CpxR对鼠伤寒沙门菌连接蛋白基因pmrD的调控作用

CpxR对鼠伤寒沙门菌连接蛋白基因pmrD的调控作用

论文摘要

前期发现黏菌素对鼠伤寒沙门菌acrB和cpxR双缺失后的cpxR回补株JS△acrB△cpxR::kan/pcpxR(JS△△/pR)的MIC值较标准株JS显著下降了16倍,且JS△△/pR中PhoPQ和PmrAB之间的连接蛋白基因pmrD的表达量显著降低。为探索cpxR对pmrD的调控作用,本研究构建了pmrD的单基因过表达菌株JS△acrB△cpxR::kan/ppmrD(JS△△/pD),并用overlapping PCR扩增得到cpxR和pmrD的共表达基因cpxR-pmrD,构建了cpxR、pmrD共表达菌株JS△acrB△cpxR::kan/pcpxR-pmrD(JS△△/pRD)。用微量肉汤稀释法测定了黏菌素对各菌株的最小抑菌浓度(MICs),同时测定了各菌株在LB肉汤中的生长曲线和黏菌素的杀菌曲线。结果表明,成功构建了鼠伤寒沙门菌pmrD的单基因过表达菌株JS△△/pD和cpxR、pmrD共表达菌株JS△△/pRD。MIC结果显示,黏菌素对JS△△/pR的MIC值较JS显著下降(16倍),JS△△/pD的MIC值没有变化,而JS△△/pRD的MIC值显著上升(16倍)。生长曲线显示,JS△△/pR的生长活性最低,JS△△/pD、JS△△/pRD的生长活性均高于JS△△/pR。黏菌素的杀菌曲线显示,JS△△/pRD在不同浓度黏菌素中的存活率显著高于JS△△/pD。这些结果表明:在JS△△背景下,pmrD对菌株黏菌素敏感性的影响依赖于cpxR,cpxR对pmrD的调控具有双向性,即对生理表达的pmrD具有负调控作用,而对过表达的pmrD具有正调控作用。本试验为全面系统阐明cpxR或cpxR与acrB相互作用调控沙门菌敏感性的分子机制奠定基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌株和质粒
  •   1.2 主要试剂和药品
  •   1.3 引物设计
  •   1.4 过表达菌株的构建
  •     1.4.1 过表达重组质粒的构建
  •     1.4.2 过表达重组质粒的电转化
  •     1.4.3 阳性转化子的鉴定
  •   1.5 MIC值的测定
  •   1.6 生长曲线的测定
  •   1.7 杀菌曲线的测定
  • 2 结果
  •   2.1 重组质粒的构建
  •   2.2 过表达菌株的构建
  •   2.3 MIC值的测定
  •   2.4 生长曲线的测定
  •   2.5 黏菌素杀菌曲线的测定
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 翟亚军,魏单单,梁军,刘营营,贺丹丹,吴华,苑丽,胡功政

    关键词: 鼠伤寒沙门菌,黏菌素

    来源: 中国兽医学报 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 河南农业大学牧医工程学院,郑州市畜牧局

    基金: 国家自然科学基金资助项目(31772799,31372481)

    分类号: S852.612

    DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.12.10

    页码: 2330-2335

    总页数: 6

    文件大小: 851K

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