导读:本文包含了人骨形成蛋白成熟肽论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,成熟,酵母,层析,蛋白质,损伤,载体。
人骨形成蛋白成熟肽论文文献综述
王涛,康涛,雷琦,杨谦,曹冰清[1]（2017）在《重组人骨形成蛋白成熟肽4对急性放射损伤小鼠造血系统的修复作用》一文中研究指出目的探讨重组人骨形成蛋白成熟肽-4(rhBMP-4m)对~(60)Coγ射线照射引起的小鼠造血系统损伤的修复作用。方法 90只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组和rhBMP-4m治疗组,每组30只。模型组和rhBMP-4m治疗组小鼠接受~(60)Coγ射线照射,照射剂量7 Gy,全身照射200 s;正常对照组小鼠不接受照射。模型组小鼠每日腹腔注射生理盐水1.0 mL,rhBMP-4m治疗组小鼠每日腹腔注射rhBMP-4m 0.5 mg,连续治疗6 d。分别于照射后第1、3、5、7、9天检测小鼠外周血白细胞数、骨髓单个核细胞数、骨髓单个核细胞中CD34~+细胞比例;照射后第9天进行脾结节计数,并计算脾脏质量与体质量的比值(脾体比)。结果照射后第1天3组小鼠外周血白细胞计数比较差异均无统计学意义(P>0.05);照射后第3、5、7、9天模型组小鼠外周血白细胞计数低于正常对照组(P<0.01);照射后第3、5天rhBMP-4m治疗组小鼠外周血白细胞计数与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05),照射后第7、9天rhBMP-4m治疗组小鼠外周血白细胞计数高于模型组(P<0.05)。模型组小鼠照射后各时间点骨髓单个核细胞计数均低于正常对照组(P<0.01)。照射后第1、3天rhBMP-4m治疗组小鼠骨髓单个核细胞计数与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05),照射后第5、7、9天rhBMP-4m治疗组小鼠骨髓单个核细胞计数高于模型组(P<0.05)。模型组小鼠照射后各时间点的单个核细胞中CD34~+细胞百分率均低于正常对照组(P<0.01)。rhBMP-4m治疗组小鼠照射后第1、3天单个核细胞中CD34~+细胞百分率与模型组比较差异均无统计学意义(P>0.05),照射后第5、7、9天rhBMP-4m治疗组小鼠单个核细胞中CD34~+细胞的百分率高于模型组(P<0.05)。照射后第9天,模型组小鼠脾结节计数高于正常对照组,脾体比低于正常对照组(P<0.05);rhBMP-4m治疗组小鼠脾结节计数和脾体比高于模型组(P<0.01)。结论辐射可引起小鼠骨髓造血系统损伤,rhBMP-4m能够促进骨髓造血系统的重建。(本文来源于《新乡医学院学报》期刊2017年12期）
李文军,郑雄飞,龚笑海,金坚[2]（2016）在《骨形成蛋白10成熟肽在大肠杆菌中的表达纯化及活性分析》一文中研究指出目的:以生物制备骨形成蛋白10(BMP10)为目标,研究BMP10成熟肽在大肠杆菌中的表达及活性。方法:以人源BMP10成熟肽基因为模板,PCR获得N端带有组氨酸标签(6×His)的融合基因6×His-m BMP10,构建p ET28a/m BMP10表达载体;热击转染大肠杆菌BL21(DE3)菌株,卡那霉素抗性筛选获得重组表达菌株BL21/p ET28a-6×His-m BMP10,IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE电泳、Western印迹对蛋白进行分析;超声波破碎菌体,收集包涵体,镍柱亲和层析纯化获得电泳纯目的蛋白;透析复性后,非还原SDS-PAGE检验目标蛋白的二聚体形成;通过体外细胞实验检测蛋白活性。结果:纯化得到纯度90%以上的m BMP10,复性后二聚体得率约为40%;活性实验测得P19细胞的Smad6蛋白表达上调3倍左右。结论:通过大肠杆菌表达体系获得具有生物活性的BMP10,为后续作用机理研究奠定了实验基础。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2016年04期）
