（滨州市人民医院神经外科山东滨州256603）
【摘要】目的：检测MMP-9、TIMP-1在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤中的表达，探讨其与肿瘤侵袭发生的关系及它们之间的相关性。方法：用免疫组化SP法对63例垂体腺瘤患者标本的MMP-9、TIMP-1的表达进行检测。结果：侵袭性垂体腺瘤的MMP-9强阳性及阳性表达率(47.1％和91.2％)明显高于非侵袭性垂体腺瘤（10.3％和55.2％，P均<0.01)，在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤组织中TIMP-1的强阳性表达率分别35.29％和31.03％,阳性表达率分别为73.53％和58.62％，两组比较差异均无显著性。结论：MMP-9蛋白表达与垂体腺瘤的侵袭性密切相关，可以作为判别垂体腺瘤侵袭性的有效参考指标。TIMP-1在侵袭性垂体腺瘤和非侵袭性垂体腺瘤中表达差异无显著性。
【关键词】MMP-9；TIMP-1；垂体腺瘤；侵袭性
【中图分类号】R736.4【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）33-0038-02
TheStudyonExpressionandRelationshipBetweenMatrixMetalloproteinase-9,Tissueinhibitorofmatrixmetalloproteinases-1inInvasivePituitaryAdenomasLiJiuzhou,ZhangYuqi,ZhangHongfen,liuHongen.DepartmentofNeurosurgery,BinzhouPeople’sHospital,ShandongProvince,Benzhou256603,China
【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionofMMP-9、TIMP-1inpatientswithinvasivepituitaryadenomas,andtoevaluatetherelationshipbetweentheexpressionofMMP-9、TIMP-1andtheinvasionofpituitaryadenomas.MethodsTheexpressionofMMP-9、TIMP-1wereexaminedbyimmunohistochemicalstaining.ResultsTheintenseexpressionandtotalexpressionrateofMMP-9inpatientswithinvasivepituitaryadenomas(47.1％,91.2％respectively)weresignificantlyhigherthanthosewithoutinvasion(10.3％,55.2％respectively,P<0.01).ConclusionsHigherMMP-9ofpituitaryadenomsmaybeusefulmarkerstopredicttheinvasiveness.
【Keywords】Matrixmetalloproteinase-9;Tissueinhibitorofmatrixmetalloproteinases-1;Pituitaryadenomas;Invasion
垂体腺瘤虽是良性肿瘤，约占颅内肿瘤的10%[1]，但部分具有恶性肿瘤的生物学特征，侵犯周围正常组织如硬脑膜、骨、海绵窦和颅神经等[2-3]。随着现代分子生物学及细胞遗传学的高度发展，人们对垂体腺瘤的认识已由细胞水平到分子水平，认识到垂体腺瘤发生、发展是多种基因、多种细胞因子相互作用的结果[4]。研究侵袭性垂体腺瘤发生的相关机制及侵袭性的相关指标，以较为准确、简便的方法进行检测，不仅为侵袭性垂体腺瘤的诊治提供理论基础，且对临床医生开展多途径治疗具有重要意义。我们对63例垂体腺瘤的MMP-9、TIMP-1的表达进行了检测，试图探明在侵袭性垂体腺瘤中的作用机制，为侵袭性垂体腺瘤的诊治和预后判断提供理论依据。
l.材料和方法
1.1临床资料
垂体腺瘤标本来自2004年5月至2005年9月，重庆医科大学神经外科63例垂体腺瘤患者的组织标本。其中男26例，女37例，年龄20～68岁，平均37岁。侵袭性垂体腺瘤的判断标准：①本研究采用Wilson改良的Hardy分类将Ⅲ～Ⅳ级或C、D、E期的肿瘤归为侵袭性腺瘤；②术前影像学改变，CT及MR可见海绵窦、蝶窦及下丘脑等邻近结构的破坏；③术中见鞍底骨质及硬脑膜被侵袭破坏，肿瘤突入蝶窦腔或侵入海绵窦；④术中所取鞍底骨质或邻近硬脑膜经病理学证实有肿瘤细胞侵犯。符合其中之一者即可确定为侵袭性腺瘤。63例标本中，34例为侵袭性垂体腺瘤，29例为非侵袭性垂体腺瘤。手术时取所需组织，一部分置入10％甲醛溶液内固定。
1.2免疫组织化学检测(SP法)
鼠抗人HPA单克隆抗体购自武汉博士德试剂公司，鼠抗人MMP-9单克隆抗体、鼠抗人CD34单克隆抗体、SP试剂盒及DAB显色剂购均购自北京中杉生物技术有限公司，其他试剂由重庆医科大学组胚教研室提供。组织标本经石蜡包埋作5?ｍ连续切片，行HE染色用于重新确认病理结果，免疫组化按试剂盒操作说明进行。采用膀胱移行细胞癌阳性片为对照片。
