李秀梅[1]2004年在《梨幼胚培养与子叶不定器官再生体系的研究》文中研究指明建立稳定、高效的梨的不定器官(不定芽、不定胚)再生体系是梨转基因成功的关键环节。为此，本研究分别以‘金花’(Pyrus brestchneideri Rehd．cv．Jinhua)、‘苍溪’(P．pyrifolia Naki．cv．Cangxi)、‘金水’(P．pyrifolia cv．Jinshui)的不同发育时期的胚为外植体，实验采用正交设计并结合SPSS统计分析软件包对实验结果进行分析，探讨了最佳取材时间、不定芽增殖培养及不定芽生根培养基配方及条件，并在此基础上研究了暗培养时间、硝酸银浓度以及不同生长素种类对不定器官再生的影响。其实验结果表明： (1) 取材时期：通过考虑污染率、死亡率、褐化率分析表明，叁个品种的最佳取材时期是在第四次即谢花后60天左右，但各个时期取材培养的结果不一致。 (2) 通过考察不定芽再生率、平均每叶芽数两个指标，叁个品种的最适不定芽诱导培养基和再生率分别是： ‘金花’：NN69+NAA 0.2mg／L+BA3.0 mg／L，不定芽诱导率为83.41％； ‘金水’：AS+NAA 0.5mg／L+BA 2.0mg／L，不定芽诱导率为76.60％。 ‘苍溪’：MS+NAA 1.0mg／L+BA 3.0mg／L，不定芽诱导率为70.74％。 (3) NAA、IBA、2，4-D叁种生长素对梨胚不定芽再生的诱导结果表明：NAA的诱导效果优于IBA与2，4-D。在0.5～2.0mg／L浓度范围内，以IBA代替2，4-D时，不定芽再生率提高了6.21％～21.24％；以NAA代替IBA不定芽再生率提高了36.74％～67.14％。 (4) ‘金花’子叶暗培养21天可以将子叶不定芽发生率由72.11％提高到85.24％；但随着暗培养时间的延长不定芽发生率由72.11％降到58.01％。 (5) AgNO_3对‘金花’、‘苍溪’的子叶不定芽再生有明显的促进作用，其最适浓度分别为2mg／L和8mg／L。 (6) 通过考察增殖倍数，叁个品种的最佳增殖培养基和增殖倍数分别是： ‘金花’：MS+6-BA 2.0mg／L+IBA 0.2mg／L，增殖倍数为5.94； ‘金水’：MS+6-BA 1.0mg／L+IBA 0.1mg／L，增殖倍数为5.63； ‘苍溪’：MS+6-BA 2.0mg／L+IBA 0.1mg／L，增殖倍数为4.79。 (7) 结合生根率、平均根数、平均根长叁个指标分析表明，叁个品种的最佳生根条件分别是:‘余花’:1/3MS、N从0.smg/L+IBA 2.0:ng/L+AC 0.smg/L;最高生根率为66.7%; ‘金水’:1/ZMS州AA 1 .Omg/L+工BA 2.0I’ng/L+AC 0.smg/;最高生根率为56.92%; ‘苍溪’:l/4MS一“粥A 2.0 mg/L+AC 0.5 mg/L;最高生根率为63.16%。
何志祥[2]2005年在《梨组织培养的研究》文中研究表明本文对梨的组织培养技术进行了较为系统的研究。分别以13个杂交或自交梨组合的胚、翠冠梨的茎段、新高梨自交组培苗叶片为材料，实验研究了其相应的离体再生方式、培养条件及其关键影响因子，为梨优良种质的获得及其良种快速繁殖提供了科学依据和技术基础。主要结果如下： 1、胚培养。以13个砂梨和白梨系统的杂交和自交组合为研究对象，研究了幼胚组织培养技术，并成功地获得了再生植株。结果表明，以培养基1／2MS+6-BA0.5mg／L适于幼胚再生，但不同结合之间、尤其是杂交与自交组合之间，幼胚的离体再生能力和表现有很大差异，在该培养基配比条件下，砂梨与砂梨杂交的组合，无论哪种梨品种为父本，幼胚出芽率和生根率都较其他组合好。外植体对胚培养有影响，带部分子叶的胚比不带子叶或带完整子叶的胚更适于该培养条件。 2、茎段培养。在激素水平为6-BA2.0mg／L和IBA0.2mg／L的条件下，选取1／2MS为基本培养基可以获得高于以WPM或AS为基本培养基的外植体再生率。有芽茎段和无芽茎段具有不同的再生方式及不同的适宜条件。有芽茎段倾向于不经过脱分化而直接出芽，可以省略诱导愈伤阶段；而无芽茎段培养则必须经过脱分化阶段，先诱导出愈伤组织，然后诱导不定芽。