导读:本文包含了敏感性钾离子通道论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:敏感性,通道,离子,心肌,线粒体,损伤,列缺。
敏感性钾离子通道论文文献综述
孙朝阳,周坤,马翔[1]（2019）在《线粒体ATP敏感性钾离子通道开放剂改善冠心病大鼠模型心肌氧化应激损伤的分子机制》一文中研究指出目的探索线粒体ATP敏感性钾离子通道(mito KATP)开放剂改善冠心病大鼠模型心肌氧化应激损伤的分子机制。方法选取40只SD大鼠随机分为4组:正常对照组(不造模且不给予二氮嗪药物干预)、假手术组(仅切皮不进行造模手术)、模型组(制作冠心病大鼠模型,但不给予二氮嗪药物干预)和药物组(制作冠心病大鼠模型,给予二氮嗪药物3 mg/kg干预),每组10只。利用实时荧光定量聚合酶链式反应及Western blotting实验测定各组血管生成因子[成纤维细胞生长因子2(FGF-2)和血管内皮生长因子(VEGF)]m RNA及相关蛋白的表达量,同时比较各组大鼠细胞内的乳酸脱氢酶、线粒体膜电位(MMP)和细胞死亡率。采用SPSS 22.0软件进行数据处理。组间比较采用方差分析或者t检验。结果与模型组相比,药物组大鼠FGF-2[(100. 21±12. 33)×103vs (120. 43±10. 33)×103IU]与VEGF [(163. 31±9. 33)×10~3vs (181. 33±11. 13)×10~3IU]m RNA转录水平、FGF-2 [(0. 69±0. 33) vs (1. 32±0. 33)与VEGF [(0. 68±0. 33) vs (1. 20±0. 13)]表达水平、乳酸脱氢酶[(49. 32±3. 51) vs (156. 12±10. 18) U/L]表达均显着降低(P <0. 05)。与模型组相比,药物组细胞死亡率显着降低[(30. 32±3. 48)%vs (66. 12±3. 23)%],而荧光强度显着增加[(780. 12±9. 20) vs (220. 24±6. 15),P<0. 05]。结论 mito KATP通道开放剂可通过促进冠心病大鼠血管FGF-2和VEGF增加,增强乳酸脱氢酶活性,降低MMP、细胞死亡率和冠心病大鼠心肌氧化应激损伤。(本文来源于《中华老年多器官疾病杂志》期刊2019年02期）
边芳[2]（2018）在《孕酮对Aβ_(25-35)损伤的大鼠原代皮层神经元ATP敏感性钾离子通道亚基Kir6.2表达的影响》一文中研究指出阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD),是一种退行性中枢神经系统的疾病,伴有认知行为和功能失常。病理特征为脑细胞外Aβ聚集,产生神经毒性并造成神经元大量丢失,出现学习记忆障为主的临床表现,已有研究表明CaMKⅡ(钙调蛋白依赖性蛋白激酶II)在学习和记忆获取中发挥关键作用,而细胞内钙调节与钾通道密切相关。ATP敏感性钾离子通道(ATP-sensitive potassium channel,K_(ATP))由内向整流钾通道亚单位(Kir6.1/Kir6.2)和调节性磺脲受体(SUR1/SUR2)1:1组成的异构八聚体,偶联细胞电活动和细胞代谢,K_(ATP)通道在皮层神经元和海马神经元中分布广泛,早期就有研究表明神经元细伤均伴随大量钾离子的丢失,并且近来的药理学研究已经发现K_(ATP)通道可能参与神经保护,有望成为AD潜在的治疗靶点。Aβ可以引起线粒体功能失调,ATP水平下降,进而细胞代谢出现紊乱,最终导致神经元损伤,而K_(ATP)通道功能在正常状态下具有维持神经细胞线粒体膜电位、抑制神经元凋亡的作用。孕酮(Progesterone,PROG)作为一种内源性神经甾体在正常的神经活动和神经疾病的治疗中发挥重要作用。孕酮在AD模型中对钾通道的影响及抑制神经元凋亡的机制尚不明确。第一部分孕酮对Aβ所致损伤神经元中Kir6.2和CaMKⅡ蛋白的调节目的:观察不同浓度孕酮对原代培养皮层神经元细胞的保护作用,探讨孕酮对K_(ATP)通道调节的机制。方法:取24 h内新生SD乳鼠,在无菌超净台中取大脑皮层,培养皮层神经元,免疫细胞化学染色鉴定神经元纯度。