刘绍凡,陈愉,万锐杰,徐敏敏[3]（2013）在《重组人骨形成蛋白成熟肽-4对辐射小鼠骨髓造血损伤的修复作用》一文中研究指出目的探讨小鼠受到辐射后,重组人骨形成蛋白成熟肽-4(rhBMP-4m)对辐射引起的骨髓造血损伤的修复作用。方法通过60 Coγ射线照射,建立小鼠骨髓造血损伤模型,经rhBMP-4m连续治疗后,抽血检测小鼠外周血白细胞数,并进行骨髓单个核细胞计数,对脾结节进行计数并通过流式细胞仪检测骨髓单个核细胞中CD34+细胞比例,比较辐射组和实验组之间的差别。结果经rhBMP-4m治疗的小鼠,白细胞数、单个核细胞数、脾结节数和CD34+细胞比例均明显高于辐射组(P<0.05)。结论对于辐射引起的小鼠骨髓造血损伤,rhBMP-4m能够加快骨髓造血系统的重建。(本文来源于《检验医学与临床》期刊2013年19期）
吉建新,廖伟娇,刘利东,卢春生,朱伯平[4]（2010）在《人骨形成蛋白2和人骨形成蛋白7成熟肽编码区基因克隆和真核表达载体的构建》一文中研究指出目的克隆和构建人骨形成蛋白2(BMP-2)和人骨形成蛋白7(BMP-7)成熟肽真核表达载体。方法采用Trizol法从人骨肉瘤细胞中提取制备总RNA,利用RT-PCR、PCR转录、扩增BMP-2和BMP-7获得成熟肽基因,与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建真核表达重组子pcDNA3.1(+)/BMP-2MP和pcDNA3.1(+)/BMP-7MP。结果总RNA提取液电泳可见在28S、18S和5S处出现明显的条带,PCR和酶切可在439bp和364bp出现条带,阳性克隆测序结果与Genebank中登录的序列一致。结论成功克隆出人BMP-2MP和BMP-7MP基因,成熟肽基因已与pcDNA3.1(+)连接,成功构建其真核表达重组子pcDNA3.1/BMP-2MP和pcDNA3.1/BMP-7MP,为进一步研究BMP-2、BMP-7的功能及其成熟肽基因在骨髓间充质细胞(hMSCs)中表达以及在骨组织工程中的应用研究奠定了基础。(本文来源于《广东医学》期刊2010年04期）
卢春生[5]（2009）在《人骨形成蛋白2和7成熟肽编码区基因克隆和真核表达载体的构建》一文中研究指出骨的愈合有叁个重要的因素:一为骨质再生细胞(骨间质干细胞,定向造骨细胞),二为骨质诱导蛋白(生长因子),叁为愈合区域的环境(载体和来源组织)。在目前的整形外科手术中,组织工程学技术可以利用一些生物活性物质,如骨形成蛋白(bone morphogenetic proteins, BMPs),来改变骨移植过程的模式。BMPs是一类酸性糖蛋白,属于乙型转化生长因子(transforming growth factor-bate, TGF-βs)超家族,能够诱导促进软骨和骨的形成,在胚胎发育过程中发挥重要的作用,包括脑的发育和骨的形成。BMPs在体外与多种不同性质的载体连接,可以组成各种类型的有生物诱骨活性的骨修复材料,在矫形外科等领域有广泛的应用前景及重要的应用意义。目前最少有20种BMPs被确认,这些BMPs被广泛应用于骨的再生、牙质的生长和肾脏细胞的生长发育等研究中。BMP-2是BMPs中生物学活性最高的蛋白之一,也是研究最为广泛的生长因子之一,其主要生物学作用是诱导未分化的间质细胞分化增殖,形成软骨和新生骨。直接局部应用BMP-2,因为药物的弥散和免疫反应,疗效较低。故应用转基因技术将编码BMP-2的基因导入恰当的靶细胞内,使之连续释放BMP-2,并以自分泌或旁分泌的形式作用于靶细胞,则可以大大弥补外源性细胞因子局部应用的缺陷。BMP-7最初从骨基质中分离纯化得到,其功能是调控骨和软骨的发生,它与早前从牛成骨蛋白提取物中分离的成骨蛋白1(osteogenetic protein,OP-1)是同一种蛋白。BMP-7具有细胞因子的特点,用量少而能发挥很大的作用,但它进入体内后易随体液流失降解,且半衰期短,不能局限在骨缺损局部发挥作用,因此必须寻找更有效的替代方法,使其稳定表达,基因治疗成为备选的方法之一。BMP-2和-7基因开放读码框(open reading frame, ORF)均可编码由信号肽、前肽和成熟肽组成的多肽,由蛋白酶切去信号肽和前肽后可得到有功能的成熟肽。在本研究将利用基因重组技术,从BMP-2和-7基因表达量丰的骨肉瘤细胞中克隆两基因的成熟肽的基因序列,并构建它们的真核表达载体。实验中应用的真核表达载体为pcDNA3.1(+)。结果显示:本研究已成功克隆和构建了BMP-2和-7成熟肽的真核表达载体,重组子序列与Genebank中登录的序列完全一致。实验结果可为在骨修复和细胞分化增殖等方面得到广泛应用,可为应用BMP-2和-7进行基因治疗等提供有力的实验支持。(本文来源于《广州医学院》期刊2009-04-01）
