论文摘要
目的本研究通过摇床法分离纯化培养小鼠原代小胶质细胞,并研究尼古丁对小胶质细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达和分泌的影响。方法从C57 BL/6新生鼠大脑中分离出皮层,切碎研磨后进行混合培养,摇床法分离纯化小胶质细胞并培养。CD11b、Iba1作为小胶质细胞特异性标记物用来检测、鉴定小胶质细胞,在激光共聚焦显微镜下观察、计数免疫荧光细胞化学染色后的阳性细胞。将纯化的小胶质细胞设置为三个组,分别为空白对照组,LPS组,LPS+NIC组。LPS+NIC组先加入10ug/ml LPS处理30 min,再加入10μmol尼古丁处理24 h。LPS组加入10μg/ml LPS处理4 h。空白对照组不做任何处理。使用qPCR检测尼古丁对小胶质细胞TNF-α的表达,酶联免疫吸附实验检测尼古丁对小胶质细胞TNF-α分泌的影响。结果培养混合细胞,再通过摇床法收获的小胶质细胞,细胞阳性率超过95.54%。免疫荧光细胞化学方法鉴定小胶质细胞纯度,小胶质细胞特异性标志物CD11b、Iba1,星形胶质细胞标志物GFAP检测结果,ImageJ分析小胶质细胞阳性率>95.54%,星型胶质细胞<4%,其它细胞<2%;LPS处理组与LPS+NIC处理组相比较,LPS+NIC组TNF-α的RNA水平的表达明显降低,且差异有统计学意义（P<0.05）;LPS单独处理组,小胶质细胞TNF-α分泌增加。而LPS+NIC组小胶质细胞TNF-α分泌降低,两组TNF-α分泌有明显差异,且有统计学意义（P<0.05）。结论利用差异贴壁,分离纯化得到了高纯度的小鼠原代小胶质细胞,相较于其它方法,对细胞的损伤小,可多次收获小胶质细胞,细胞得率高。尼古丁可抑制小鼠原代小胶质细胞TNF-α的分泌,可能为神经退行性疾病的治疗提供新的治疗方法。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 刘菲,胡玉婷,刘静,毛若颖,陶欣荣
关键词: 小胶质细胞,原代培养,尼古丁,肿瘤坏死因子
来源: 医学信息 2019年02期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技,基础科学
专业: 生物学,基础医学
单位: 安徽理工大学医学院
基金: 国家自然科学基金资助项目(编号:81471161),安徽省人才项目(编号:gxbjZD16),安徽理工大学硕士研究生创新基金项目(编号:2017CX2120)
分类号: R329.2
页码: 111-114
总页数: 4
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