用Aβ活性片段Aβ_(25-35)建立AD细胞模型,采用MTT法、Hoechst33258染核法,检测不同浓度孕酮对神经元活力和凋亡率的影响,Western blot法检测孕酮对Aβ所致神经元损伤中Kir6.2蛋白的表达的影响。吡那地尔作用于神经元细胞后观察Kir6.2和p-CaMKⅡ/CaMKⅡ蛋白表达的变化。结果:1.神经元纯度鉴定免疫荧光双染结果显示神经元纯度为90.5%。2.孕酮对Aβ_(25-35)作用下皮层神经元存活率的影响经MTT法检测,Aβ_(25-35)+PROG(0.5μM)组和Aβ_(25-35)+PROG(1μM)组与Aβ_(25-35)组相比细胞活力均无显着差异,Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组和Aβ_(25-35)+PROG(4μM)组与Aβ_(25-35)组相比细胞活力显着提高,分别为(P<0.05)、(P<0.01)。3.孕酮对Aβ_(25-35)作用下神经元凋亡率的影响Hoechst33258染核发现,Aβ_(25-35)+PROG(0.5μM)和Aβ_(25-35)+PROG(1μM)组细胞凋亡率与Aβ_(25-35)组相比均无显着差异,Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组和Aβ_(25-35)+PROG(4μM)组与Aβ_(25-35)组相比细胞凋亡显着减少,分别为(P<0.01)、(P<0.01)。4.孕酮对Aβ_(25-35)作用下神经元Kir6.2蛋白表达的影响经Western Blot检测,与Aβ_(25-35)处理组相比,Aβ_(25-35)+PROG(0.5μM)组,Aβ_(25-35)+PROG(1μM)组Kir6.2蛋白表达无显着差异而Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组和Aβ_(25-35)+PROG(4μM)组Kir6.2蛋白表达均显着降低,分别为(P<0.05)、(P<0.01)。5.孕酮对Aβ_(25-35)作用下的神经元CaMKⅡ蛋白表达的影响经Western Blot检测,Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组与Aβ_(25-35)组相比Kir6.2蛋白表达显着降低(P<0.05),p-CaMKⅡ/CaMKⅡ蛋白表达显着升高(P<0.05);Aβ_(25-35)+PROG(2μM)+Pin(10μM)组与Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组相比Kir6.2蛋白表达显着升高(P<0.05),p-CaMKⅡ/CaMKⅡ蛋白表达显着降低(P<0.05)。第二部分孕酮的基因调节和非基因调节对Kir6.2蛋白表达的影响目的:探索孕酮膜受体和核受体对孕酮调节ATP敏感性钾离子通道的介导作用。方法:采用MTT法、Hoechst33258染核法检测孕酮膜受体拮抗剂AG205和孕酮核受体拮抗剂RU486预处理后对神经元活力和凋亡率的影响,并用Western blot法检测Kir6.2蛋白表达的变化。结果:1.孕酮受体拮抗剂对Aβ_(25-35)损伤神经元细胞活力的影响经MTT法检测,Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组与Aβ_(25-35)组相比细胞活力显着提高(P<0.01),Aβ_(25-35)+PROG(2μM)+RU486(10μM)组与Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组相比结果无显着差异,Aβ_(25-35)+PROG(2μM)+AG205(10μM)组与Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组相比细胞活力显着提高(P<0.05)。2.孕酮受体拮抗剂对Aβ_(25-35)损伤神经元细胞凋亡的影响Hoechst33258染细胞核发现,Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组与Aβ_(25-35)组相比细胞凋亡率显着下降(P<0.01),Aβ_(25-35)+PROG(2μM)+RU486(10μM)组与Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组相比细胞凋亡率无显着差异,Aβ_(25-35)+PROG(2μM)+AG205(10μM)组与Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组相比细胞凋亡显着增多(P<0.01)。