牛冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

牛冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

论文摘要

目的建立特异灵敏的牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCV)荧光定量PCR检测方法,并对牛源性样本进行筛查。方法根据Genbank中登录的BCV的N基因序列设计Taq Man引物探针,建立基于Taq Man探针法的BCV PCR检测方法,对收集到的牛源样本进行BCV筛查,并对部分阳性样本的PCR产物进行测序鉴定。结果建立了能够特异检测BCV的Taq Man探针法荧光定量PCR检测方法,其标准曲线相关系数Slope为-3.417,相关系数r2为0.999,,扩增效率Eff为96.195%。该方法检测BCV的敏感度为40 copies。使用该方法检测64份牛肛拭子样本检出率为1.5%,检测33份牛源生物制品检出率为6%,部分阳性样本的PCR产物经测序比对为BCV核酸序列,说明BCV在国内牛群中流行,牛源相关生物制品中有感染BCV的潜在风险。结论经测序验证,建立的方法能够灵敏的检测样本中的BCV核酸,应加强牛源相关生物制品中BCV的监测,避免人感染BCV的潜在风险。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 样品与毒种来源
  •   1.2 主要试剂与仪器
  •   1.3 实验方法
  •     1.3.1 引物设计
  •     1.3.2 质粒标准品的制备
  •     1.3.3 病毒cDNA的获取
  •     1.3.4 BCV FQ-PCR扩增体系及标准曲线的建立
  •     1.3.5 BCV FQ-PCR检测方法的特异性、灵敏性、准确性和稳定性检测
  •     1.3.6 BCV FQ-PCR污染实验
  •     1.3.7 BCV FQ-PCR的应用
  • 2 结果
  •   2.1 BCV FQ-PCR扩增体系及标准曲线的建立
  •   2.2 BCV FQ-PCR特异性检测
  •   2.3 BCV FQ-PCR灵敏性检测
  •   2.4 BCV FQ-PCR准确性和稳定性检测
  •   2.5 BCV FQ-PCR污染实验
  •   2.6 BCV FQ-PCR的初步应用
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王莎莎,王吉,岳秉飞

    关键词: 牛冠状病毒,探针法荧光定量方法,检测和初步应用

    来源: 中国比较医学杂志 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技,农业科技

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 中国食品药品检定研究院

    基金: 中国食品药品检定研究院学科带头人基金项目(2015X5)

    分类号: S852.653

    页码: 69-73

    总页数: 5

    文件大小: 166K

    下载量: 470

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