谷春涛[1]2004年在《地衣芽孢杆菌TS-01培养条件的研究》文中研究说明地衣芽孢杆菌TS-01由中国农业科学院畜牧研究所分离，经中国科学院微生物研究所鉴定，可以用作饲用益生菌，其有效性已被饲喂实验所证明。为了实现地衣芽孢杆菌TS-01的工业化生产，对该菌株的液态培养条件进行了研究；同时也对其固态培养进行了初步研究。 首先对地衣芽孢杆菌TS-01的种子培养条件进行了研究，得到的结果为：最适生长温度为40℃；较适合的种子培养基为牛肉膏大豆蛋白胨培养基；最适初始pH值为7.5；种龄为13h～14h。 通过正交实验和单因素实验得出较适合的液态培养基为(g／L)：玉米粉14，豆饼粉46，玉米浆3，MgSO_4·7H_2O_2，MnSO_4·H_2O0.04。通过单因素实验得出最适初始pH为6.5，最适接种量为10％～15％。摇瓶培养周期以30h左右为宜。当在100L发酵罐上40℃培养26h时，得到的菌体浓度为1.14×10~(10)CFU／mL，芽孢浓度为1.07×10~(10)CFU／mL，芽孢形成率为93％。 通过正交实验得出较适合的固态培养基为：每千克固体物料中含米糠420g、麸皮580g、红糖7g，含水量为固体物料干重的60％。当采用液体种子接种，接种量为10％(v／w)时，37℃浅盘培养48h的菌体浓度为9.15×10~9CFU／g鲜曲，芽孢浓度为7.50×10~9CFU／g鲜曲，芽孢形成率在80％以上。
丁贤, 李卓佳, 于明超, 王华朗, 陈永青[2]2010年在《益生菌ZD02的分离及其在对虾集约化精养中的应用》文中研究说明从养殖环境分离纯化芽孢杆菌6株,对其进行消化酶活检测,根据检测的酶活指标选择ZD02作为待试验菌株并进行鉴定和热稳定性检测。结果表明:ZD02被鉴定为枯草芽孢杆菌,具有耐受高温的特性,90℃水浴10min存活率93%,95℃水浴5min存活率93%,100℃水浴5min存活82%,95℃和100℃水浴2min不影响芽孢菌存活,在调质温度102℃条件下,制粒后芽孢菌存活率94%;将经过鉴定的枯草芽孢杆菌发酵培养后应用于凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的集约化精养殖,试验组A在基础饲料中添加0.3%的芽孢杆菌。试验组B保持配方成本不变的基础上添加0.3%的芽孢杆菌,结果显示,试验组的成活率显着高于对照组(P<0.05),试验组A、B的产量分别比对照组提高了43.0%和36.7%(P<0.05),产值分别提高35.4%和21.0%(P<0.05),饲料系数比对照组分别降低了9.9%和8.7%(P<0.05);换水耗电、水质调节剂、内服药物3项费用合计,A组和B组较对照组分别节省了21.3%和22.3%(P<0.05);实验组之间各项指标差异不显着(P>0.05);表明,在对虾的集约化精养过程中合理利用益生芽孢杆菌可以增产增收。
张沛[3]2004年在《带有ALDC基因的青岛啤酒酵母工程菌的研究》文中认为双乙酰阈值很低，是啤酒中重要的风味物质，其含量是啤酒发酵是否成熟的重要标志。α-乙酰乳酸是啤酒发酵过程中，酵母细胞内进行缬氨酸生物合成的中间产物，也是形成双乙酰的前躯体，α-乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)能催化α-乙酰乳酸直接脱羧生成乙偶姻。由于啤酒酵母中不存在ALDC基因，不能代谢产生α-乙酰乳酸脱羧酶。本研究筛选含有ALDC基因的啤酒酵母工程菌并对其发酵性能进行研究，工程菌利用自身的代谢作用产生ALDC酶活性，将双乙酰的前躯体α-乙酰乳酸降解，加速双乙酰的还原，从而缩短啤酒发酵的周期。 对获得的250余株ALDC阳性转化子和受体菌进行细胞形态、大小、酵母生长、死亡率和死灭温度等试验；通过双乙酰含量的测定，筛选到10余株酶活性高的工程菌；通过发酵试验，筛选到双乙酰峰值低、还原快、发酵性能及风味物质与青岛啤酒相似的1、2、4、9、14~#五株工程菌。 对筛选到的工程菌酶学性能研究表明，工程菌α-乙酰乳酸脱羧酶活性明显受不同浓度CuSO_4的诱导。在检测范围内，当CuSO_4浓度为20μmol／L时，工程菌酶活性达到最高；工程菌产生的α-乙酰乳酸脱羧酶活性较高的pH范围为5～7，最适pH为6.0；其酶反应活性较高的温度范围为30～60℃，最适反应温度为40℃；工程菌α-乙酰乳酸脱羧酶对热较敏感；在培养过程中产生的酶总量与细胞密度成正比关系，α-乙酰乳酸脱羧酶可能是组成型酶，随着菌体量的增加，α-乙酰乳酸脱羧酶的酶活逐步提高。 工程菌的抗铜性明显高于受体菌，且抗铜性非常稳定。经20代传代后，工程菌的双乙酰含量比受体菌的低20～30％，而且传代的α-乙酰乳酸脱羧酶活性的测定数据也佐证了双乙酰的测定结果。实验结果同时表明，工程菌的发酵性状经过传代，仍保持稳定。 分别提取受体菌和工程菌ZL-4第1代和第20代的总DNA，经HindⅢ酶切后，进行琼脂糖凝胶电泳，并将DNA转移到硝酸纤维素膜上，以α-乙酰乳酸脱羧酶基因为探针，与上述DNA进行Southern杂交。结果表明受体菌没有杂交信号，工程菌4~#第1代和第20代均有明显的杂交信号，说明该工程菌带有α-乙酰乳酸脱羧酶基因，遗传稳定性很好。 利用EBC发酵管对1、2、4#进行了8次连续发酵实验，结果表明经过连续传代发酵，工程菌与受体菌相比，酵母生长、死亡率、发酵性能等基本不变，产生的风味物质也基本相同；工程菌与受体菌相比，双乙酰峰值降低8.8～51.7％，平均降低38.6％，其中4#降低32.4～51.7％；工程菌在发酵5天后，就可以将发酵液中的双乙酰的含量降到0.08mg／L或更低，而受体菌则只能降到0.1mg／L；跟踪测定到工程菌发酵液中的α-乙酰乳酸脱羧酶活性，表明α-乙酰乳酸脱羧酶基因在工程菌中成功稳定表达，而且，随着使用代数的增加，并未发现双乙酰的峰值和还原值明显增高的趋势。 在100L中试设备中，跟踪连续七代酵母泥发酵过程中酵母生长、降糖、双乙酰还原曲线，并对发酵过程中酶活性、酵母抗铜性、氨基酸利用等进行分析，结果表明，与受体菌相比，工程菌的双乙酰峰值平均下降23.8～43.1％，双乙酰还原至0.08mg／L的时间平均缩短30～37.5％，风味物质表明工程菌基本保持青岛啤酒的特色，达到了研究的目的。
参考文献：
[1]. 地衣芽孢杆菌TS-01培养条件的研究[D]. 谷春涛. 中国农业大学. 2004
[2]. 益生菌ZD02的分离及其在对虾集约化精养中的应用[J]. 丁贤, 李卓佳, 于明超, 王华朗, 陈永青. 生态学杂志. 2010
[3]. 带有ALDC基因的青岛啤酒酵母工程菌的研究[D]. 张沛. 江南大学. 2004