3.孕酮受体拮抗剂对Aβ_(25-35)损伤神经元细胞Kir6.2蛋白表达的影响经Western Blot检测,与Aβ_(25-35)组相比Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组Kir6.2蛋白表达显着降低(P<0.01),Aβ_(25-35)+PROG(2μM)+AG205(10μM)组与Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组相比Kir6.2蛋白表达升高(P<0.05),Aβ_(25-35)+PROG(2μM)+RU486(10μM)组与Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组相比Kir6.2蛋白表达无显着差异。结论:1.孕酮显着减少Aβ诱导的神经元凋亡,发挥神经保护作用。2.孕酮显着下调Kir6.2蛋白表达,显着提高CaMKⅡ蛋白的磷酸化水平,可能是孕酮发挥神经保护作用的分子机制之一。3.孕酮对Kir6.2蛋白表达的下调作用可以被PGRMC1受体拮抗剂逆转。(本文来源于《河北医科大学》期刊2018-03-01）
陈马云,崔志敏,章琳,王良兴,黄晓颖[3]（2017）在《ATP敏感性钾离子通道与低氧性肺动脉高压关系的研究进展》一文中研究指出ATP敏感性钾离子通道(K_(ATP))是一种存在于细胞膜和线粒体膜上的内向整流型钾离子通道。该通道对低氧非常敏感,通过调节生物膜电位而参与生物体一系列生理和病理作用。目前对低氧性肺动脉高压(HPAH)的研究有较长历史,但其发病机制尚未完全清楚。近年研究表明,K_(ATP)与HPAH中肺血管收缩和肺血管结构重塑关系密切,且研究结果存在一些争议。本文就K_(ATP)与HPAH关系的研究现状作一综述,为今后进一步深入研究通过K_(ATP)防治HPAH提供新思路。(本文来源于《温州医科大学学报》期刊2017年11期）
郑丽蓉[4]（2016）在《兔SAH早期不同时间点基底动脉平滑肌细胞ATP敏感性钾离子通道的电流变化》一文中研究指出目的:通过全细胞膜片钳技术研究兔蛛网膜下腔出血(SAH)早期不同时间点基底动脉平滑肌细胞ATP敏感性钾离子通道的电流变化。方法:40只新西兰大白兔随机分为5组,每组8只,分别为蛛网膜下腔出血(SAH)后24小时(S_1)组、48小时(S_2)组、72小时(S3)组、假手术(C)组和正常(N)组。通过两步酶消化法分离获得各组基底动脉平滑肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录各组细胞膜电容、ATP敏感性钾离子通道电流,并且在细胞浴液中加入ATP敏感性钾离子通道特异性阻断剂格列本脲,鉴定ATP敏感性钾离子通道电流。在Clampfit10.0、origin8.6和SPSS18.0软件上对各组原始电流数据进行分析、拟合、作图。数据以均数±标准差(±s)表示,各组间数据比较采用单因素方差分析(ANOVA),组内比较采用配对t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果:各组细胞数量、大小、膜电容无明显差异(P>0.05),记录的电流为ATP敏感性钾离子通道电流,其中S_1~S_3组ATP敏感性钾离子通道电流较C组和N组减小,S3组电流减小最为显着(P<0.05),C组和N组电流无明显差异(P>0.05)。结论:蛛网膜下腔出血(SAH)早期基底动脉平滑肌细胞ATP敏感性钾离子通道电流减小,以S_3组电流减小最为显着。(本文来源于《贵州医科大学》期刊2016-05-27）
