预先放置微载体的5个回旋培养筒中,分为正常重力组,模拟失重组,模拟失重+10ng/mlIGF-1组,模拟失重+50ng/mlIGF-1组,模拟失重+100ng/mlIGF-1组。正常重力组及模拟失重组灌满无血清的低糖DMEM,其余各组分别灌满含10ng/mlIGF-1、50ng/mlIGF-1、100ng/mlIGF-1的无血清低糖DMEM,排净气泡。正常重力组置于37℃、5%C02、湿度饱和的培养箱中静置培养,其余各组置于回转器上,前8h低速间歇回转,每45min搅动1～2min,之后以30r/min的转速回转培养,每天观察容器内有无气泡产生,如发现气泡,立即在在无菌条件下抽尽气泡,培养48h后消化收集细胞。4.提取RNA进行RT-PCR反应利用Trizol法提取总RNA进行反转录PCR,检测整合素α2α5β1亚单位mRNA的表达,同时以GAPDH基因作为内参照。扫描PCR产物电泳照片,计算integrina2/GAPDH、integrina5/GAPDH、integrinβ1/GAPDH的积分光密度比值,推算integrinα2、integrinα5、integrinβ1基因的相对表达水平。5.统计学方法相同条件的实验重复5次(n=5),实验数据以x±s表示,组间比较利用SPSS19.0统计软件进行单向方差分析(one-way ANOVA)检测各组间差异,LSD方法进行多样本均数两两比较,方差齐性采用Levene检验,显着性检验水准0<0.05。[结果]1.成骨细胞生长情况：MC3T3—E1细胞株经复苏培养后,在相差显微镜下呈叁角形、菱形、多边形等不规则形状,细胞透明度好,细胞膜内未见黑色小颗粒。细胞核为较大的圆球形,内含核仁。细胞有2-3个触突,每个细胞的触突均向外伸展,与周围的细胞的突起连接取来,聚集成团形成集落样生长的趋势。2.各组整合素亚单位表达情况：与正常重力组比较,模拟失重组的integriα2、 integrinα5、integrinβ1的mRNA表达明显下降(P<0.05)；与模拟失重组比较,模拟失重+IGF-1组的integrinα2、integrinα5、integrinβ1的mRNA表达明显升高(P<0.05),且呈明显剂量依赖性。[结论]1.MC3T3-E1成骨细胞株具有和原代培养大鼠成骨细胞相同的生物学特性。2.模拟失重状态下,成骨细胞整合素亚单位表达是下降的。3.在模拟失重环境下,胰岛素样生长因子1能增加成骨细胞整合素亚单位表达,且呈明显的剂量依赖性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
整合素亚单位论文参考文献
[1].李晶,王洪霞,阚飙,梁未丽.霍乱弧菌宿主整合因子β亚单位的可溶性克隆表达[J].疾病监测.2016
[2].陈思.胰岛素样生长因子-1对模拟失重下成骨细胞整合素亚单位表达的影响[D].南方医科大学.2013
[3].陈思,黄懿文,杨锐,孙靖,黄震.胰岛素样生长因子-1对模拟失重下成骨细胞整合素亚单位表达的影响[J].广东医学.2013
[4].李锋,吴盛迪.整合素受体β3亚单位在非酒精性脂肪性肝病肝组织中的表达[J].肝脏.2012
[5].傅遍红,吴泽志,秦建.整合素亚单位对肝癌细胞与层粘连蛋白趋化迁移运动的影响[C].渗流力学与工程的创新与实践——第十一届全国渗流力学学术大会论文集.2011
[6].朱鸿飞,刘益杰,褚立希,冯伟.力学刺激对软骨细胞整合素亚单位的调控[J].中国骨伤.2011
[7].李红艳,林崇韬,李博.碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响[J].华西口腔医学杂志.2010
[8].刘艳巧,刘润侠.内异消方剂对子宫内膜异位症不孕患者子宫内膜上皮细胞整合素亚单位β3表达的影响[C].AbstractsoftheFirstAsianConferenceonEndometriosis(ACEⅠ).2010
[9].李红艳.碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞整合素β1亚单位表达的影响[D].吉林大学.2009
[10].孙雪艳.C-fos和整合素β_3亚单位在子宫内膜异位症窗口期在位子宫内膜的表达[D].中南大学.2007