董文,杨莉莉,孙健,刘增君[6]（2008）在《人骨形成蛋白-2成熟肽在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达》一文中研究指出目的利用甲醇毕赤酵母表达系统,高效分泌表达人骨形成蛋白-2成熟肽(hBMP-2)。方法利用PCR方法扩增得到hBMP-2基因,构建其毕赤酵母真核表达载体pPICZaC/hBMP2,电转化巴斯德毕氏酵母X-33,于28℃进行甲醇诱导分泌表达,用PCR法、SDS-PAGE、WesternBlot等方法筛选获得高效表达rhBMP-2的工程菌株,并进行了表达产物的纯化和活性测定。结果表达产物分泌至培养上清中,rhBMP-2含量达100mg·L-1。SDS-PAGE初步验证了表达产物的分子量,经WesternBlot和ELISA检测到重组表达产物的特异性结合活性。结论构建了重组hBMP-2的基因工程菌,并在毕赤酵母中实现了高效分泌表达,为进一步研究其活性和功能奠定了基础。(本文来源于《海南医学》期刊2008年03期）
黄红杰[7]（2007）在《人腮腺多形性腺瘤中骨形成蛋白-2成熟肽编码区基因克隆及序列分析》一文中研究指出目的克隆腮腺多形性腺瘤(pleomorphic adenoma,PA)中骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein,BMP-2)成熟肽编码区基因片段,构建含有该基因片段的重组质粒,并DNA序列分析。方法从5例腮腺PA标本中分别提取总RNA,用特异性引物经逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增BMP-2成熟肽编码区基因片段,连接质粒载体pGEM-T,转化至感受态大肠杆菌JM109,挑选阳性克隆培养,抽提重组质粒DNA,测序鉴定。结果重组质粒DNA测序表明,插入的基因片段中有2个碱基发生改变,但所编码的氨基酸不变。结论从腮腺PA标本中成功克隆BMP-2成熟肽编码区基因片段,并构建重组质粒。(本文来源于《杭州师范学院学报(医学版)》期刊2007年04期）
邵彩慧,刘瑞吉,廉红星[8]（2007）在《骨形成发生蛋白-7成熟肽基因克隆及序列测定》一文中研究指出目的:克隆人骨形态发生蛋白-7成熟肽基因。方法:根据Genebank人骨形态发生蛋白-7基因序列合成两条引物,从培养的人胎儿软骨细胞中提取mRNA,利用OnestepRT-PCR技术扩增出人骨形态发生蛋白-7成熟肽的基因序列,将PCR扩增产物基因片段连接克隆载体质粒中转化大肠杆菌DH5α进行克隆筛选鉴定及测序。结果:琼脂糖凝胶电泳检测RT-PCR产物显示一长约456bp的条带,阳性克隆质粒经双酶切可切出约456bp的片段,DNA测序结果与Genebank中的序列相符。结论:利用RT-PCR技术可成功的从人胎儿软骨细胞中克隆出人BMP-7成熟肽基因。(本文来源于《中国误诊学杂志》期刊2007年03期）
刘蕾,王慧,颜光涛,史晶,包士中[9]（2006）在《人骨形成蛋白-7成熟肽基因在巴斯德毕氏酵母中的分泌表达》一文中研究指出目的:利用甲醇酵母表达系统,构建重组人骨形成蛋白-7(rhBMP-7)成熟肽的基因工程菌,并实现其分泌表达。方法:采用PCR方法,依据GenBank数据库中hBMP-7成熟肽序列(AccessionNo.NM_001719)设计并合成一对引物,从已构建的含hBMP-7的克隆载体中扩增获得人骨形成蛋白-7成熟肽基因片段,并以pPIC9K为表达载体构建重组表达质粒,电转化巴斯德毕氏酵母SMD1168,于30℃进行甲醇诱导分泌表达,经筛选获得rhBMP-7成熟肽表达株,并进行了表达产物的活性测定。结果:表达产物存在于培养上清中,约占分泌蛋白总量的8%。经Western印迹分析可以检测到重组表达产物,ELISA检测其具有特异性结合活性。结论:构建了重组人骨形成蛋白-7成熟肽的基因工程菌并在甲醇酵母中实现了分泌表达,为进一步的活性及功能研究奠定了基础。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2006年06期）