阳性结果判断标准：MMP-9染色阳性呈黄色或棕黄色细颗粒状，表达定位于肿瘤细胞的胞浆，有时亦见于胞膜，细胞核偶见染色(图1)。TIMP-1阳性表达主要见于肿瘤细胞胞浆，呈淡黄色或黄色(图2)。在高倍(×4OO)视野下计算200个肿瘤细胞(共计5个视野，取其平均值)，计算免疫反应阳性的细胞百分比。根据半定量免疫组织化学MMP-9及TIMP-1反应阳性细胞显色强度及范围进行评价：①阴性(一)：无阳性细胞染色。②弱阳性(+)：阳性细胞小于50％或显色浅。③强阳性(++)阳性细胞大于50％或显色深。
1.3统计学分析
数据用均数±标准差（x-±s）表示，数据处理在SPSS13.0统计软件包上完成。统计方法采用t检验、χ2检验和Pearson相关分析等进行统计学处理。P＜0.05认为具有统计学意义。
2.结果
2.1免疫组化显色
在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤组织中MMP-9的强阳性表达率分别47.1％和10.3％,阳性表达率分别为91.2％和55.2％,两组比较差异均具有显著性统计学意义[(χ2=10.71,P＜0.01)和(χ2=15.00,P＜0.01)]。在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤组织中TIMP-1的强阳性表达率分别35.29％和31.03％,阳性表达率分别为73.53％和58.62％,两组比较差异均无显著性[分别为(χ2=11.57，P＞0.05)和(χ2=0.36,P＞0.05)],差异均具没有统计学意义(见Tab1-1)。（见表1）
3.讨论
肿瘤是目前威胁人类主要疾病之一，侵袭和转移是难以解决的关键问题。随着对肿瘤细胞基因、生物化学变化、肿瘤与宿主间复杂关系的深入研究，发现肿瘤侵袭转移是一个多步骤的复杂过程，涉及多种因素相互作用，同时也发现了与肿瘤发生浸润以及转移有关的重要环节。MMPs是在1962年被发现的一组锌离子依赖性内肽酶，是由26种MMP构成的超家族[5]。MMPs具有一定的特性，同一种MMPs可降解多种细胞外基质成分，而某一种细胞外基质成分又可被多种MMPs降解，不同类型的细胞外基质成分的降解所需的MMPs类型不同，TIMPs对MMPs有抑制作用。在肿瘤侵袭过程中，肿瘤细胞与ECM表面的整合素受体及各种非整合素受体结合，结合后的肿瘤细胞直接分泌MMP或诱导宿主细胞产生MMPs，局部降解ECM，肿瘤细胞沿着降解破坏的ECM向周围组织侵袭和转移。MMP主要通过以下几种机制促进肿瘤的侵袭性生长：①MMP作用使肿瘤细胞周围的物理屏障破坏；②MMP可重塑细胞间黏附力，以便肿瘤细胞向周围生长；③MMP作用于基质成分后，可能通过激发其他的一些潜在的生物活性，参与肿瘤的免疫过程；④通过对ECM的改建，促进肿瘤新血管的形成[6]。
我们的研究结果显示:MMP-9在侵袭性垂体腺瘤表达水平明显高于非侵袭性垂体腺瘤，差别具有统计学意义(P＜0.05)。其表达部位主要见于腺瘤细胞和部分间质细胞，部分肿瘤细胞胞核也见阳性表达。
基质金属蛋白酶在肿瘤侵袭过程中不但能降解细胞外基质，而且对肿瘤新生血管形成起着重要作用。MMP-9可促使内皮细胞穿破基质出芽生长，能促进肿瘤细胞新生血管形成。MMP-9的高表达可以作为判定侵袭性垂体腺瘤的分子生物学参考指标。
我们的研究结果显示:TIMP-1在侵袭性垂体腺瘤表达水平略高于非侵袭性垂体腺瘤，差别具无统计学意义(P＜0.05)。也有作者认为TIMP-1在侵袭性垂体腺瘤组的表达有降低的趋势，但无统计学意义(P＞0.05)。
MMPs和其抑制物之间的平衡非常重要，MMPs-TIMPs不仅是调节细胞外基质的酶类，而且对细胞、血管和组织具有复杂的调节作用，MMPs／TIMPs比值是维持机体内环境稳定和细胞外基质完整性的关键。当某种因素诱导MMPs表达上或者表达超过了TIMPs时，该平衡就被打破，基质降解程度加重，有利于肿瘤的浸润和转移；反之TIMPs表达上调时，可以抑制肿瘤的浸润和转移。在侵袭性垂体腺瘤中组织中TIMP-1蛋白的表达水平较非侵袭性垂体腺瘤升高，但TIMP-1升高的程度大大低于MMP-9,使得两者平衡失调，MMP-9的活性无法完全被TIMP-1抑制，造成垂体腺瘤发生侵袭。
【参考文献】
[1]王忠诚.神经外科学[M].湖北科学技术出版社,2004:620.
[2]康春生,浦佩玉,李捷等,人脑胶质瘤AKT2表达与细胞增殖和侵袭性的关系[J].中华病理学杂志,2004，33（5）:464-465.
[3]王翦，刘运生.垂体腺瘤中血管内皮生长因子和MMP-9的表达及其相互关系的研究[J].中南大学学报，2004，29（6），647-650.
[4]谢宗佑.内源和外源性TIMP-1基因表达对大肠癌细胞侵袭与转移特性的影响[D].天津：天津医科大学,2004，27.
[5]王震,吕长虹，司海鹏等.垂体腺瘤中MMP-9及TIMP-1表达与肿瘤生物学行为的关系[J].临床与试验病理学杂志，2004，（2）：200-202.