白秀平,李宏亮,杨文英,萧建中,王冰[5]（2016）在《钾离子通道开放剂二氮嗪静脉注射对正常大鼠血糖及胰岛素敏感性的影响》一文中研究指出目的观察二氮嗪(DZ)对正常大鼠血糖及IS的影响。方法 SD大鼠22只随机分为正常对照(Con)组和DZ组,每组各11只。两组在空腹8~10 h后予颈静脉插管,Con组输注生理盐水6 h,DZ组从颈静脉注射DZ(30 mg/kg)后,输注生理盐水,作正常血糖高胰岛素钳夹试验,以葡萄糖输注率(GIR)评价IS。实验结束后,检测血糖和胰岛素,取骨骼肌肌肉组织,行RT-PCR检测葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、胰岛素受体(INSR)、胰岛素受体底物1(IRS1)及胰岛素受体底物2(IRS2)基因表达。结果(1)DZ组血糖水平较Con组增高[(6.78±0.86)vs(13.83±0.94)mmol/L,P<0.01],胰岛素水平下降[(11.58±0.82)vs(9.84±0.86)μIU/ml,P<0.01)];(2)DZ组GIR较Con组下降约55.6%(P<0.01);(3)DZ组肌肉组织GLUT4、INSR、IRS1、IRS2基因表达较Con组分别减少约17%、44%、15%及13%(P<0.05或P<0.01)。结论 DZ静脉输注可以导致正常大鼠血糖增高、胰岛素水平减少及IR。(本文来源于《中国糖尿病杂志》期刊2016年05期）
梅红芳,蔡晓红[6]（2016）在《ATP敏感性钾离子通道在脑缺血缺氧中的双重作用》一文中研究指出ATP敏感性钾离子通道(KATP)是一种微弱的内向整流性钾离子通道。该通道对钾离子具有选择性,能量的消耗可以使其激活,通过将细胞代谢和细胞电活动联系在一起,从而在细胞功能的调节中起到重要的作用。目前已有关于KATP在脑缺血缺氧中作用的报道,但大部分研究将重心放在该通道在脑缺血缺氧早期所起的保护作用方面,而其在后期引起的损伤作用并未引起足够的重视。(本文来源于《医学综述》期刊2016年06期）
徐林,张登文,杨仕杰,田学愎,王煜[7]（2015）在《远端缺血再灌注预处理对心肌细胞膜ATP敏感性钾离子通道表达的影响》一文中研究指出目的:观察远端肢体缺血再灌注预处理后心肌细胞膜KATP通道在不同时点的表达变化。方法:夹闭大鼠双侧股动脉5 min后开放5 min,如此重复3次完成远端肢体缺血再灌注预处理,分别于处理后1、4、24和48 h处死大鼠,取其左心室肌组织,检测其心肌细胞膜KATP通道各亚基表达变化。结果:远端肢体缺血再灌注预处理后,心肌细胞膜KATP通道的表达量增加,在4~24 h内增加最明显。结论:远端肢体缺血再灌注预处理可上调心肌细胞膜KATP通道的表达,这种表达的改变可能参与了远端肢体缺血再灌注预处理对心脏的保护作用机制。(本文来源于《中国临床药理学与治疗学》期刊2015年04期）
李迪,王颖,戴俭宇,刘昱甫,荆秦[8]（2015）在《电针内关穴对心肌缺血大鼠ATP敏感性钾离子通道蛋白的影响》一文中研究指出目的:研究电针循经穴位与其他穴位对心肌缺血大鼠心肌细胞ATP敏感性钾离子通道相关蛋白表达的影响。方法:通过注射盐酸异丙肾上腺素制作大鼠心肌缺血模型,针刺内关、列缺、非经非穴进行干预,采用Western blot检测Kir6.1、Kir6.2、SUR2A和SUR2B的蛋白表达水平。结果:与模型组比较,内关组和列缺组蛋白表达均显着降低,非经非穴组蛋白表达降低不显着;与列缺组比较,内关组蛋白表达显着降低。结论:电针内关穴和列缺穴均可降低心肌缺血大鼠心肌细胞ATP敏感性钾通道相关蛋白的表达,且心包经内关穴的针刺效应优于列缺穴。(本文来源于《中国中医基础医学杂志》期刊2015年05期）
高丹[9]（2015）在《线粒体ATP敏感性钾离子通道在大鼠心肌缺血损伤后修复中的作用》一文中研究指出心肌缺血（myocardial ischemia）是临床常见的病理过程，常由冠心病导致的冠脉狭窄或闭塞引起。当供给心肌的血流量减少时，细胞从血液中摄取的氧减少，导致心肌细胞的有氧代谢减弱，ATP生成减少，不能满足机体维持正常功能的需要。同时，代谢废物也不能够被有效的清除，引起组织酸中毒、钙超载、ROS蓄积等，导致心肌受损，心脏功能减退。线粒体ATP敏感性钾离子通道（mitoK-ATP）广泛存在于线粒体内膜上，当细胞内ATP浓度明显降低，如组织发生缺氧，代谢受到抑制，ATP合成受阻或大量分解时，会引起该通道的开放。我们基于mitoK-ATP通道的生理功能和目前国内外研究现状，推测开放mitoK-ATP通道可能是通过保护线粒体结构的完整和维持线粒体功能的稳定，使细胞在缺血、缺氧条件下的氧化磷酸化效能增强，减轻组织内的氧化应激水平，减少心肌细胞凋亡等，发挥心脏保护作用。