王涛[10]（2006）在《重组人骨形成蛋白成熟肽-4对辐射小鼠骨髓造血损伤修复作用初探》一文中研究指出骨形成蛋白(Bone Morphogenetic Proteins，BMPs)是一种分泌型糖蛋白，具有多种生物学功能。BMP2和BMP4是骨形成蛋白家族中的两个重要成员，在结构和功能上这两种蛋白都非常相似，两者都能够诱导骨组织的生成和造血组织的分化等，但BMP2诱导骨组织形成的活性更强，BMP4则对造血组织的作用更突出。在成体，BMP2诱导异位骨形成，成为用于骨组织工程的重要诱导因子：BMP4则可以促进造血干细胞的增殖，并诱导造血干细胞向红系、粒系和巨噬细胞系叁系细胞分化，从而能够促进受损伤的造血系统的全面再生与恢复；这些特性使得BMP2和BMP4都具有很好的临床应用前景。 在BMP的制备过程中，真核表达系统表达量低，表达产物回收、纯化困难、生产成本很高；原核表达系统，特别是大肠杆菌系统，具有表达效率高，容易操作，容易监控，产物稳定，生产成本低等优点，故而我们在进行BMP的大规模制备过程中选择了大肠杆菌表达系统。目前，重组人骨形成蛋白2的大规模制备已有较多报道，本研究的目的，就是应用我们目前已经比较成熟的制备BMP2的工艺，来制备BMP4，来验证大规模制备这两种蛋白时，能否用相同的发酵程序及相近的纯化方法。 两种工程菌株(DH5α／pDH2-BMP-4m及DH5α／pDH2-BMP-2m)分别(本文来源于《第四军医大学》期刊2006-05-01）
人骨形成蛋白成熟肽论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:以生物制备骨形成蛋白10(BMP10)为目标,研究BMP10成熟肽在大肠杆菌中的表达及活性。方法:以人源BMP10成熟肽基因为模板,PCR获得N端带有组氨酸标签(6×His)的融合基因6×His-m BMP10,构建p ET28a/m BMP10表达载体;热击转染大肠杆菌BL21(DE3)菌株,卡那霉素抗性筛选获得重组表达菌株BL21/p ET28a-6×His-m BMP10,IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE电泳、Western印迹对蛋白进行分析;超声波破碎菌体,收集包涵体,镍柱亲和层析纯化获得电泳纯目的蛋白;透析复性后,非还原SDS-PAGE检验目标蛋白的二聚体形成;通过体外细胞实验检测蛋白活性。结果:纯化得到纯度90%以上的m BMP10,复性后二聚体得率约为40%;活性实验测得P19细胞的Smad6蛋白表达上调3倍左右。结论:通过大肠杆菌表达体系获得具有生物活性的BMP10,为后续作用机理研究奠定了实验基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人骨形成蛋白成熟肽论文参考文献
[1].王涛,康涛,雷琦,杨谦,曹冰清.重组人骨形成蛋白成熟肽4对急性放射损伤小鼠造血系统的修复作用[J].新乡医学院学报.2017
[2].李文军,郑雄飞,龚笑海,金坚.骨形成蛋白10成熟肽在大肠杆菌中的表达纯化及活性分析[J].生物技术通讯.2016
[3].刘绍凡,陈愉,万锐杰,徐敏敏.重组人骨形成蛋白成熟肽-4对辐射小鼠骨髓造血损伤的修复作用[J].检验医学与临床.2013
[4].吉建新,廖伟娇,刘利东,卢春生,朱伯平.人骨形成蛋白2和人骨形成蛋白7成熟肽编码区基因克隆和真核表达载体的构建[J].广东医学.2010
[5].卢春生.人骨形成蛋白2和7成熟肽编码区基因克隆和真核表达载体的构建[D].广州医学院.2009
[6].董文,杨莉莉,孙健,刘增君.人骨形成蛋白-2成熟肽在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达[J].海南医学.2008
[7].黄红杰.人腮腺多形性腺瘤中骨形成蛋白-2成熟肽编码区基因克隆及序列分析[J].杭州师范学院学报(医学版).2007
[8].邵彩慧,刘瑞吉,廉红星.骨形成发生蛋白-7成熟肽基因克隆及序列测定[J].中国误诊学杂志.2007
[9].刘蕾,王慧,颜光涛,史晶,包士中.人骨形成蛋白-7成熟肽基因在巴斯德毕氏酵母中的分泌表达[J].生物技术通讯.2006
[10].王涛.重组人骨形成蛋白成熟肽-4对辐射小鼠骨髓造血损伤修复作用初探[D].第四军医大学.2006
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