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丁香假单孢菌重组褐藻胶裂解酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性

2020-12-02阅读(77)

丁香假单孢菌重组褐藻胶裂解酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性

论文摘要

目的:将丁香假单孢菌的褐藻胶裂解酶进行克隆表达和纯化,研究重组酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性,为进一步研究该酶的结构与功能奠定良好的基础。方法:利用PCR扩增褐藻胶裂解酶基因,将它克隆至表达载体pET-28a;表达产物用亲和层析纯化,研究重组酶的酶学性质;通过测定酶解产物的还原能力和清除ABTS·+和·OH自由基的能力,分析酶解产物的抗氧化活性。结果:来自丁香假单孢菌的重组褐藻胶裂解酶的分子质量为40.8 ku。该重组酶专一性降解聚甘露糖醛酸,酶的最适反应温度和pH分别为30℃和7.5,温度低于50℃时稳定。除了SDS和DTT,重组酶对其它抑制剂和去垢剂具有较好的抗性。酶解产物对ABTS·+和·OH自由基的半数抑制剂量IC50分别为1.56 mg/mL和0.56 mg/mL,还原能力较强。结论:该重组褐藻胶裂解酶的酶解产物有一定的抗氧化活性,具有应用潜力。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌株和质粒
  •     1.1.2 主要试剂
  •     1.1.3 培养基LB培养基
  •   1.2 主要仪器、设备
  •   1.3 重组表达质粒的构建
  •   1.4 重组褐藻胶裂解酶的诱导表达及纯化
  •   1.5 重组褐藻胶裂解酶的性质研究
  •     1.5.1 褐藻胶裂解酶的活力测定
  •     1.5.2酶的底物特异性研究
  •     1.5.3 温度对酶活性和稳定性的影响
  •     1.5.4 pH对酶活性的影响
  •     1.5.5 金属离子对重组酶活性的影响
  •     1.5.6 抑制剂和去垢剂对酶活性的影响
  •     1.5.7 重组酶的动力学参数测定
  •   1.6 酶解产物的抗氧化活性研究
  • 2 结果
  •   2.1 褐藻胶裂解酶在大肠杆菌中的表达
  •   2.2 重组褐藻胶裂解酶的性质
  •     2.2.1 酶的底物特异性
  •     2.2.2 温度对酶活性及稳定性的影响
  •     2.2.3 pH值对酶活性的影响
  •     2.2.4 金属离子对酶活性的影响
  •     2.2.5 抑制剂和去垢剂对酶活性的影响
  •     2.2.6 重组褐藻胶裂解酶的动力学参数
  •   2.3 重组褐藻胶裂解酶酶解产物的抗氧化活性
  •     2.3.1清除ABTS自由基的能力
  •     2.3.2 清除·OH自由基的能力
  •     2.3.3 还原能力
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 吴丽云,朱艳冰,银小倩,李鹤宾,倪辉,肖安风

    关键词: 丁香假单孢菌,褐藻胶裂解酶,酶学性质,抗氧化活性

    来源: 中国食品学报 2019年11期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学,有机化工

    单位: 集美大学食品与生物工程学院,福建省食品微生物与酶工程重点实验室,厦门市食品与生物工程技术研究中心,厦门市南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室,厦门医学院

    基金: 国家自然科学基金项目（41976124）,福建省自然科学基金项目（2016J01162）

    分类号: Q55;TQ432.74

    DOI: 10.16429/j.1009-7848.2019.11.005

    页码: 38-45

    总页数: 8

    文件大小: 405K

    下载量: 245

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