本研究通过给予异丙肾上腺素的方法，模拟临床上因冠心病导致冠脉狭窄或闭塞造成的心肌缺血，建立大鼠心肌缺血损伤模型。探讨mitoK-ATP通道在大鼠心肌缺血损伤后修复中的作用及机制。首先，本实验通过制备大鼠心肌缺血损伤的模型来探究开放mitoK-ATP通道对心肌缺血损伤后的保护作用。分别从对大鼠心脏的大体标本检测（TTC染色）以及对石蜡切片进行组织学检测（HE染色）两个方面，对各组心脏组织的损伤情况进行评估。证明了开放mitoK-ATP通道对大鼠心肌缺血损伤具有保护作用。其次，通过对大鼠心肌细胞凋亡情况的检测，证明开放mitoK-ATP通道可以通过减少细胞凋亡来保护心肌抵抗缺血、缺氧损伤。接下来，我们验证了Kir6.2亚基的表达情况，其表达量代表细胞内mitoK-ATP通道的开放程度。结果证明了给予mitoK-ATP通道开放剂能够提高Kir6.2亚基的表达水平，以促进mitoK-ATP通道的开放，发挥心脏保护作用。最后，本实验为了进一步探讨mitoK-ATP通道对心肌缺血后保护作用的机制，检测了能够反映组织细胞内氧化应激水平的重要标记物Nitrotyrosine的表达水平以及细胞凋亡通路的关键蛋白酶活性Caspase-3的表达水平，证明开放mitoK-ATP通道可以减轻组织ROS的氧化损伤、降低活性Caspase-3的表达，从而抑制凋亡的发生。综上所述，本实验通过制备大鼠心肌缺血模型，探究mitoK-ATP通道对心肌缺血损伤后的保护作用及机制。结果阐明了mitoK-ATP通道能够通过减少组织ROS的蓄积以减轻细胞的氧化应激损伤，减少心肌细胞凋亡，从而保护心脏。(本文来源于《吉林大学》期刊2015-05-01）
李迪[10]（2015）在《电针内关穴对心肌缺血大鼠ATP敏感性钾离子通道相关蛋白的影响》一文中研究指出目的：本项实验以异丙肾上腺素制备大鼠心肌缺血模型,观察不同针刺点对心肌缺血大鼠心肌细胞ATP敏感性钾离子通道相关蛋白Kir6.1、Kir6.2、SUR2A、SUR2B及其辅助蛋白PKA、PKC、PKG表达量的调控作用,探究针刺改善心肌缺血缺氧状态的可能机制,验证针刺治疗心肌缺血的循经特异性。材料与方法：健康雄性SPF级SD大鼠72只,随机抽取10只作为对照组,于四肢内侧根部皮下一次性多点位注射生理盐水两次(间隔24小时)；其余62只大鼠采用同样方式注射异丙肾上腺素(85mg/kg)制备动物模型。根据造模前后心电图改变,将造模成功的40只大鼠随机分成模型组、内关组、列缺组、非经非穴组,每组10只。采用“华佗牌”针灸针(0.20mm×25mm)刺入各组大鼠相应穴位皮下约2m。待大鼠稳定后,接电针仪,施以疏密波,频率(2-20)Hz,电流强度以大鼠前肢出现轻微颤动为宜。留针20分钟,每日1次,连续7次。对照组与模型组不进行针刺。采用Western Blot检测技术检测大鼠心肌细胞Kir6.1、Kir6.2、SUR2A、SUR2B以及PKA、PKC、PKG的蛋白表达量。结果：1.与对照组比较,模型组大鼠心电图T波电压明显降低,变化有统计学意义(P<0.05)。与造模后相比,内关组和列缺组大鼠心电图T波电压均有回升,变化有统计学意义(P<0.05),且内关组大鼠心电图T波电压升高幅度明显大于列缺组(P<0.05)；非经非穴组大鼠心电图T波电压的变化与模型组无统计学意义(P>0.05)。2.与对照组比较,模型组大鼠心肌细胞Kir6.1、Kir6.2、SUR2A、SUR2B的蛋白表达量均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,内关组和列缺组蛋白表达均显着降低(P<0.05),非经非穴组蛋白表达降低不显着(P>0.05)。与列缺组比较,内关组蛋白表达显着降低(P<0.05)。3.与对照组比较,模型组大鼠心肌细胞PKA、PKC、PKG的蛋白表达量均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,内关组和列缺组蛋白表达均显着降低(P<0.05),非经非穴组蛋白表达降低不显着(P>0.05)。与内关组比较,列缺组蛋白表达显着回升(P<0.05)。结论：1.心肌缺血时,大鼠心电图T波电压明显降低,针刺内关穴和列缺穴均可以有效地改善T波电压的异常改变,且内关穴的疗效明显优于列缺穴。