就本研究所选用的3种基本培养基而言，AS较适合无芽茎段的愈伤组织诱导，愈伤组织生长良好。 3、叶片培养。经过正交实验筛选出最佳培养基配比为NN69+0.5 mg／LTDZ+1.0 mg／L 6-BA+0.3 mg／L IAA。接种方式以叶基部向上的叶片愈伤率和出芽率都是最高的。叶龄对叶片培养有较大影响，以胚培养再生后继代培养1 5-30d的叶片进行叶培养，无论是愈伤率还是出芽率，都明显优于继代培养30d以上的叶片。 4、移栽。移栽基质和移栽方式对组培苗移栽成活率无明显影响，不管在哪种基质用哪种方式盘炼，只要无菌苗出瓶时生长健壮均能获得较高的移栽成活率，这说明组织培养外植体成功与否主要在于无菌培养阶段，移栽基质和移栽方式只影响其适应外界条件的时间长短。
张馥茜[3]2008年在《穗醋栗再生体系的建立》文中进行了进一步梳理本文以'寒丰'、'早生黑'、'红瑞'、'密穗'、'黑金星'和'大粒甜'为实验试材,对快繁过程中的初代培养、芽的增殖、壮苗培育、愈伤组织诱导及不定芽的诱导五个部分的相关问题进行了详细研究。本试验建立了'寒丰'、'早生黑'、'红瑞'、'密穗'、'黑金星'和'大粒甜'品种组培无性系,为今后进一步开展生物技术研究奠定了基础。主要得出以下几个结论:1剪取穗醋栗一年生健壮枝条,经低温沙藏解除休眠后进行水培。以水培抽生的新梢为外植体,用含有0.1%的升汞水溶液浸泡5分钟,其接种的成活率较高,可到达80%。接种时所用的初代培养基的种类不同,苗的质量也不相同。以1/2MS+IBA 1.0mg·L~(-1)为培养基,培育出组培苗的茎粗和株高极显着于MS+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+IBAO.1 mg·L~(-1)处理培育出的植株,植株生长健壮。2在进行穗醋栗的增殖培养过程中,BA1_0 mg·L~(-1)IBA 0.1-0.2 mg·L~(-1)+MS配方是最简便,培养效果也最为理想。'寒丰'和'早生黑'芽的增殖倍数可达到4倍。3对比几种配方的生根效果,其中生根效果最好的是1/2MS+IBA1.0 mg·L~(-1)生根率达到100%。植株生长旺盛,叶片浓绿,叶片大且平整,有利于植株光合作用的进行从而储存有机物。植株节间明显继代操作简便。根系分枝多,根级指数可达到4级,吸收根多,易于吸收水分和养分。生根的天数控制在30天左右为宜,生根生长时间过长苗的木质化程度越大,影响苗的继代成活率。4穗醋栗组培苗,经增殖培养后呈丛状,无节间,且分离较困难。本试验采取交替式培养方法,采用MS+BA1.0 mg·L~(-1)和1/2MS+IBA1.0 mg·L~(-1)两种培养基进行培养,减少了分离操作上的不便。同时很大程度的避免了同种激素在植物体内的大量残留造成的抑制作用。从株高和茎粗等方面的考察与单纯进行分化培养的植株呈极显着差异。5营养器官中SOD与POD含量的多少,标志着其代谢活性的强弱。侧面也表明了植株营养器官脱分化的能力。试验测得穗醋栗营养器官SOD与POD含量由多到少以此为叶>叶柄>根>茎而且含量差异均呈及显着差异。穗醋栗器官脱分化的能力较弱,因此试验采取两步诱导,将穗醋栗的叶柄首先培养在MS+BA1.0 mg·L~(-1)+2、4-D 1.0mg·~(-1)培养基上,15天后转接到MS+BA1.0 mg·L~(-1)+NAA0.4 mg·L~(-1)+AC1.0g+AgNO_3 1.0 mg·L~(-1)培养基上得到绿色较大体积的愈伤组织。穗醋栗愈伤组织褐化现象较严重,从细胞学角度观察发现褐色愈伤组织多数无细胞核,细胞质极少,经染色细胞中多为红色的球状小体,细胞排列松散,形态逐渐不完整。6在MS+BA 1.0 mg·L~(-1)+IBA 0.1 mg·L~(-1)培养基上培养的茎段,其基部茎段脱分化产生的愈伤团块,经一段时间培养长出新的植株。通过石蜡切片观察没有发现植株之间导管及塞管的连接,说明新生植株是独立体。同时发现愈伤团块中含有很多芽原基。
参考文献：
[1]. 梨幼胚培养与子叶不定器官再生体系的研究[D]. 李秀梅. 四川农业大学. 2004
[2]. 梨组织培养的研究[D]. 何志祥. 中南林业科技大学. 2005
[3]. 穗醋栗再生体系的建立[D]. 张馥茜. 吉林农业大学. 2008