通过两种糖多孢菌属菌株原生质体融合提高多杀菌素产量研究

通过两种糖多孢菌属菌株原生质体融合提高多杀菌素产量研究

论文摘要

多杀菌素是由放线菌刺糖多孢菌产生的一种新型绿色环保杀虫剂,兼具化学农药的高效性与生物农药的安全性。本研究通过将红色糖多孢菌和刺糖多孢菌两种菌株做原生质体融合探究来得到高产多杀菌素的菌株。首先构建了不产红霉素的红色糖多孢菌工程菌株,然后将其与刺糖多孢菌做原生质体融合,经加有抗生素平板培养基及发酵液HPLC分析筛选,得到了产多杀菌素的4株融合菌株。基于4株融合菌株多杀菌素产量都不及起始菌株高,接着采用不加抗生素直接筛选的方法,成功筛选到若干高产多杀菌素的融合菌株,其中菌株B-2多杀菌素产量提高最为明显,较原始菌株增加了331%,并用质谱分析做了进一步的验证。融合菌株B-2后续传代培养多杀菌素产量稳定,表明遗传稳定性较好。本文对红色糖多孢菌和刺糖多孢菌原生质体融合进行了探究并且成功提高了多杀菌素的产量,这为具有优良发酵特性的红色糖多孢菌和刺糖多孢菌融合菌株的构建提供了重要基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌种和质粒
  •   1.2 抗生素、培养基
  •   1.3 主要试剂和仪器
  •   1.4 DNA的提取和转化
  •   1.5 PCR扩增
  •   1.6 原生质体融合及融合菌株的筛选
  •   1.7 摇瓶培养
  •   1.8 多杀菌素和红霉素高效液相色谱(HPLC)检测分析
  •   1.9 质谱分析融合菌发酵所产多杀菌素组分
  • 2 结果与分析
  •   2.1 红色糖多孢菌产红霉素阻断表达载体的构建
  •   2.2 载体pOJ260D在大肠埃希菌与红色糖多孢菌间接合转移及在染色体上的整合
  •   2.3 红色糖多孢菌D特征分析
  •   2.4 原生质体融合及融合菌株的筛选
  •   2.5 融合菌株的再次筛选
  •   2.6 质谱分析融合菌株所产多杀菌素
  •   2.7 融合菌株的遗传稳定性
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 易卓,夏立秋,丁学知,胡胜标,罗玉双,王海龙,唐滢,黄鑫

    关键词: 多杀菌素,生物农药,红霉素阻断,原生质体融合,融合菌株,质谱分析

    来源: 中国抗生素杂志 2019年10期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学湖南省重点实验室/省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室,益阳广播电视大学开放教育学院

    基金: 国家自然科学基金(No.31070006和No.30870064)

    分类号: Q93

    DOI: 10.13461/j.cnki.cja.006758

    页码: 1148-1155

    总页数: 8

    文件大小: 1422K

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