2.正常大鼠的心肌细胞中,Kir6.1、Kir6.2、SUR2A、SUR2B的蛋白表达量较低；心肌缺血时,其表达量明显升高,针刺内关穴和列缺穴均可以有效地降低其升高幅度,且内关穴的疗效明显优于列缺穴。3.心肌缺血时,作为ATP敏感性钾离子通道的辅助蛋白,PKA、PKC、PKG的表达量明显升高,针刺内关穴和列缺穴均可以有效地降低其升高幅度,且内关穴的疗效明显优于列缺穴。4.手厥阴心包经的内关穴和手太阴肺经的列缺穴所处的部位相近,对ATP敏感性钾离子通道相关蛋白及其辅助蛋白的表达量均具有调节作用,且内关穴的疗效优于列缺穴,从而证明了内关穴的经穴特异性。(本文来源于《辽宁中医药大学》期刊2015-03-01）
敏感性钾离子通道论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD),是一种退行性中枢神经系统的疾病,伴有认知行为和功能失常。病理特征为脑细胞外Aβ聚集,产生神经毒性并造成神经元大量丢失,出现学习记忆障为主的临床表现,已有研究表明CaMKⅡ(钙调蛋白依赖性蛋白激酶II)在学习和记忆获取中发挥关键作用,而细胞内钙调节与钾通道密切相关。ATP敏感性钾离子通道(ATP-sensitive potassium channel,K_(ATP))由内向整流钾通道亚单位(Kir6.1/Kir6.2)和调节性磺脲受体(SUR1/SUR2)1:1组成的异构八聚体,偶联细胞电活动和细胞代谢,K_(ATP)通道在皮层神经元和海马神经元中分布广泛,早期就有研究表明神经元细伤均伴随大量钾离子的丢失,并且近来的药理学研究已经发现K_(ATP)通道可能参与神经保护,有望成为AD潜在的治疗靶点。Aβ可以引起线粒体功能失调,ATP水平下降,进而细胞代谢出现紊乱,最终导致神经元损伤,而K_(ATP)通道功能在正常状态下具有维持神经细胞线粒体膜电位、抑制神经元凋亡的作用。孕酮(Progesterone,PROG)作为一种内源性神经甾体在正常的神经活动和神经疾病的治疗中发挥重要作用。孕酮在AD模型中对钾通道的影响及抑制神经元凋亡的机制尚不明确。第一部分孕酮对Aβ所致损伤神经元中Kir6.2和CaMKⅡ蛋白的调节目的:观察不同浓度孕酮对原代培养皮层神经元细胞的保护作用,探讨孕酮对K_(ATP)通道调节的机制。方法:取24 h内新生SD乳鼠,在无菌超净台中取大脑皮层,培养皮层神经元,免疫细胞化学染色鉴定神经元纯度。用Aβ活性片段Aβ_(25-35)建立AD细胞模型,采用MTT法、Hoechst33258染核法,检测不同浓度孕酮对神经元活力和凋亡率的影响,Western blot法检测孕酮对Aβ所致神经元损伤中Kir6.2蛋白的表达的影响。吡那地尔作用于神经元细胞后观察Kir6.2和p-CaMKⅡ/CaMKⅡ蛋白表达的变化。结果:1.神经元纯度鉴定免疫荧光双染结果显示神经元纯度为90.5%。2.孕酮对Aβ_(25-35)作用下皮层神经元存活率的影响经MTT法检测,Aβ_(25-35)+PROG(0.5μM)组和Aβ_(25-35)+PROG(1μM)组与Aβ_(25-35)组相比细胞活力均无显着差异,Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组和Aβ_(25-35)+PROG(4μM)组与Aβ_(25-35)组相比细胞活力显着提高,分别为(P<0.05)、(P<0.01)。3.孕酮对Aβ_(25-35)作用下神经元凋亡率的影响Hoechst33258染核发现,Aβ_(25-35)+PROG(0.5μM)和Aβ_(25-35)+PROG(1μM)组细胞凋亡率与Aβ_(25-35)组相比均无显着差异,Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组和Aβ_(25-35)+PROG(4μM)组与Aβ_(25-35)组相比细胞凋亡显着减少,分别为(P<0.01)、(P<0.01)。4.孕酮对Aβ_(25-35)作用下神经元Kir6.2蛋白表达的影响经Western Blot检测,与Aβ_(25-35)处理组相比,Aβ_(25-35)+PROG(0.5μM)组,Aβ_(25-35)+PROG(1μM)组Kir6.2蛋白表达无显着差异而Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组和Aβ_(25-35)+PROG(4μM)组Kir6.2蛋白表达均显着降低,分别为(P<0.05)、(P<0.01)。