棘胸蛙抗菌肽Spinosan-D的原核表达及活性检测

棘胸蛙抗菌肽Spinosan-D的原核表达及活性检测

论文摘要

抗菌肽是一类具有多种生理活性,具备新型抗菌机制的多肽,是替代传统抗生素,成为新一代治疗药物的理想选择。本研究人工合成棘胸蛙抗菌肽Spinosan-D成熟区基因片段,双酶切原核表达载体pET-32a(+)后回收线性化载体,In-Fusion克隆技术构建重组质粒后转化至E.Coli DH5α感受态细胞,筛选阳性单菌落进行菌液PCR鉴定和测序,转化pET-32a(+)-Spinosan-D至BMBL21(DE3)pLysS菌株。通过优化诱导表达的时间、温度和异丙基株-β-D-硫代吡喃半半乳糖苷(IPTG)终浓度,实现棘胸蛙抗菌肽Spinosan-D融合蛋白的最优化表达,并检测其活性。本研究旨在为规模化制备Spinosan-D和进一步开发利用提供基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 质粒与菌株
  •     1.1.2 主要试剂
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 目的基因合成
  •     1.2.2 重组表达质粒的构建及鉴定
  •     1.2.3 重组质粒的诱导表达
  •     1.2.4 诱导条件优化
  •     1.2.5 重组蛋白的纯化
  •     1.2.6 重组蛋白生物活性检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 Spinosan-D基因扩增及重组表达载体构建及鉴定
  •   2.2 重组质粒的诱导表达
  •   2.3 诱导条件优化
  •   2.4 重组蛋白的纯化
  •   2.5 重组蛋白生物活性鉴定
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 程福珍,洪燕,郑荣泉,梅祎芸,王志刚,张丹丹,李贤露

    关键词: 棘胸蛙,原核表达

    来源: 浙江农业科学 2019年07期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 浙江师范大学野生动物保护与利用技术中心野生动物生物技术与保护利用浙江省重点实验室,浙江师范大学行知学院

    基金: 国家自然科学基金(31772482,31472015),浙江省自然科学基金重点项目(LZ17C030001),浙江省省院合作林业科技项目(2016SY12),金华市科技计划项目(2013-2-1008)

    分类号: Q78

    DOI: 10.16178/j.issn.0528-9017.20190755

    页码: 1250-1255

    总页数: 6

    文件大小: 219K

    下载量: 174

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