鸡毒支原体GroEL蛋白通过NF-κB信号通路诱导DF-1细胞释放IL-1β的研究

鸡毒支原体GroEL蛋白通过NF-κB信号通路诱导DF-1细胞释放IL-1β的研究

论文摘要

鸡毒支原体(MG)脂质相关膜蛋白(LAMPs)在刺激宿主细胞天然免疫中起重要作用,GroEL蛋白是本实验室前期利用质谱鉴定筛选出的LAMPS中的关键组分。为研究GroEL蛋白诱导宿主细胞炎性反应的信号通路,本研究通过原核表达系统表达出MG的GroEL蛋白,利用激光共聚焦试验、荧光定量PCR和western blot方法分别检测GroEL蛋白的粘附特性、p65入核、磷酸化水平及IL-1β分泌情况。激光共聚焦试验结果显示,GroEL蛋白能够黏附于DF-1细胞表面并刺激DF-1细胞中p65从胞浆转入细胞核;western blot检测显示GroEL蛋白能够激活NF-κB信号通路促进p65磷酸化水平提高;荧光定量PCR检测显示GroEL蛋白能够促进IL-1β释放,当NF-κB信号通路被抑制后,IL-1β的释放显著下降(p<0.01)。本研究结果表明MG GroEL蛋白能够粘附于宿主细胞表面并通过激活NF-κB信号通路诱导宿主细胞IL-1β的释放,从而在炎症反应中发挥作用。本研究为深入研究MG致病机制提供了实验依据。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌株、细胞及载体
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 目的基因扩增及重组质粒构建
  •   1.4 重组蛋白的表达与纯化
  •   1.5 重组蛋白的鉴定
  •   1.6 GST-Gro EL蛋白粘附DF-1细胞的检测
  •   1.7 GST-Gro EL蛋白刺激DF-1细胞后IL-1β转录水平的检测
  •   1.8 激光共聚焦检测p65转核
  •   1.9 GST-Gro EL蛋白诱导DF-1细胞p65磷酸化的检测
  •   1.1 0 抑制NF-κB信号通路后检测IL-1β释放
  • 2 结果
  •   2.1 目的基因扩增及重组质粒构建
  •   2.2 重组蛋白的表达、纯化及鉴定
  •   2.3 GST-Gro EL蛋白对DF-1细胞粘附特性的检测结果
  •   2.4 GST-Gro EL蛋白刺激DF-1细胞IL-1β转录水平检测结果
  •   2.5 激光共聚焦检测p65转核的结果
  •   2.6 GST-Gro EL蛋白诱导DF-1细胞p65磷酸化的检测结果
  •   2.7 抑制NF-κB信号通路后IL-1β转录水平的检测结果
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张琳,陈莹,朱可蒙,赵雅芝,潘巧,郝文君,于颖,辛九庆

    关键词: 鸡毒支原体,蛋白

    来源: 中国预防兽医学报 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,东北农业大学动物医学学院

    基金: 国家自然科学基金(31602084)

    分类号: S852.62

    页码: 223-228

    总页数: 6

    文件大小: 530K

    下载量: 129

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