5.孕酮对Aβ_(25-35)作用下的神经元CaMKⅡ蛋白表达的影响经Western Blot检测,Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组与Aβ_(25-35)组相比Kir6.2蛋白表达显着降低(P<0.05),p-CaMKⅡ/CaMKⅡ蛋白表达显着升高(P<0.05);Aβ_(25-35)+PROG(2μM)+Pin(10μM)组与Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组相比Kir6.2蛋白表达显着升高(P<0.05),p-CaMKⅡ/CaMKⅡ蛋白表达显着降低(P<0.05)。第二部分孕酮的基因调节和非基因调节对Kir6.2蛋白表达的影响目的:探索孕酮膜受体和核受体对孕酮调节ATP敏感性钾离子通道的介导作用。方法:采用MTT法、Hoechst33258染核法检测孕酮膜受体拮抗剂AG205和孕酮核受体拮抗剂RU486预处理后对神经元活力和凋亡率的影响,并用Western blot法检测Kir6.2蛋白表达的变化。结果:1.孕酮受体拮抗剂对Aβ_(25-35)损伤神经元细胞活力的影响经MTT法检测,Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组与Aβ_(25-35)组相比细胞活力显着提高(P<0.01),Aβ_(25-35)+PROG(2μM)+RU486(10μM)组与Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组相比结果无显着差异,Aβ_(25-35)+PROG(2μM)+AG205(10μM)组与Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组相比细胞活力显着提高(P<0.05)。2.孕酮受体拮抗剂对Aβ_(25-35)损伤神经元细胞凋亡的影响Hoechst33258染细胞核发现,Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组与Aβ_(25-35)组相比细胞凋亡率显着下降(P<0.01),Aβ_(25-35)+PROG(2μM)+RU486(10μM)组与Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组相比细胞凋亡率无显着差异,Aβ_(25-35)+PROG(2μM)+AG205(10μM)组与Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组相比细胞凋亡显着增多(P<0.01)。3.孕酮受体拮抗剂对Aβ_(25-35)损伤神经元细胞Kir6.2蛋白表达的影响经Western Blot检测,与Aβ_(25-35)组相比Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组Kir6.2蛋白表达显着降低(P<0.01),Aβ_(25-35)+PROG(2μM)+AG205(10μM)组与Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组相比Kir6.2蛋白表达升高(P<0.05),Aβ_(25-35)+PROG(2μM)+RU486(10μM)组与Aβ_(25-35)+PROG(2μM)组相比Kir6.2蛋白表达无显着差异。结论:1.孕酮显着减少Aβ诱导的神经元凋亡,发挥神经保护作用。2.孕酮显着下调Kir6.2蛋白表达,显着提高CaMKⅡ蛋白的磷酸化水平,可能是孕酮发挥神经保护作用的分子机制之一。3.孕酮对Kir6.2蛋白表达的下调作用可以被PGRMC1受体拮抗剂逆转。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
敏感性钾离子通道论文参考文献
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