导读:本文包含了油体蛋白表达系统论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:植物生物反应器,花生油体蛋白,人成骨蛋白,原核表达
油体蛋白表达系统论文文献综述
马敬[1]（2011）在《利用油体蛋白表达系统表达人成骨蛋白的研究》一文中研究指出人成骨蛋白-1(Human Osteogenic Protein 1, hOP-1),或称骨形成发生蛋白7(Bone Morphogenetic Protein 7, BMP7),是TGF-β超家族中的一员,具有诱导IOPC(inducible osteogenic precursor cells)类细胞向成骨细胞方向转化的蛋白质,具有广阔的临床应用前景。由于人骨源有限,直接从人骨中提取人成骨蛋白受到了限制,影响了临床应用。随着基因工程技术的发展,异源表达成骨蛋白成为可能。植物生物反应器已广泛应用于外源高经济附加值的药用蛋白、脂类及一些次生代谢产物等生物制剂的生产,其成本低,不仅能满足人们生产和生活的需要,而且可以拓宽植物的应用范围。利用植物油体表达系统表达人成骨蛋白有非常广泛的前景。植物种子中油体蛋白(oleosin)是一类镶嵌在油体表面的小分子碱性蛋白,在种子中高水平表达并大量积累,由于其脂溶性的特点,很容易将油体蛋白与种子中其他蛋白分开。而且当外源小分子量蛋白插入到油体蛋白的N端或C端后,不会影响到油体蛋白在植物油体上的定位及表达,而且外源蛋白本身也能高水平表达。在油料作物种子中利用油体蛋白做载体生产药用蛋白及其它有用物质,具有独特的优越性。花生作为我国最重要的油料作物之一,既可以榨油和深加工,又可以生食,更为重要的是油体蛋白在花生种子中高水平表达并大量积累。所以,在花生种子中利用油体蛋白表达人成骨蛋白将具有广阔的前景。本研究初步建立了花生油体蛋白表达体系表达人成骨蛋白的植物生物反应器体系,并且在转基因烟草种子中进行了表达,为在花生中转化及利用该体系大规模生产人成骨蛋白和其它外源蛋白奠定了基础。研究内容和结果如下:人成骨蛋白-1基因密码子的优化:根据植物中密码子表达的偏好性,将本实验室已经克隆得到的人成骨蛋白-1基因的cDNA序列通过软件分析进行优化后重新合成序列,为在植物中高效表达人成骨蛋白奠定了基础。人成骨蛋白-1的原核表达:首先将人成骨蛋白-1基因的全长cDNA序列(420 bp),连接到原核表达载体PET28a上,在大肠杆菌中进行原核表达,实验结果显示人成骨蛋白-1能够正确表达,融合蛋白分子量约为15.7 KD,与预期大小基本一致。原核表达的蛋白可用于抗体制备及后期成骨蛋白检测研究。花生油体蛋白基因和启动子的克隆:根据NCBI中花生油体蛋白的基因序列,设计引物,克隆得到了花生油体蛋白的全长基因及其启动子。植物表达载体的构建和优化:将人成骨蛋白基因连接到花生油体蛋白基因的3’端,在油体蛋白基因和成骨蛋白基因间插入肠肽酶基因序列,便于后期重组蛋白从油体蛋白上的分离。构建由花生油体蛋白基因启动子驱动的“花生油体蛋白-肠肽酶-成骨蛋白”的融合植物表达载体。本研究还将pCAMBIA1301、pCAMBIA1302两个载体进行改造优化,将两个载体中的潮霉素(Hyg)抗性改为卡那(Kan)抗性,以降低研究及开发成本。遗传转化和表达验证:利用叶盘转化法转化烟草,通过RT-PCR的方法检测了人成骨蛋白基因在转基因烟草中的表达情况。结果表明在叶、花中没有检测到融合蛋白基因的表达,在种子中高水平表达。为了进一步验证结果,可以对pCAMBIA1301-oleosin-BMP-7-GUS和pCAMBIA1302-oleosin-BMP-7-GFP侵染后得到的转基因阳性植株进行GUS染色显示和GFP亚细胞定位来反映融合蛋白的表达情况。(本文来源于《山东师范大学》期刊2011-05-20）
李威[2]（2008）在《油体蛋白表达系统生产鲑鱼降钙素和人胰岛素样生长因子Ⅰ的研究》一文中研究指出利用植物生产重组药用蛋白,即植物生物反应器或分子药业,是近年来植物基因工程的研究热点之一。目前已经开发出多种生产重组蛋白的植物表达系统,其中油体蛋白表达系统通过利用植物油体蛋白(Oleosin)作为重组蛋白的“载体”,将重组蛋白定位至油料植物种子等器官的油体(oil body)上从而实现重组蛋白的高效表达,该系统因具有重组蛋白表达量高、纯化方便等优点而极具应用前景。本文利用该系统在拟南芥中进行了表达鲑鱼降钙素(salmon calcitonin,sCT).大鼠酰胺化酶(α-amidating enzyme,α-AE)和人胰岛素样生长因子I(human insulin-like growth factor I,hIGF-I)的研究,取得了一定进展。sCT是长度为32个氨基酸、N-端含有一对二硫键、C-端为脯氨酰胺结构的多肽激素,其主要作用是抑制骨的溶解,在骨质疏松症、Paget's骨病等与骨代谢有关的疾病的临床治疗中起着非常重要的作用。本文根据天然鲑鱼降钙素sCT和活性更高的突变型鲑鱼降钙素msCT([Gly8,Ala16,des-Tyr22]sCT)的酰胺化酶作用前体sCTgly和msCTgly的氨基酸序列,按照植物偏爱密码子优化设计了sCTgly和msCTgly基因,将sCTgly基因与大豆24 kDa油体蛋白基因的3'端融合后置于烟草花叶病毒(Cauliflower mosaic virus,CaMV)的35S启动子下,将所构建的载体转化拟南芥,发现融合蛋白主要在转基因拟南芥种子中积累并正确定位至油体上。将msCTgly基因与油菜20 kDa油体蛋白基因3’端融合后置于油菜油体蛋白启动子下,将所构建的载体转化拟南芥,发现融合蛋白在拟南芥种子中特异表达,Oleosin-msCTgly融合蛋白表达量达到种子总蛋白(total seed protein,TSP)的1.32%。通过“悬浮-离心”的方法纯化到融合蛋白并用凝血酶(Thrombin)将msCTgly从融合蛋白中释放出来,进一步用高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)纯化获得了msCTgly蛋白。msCTgly的表达量为种子总蛋白的0.17%,在已有报道植物中表达sCT的基础上提高了8倍。质谱分析发现,拟南芥种子中表达的msCTgly为末酰胺化的形式。C-端酰胺化结构为降钙素活性所必需,为了直接从植物中得到经酰胺化修饰的鲑鱼降钙素,本研究将大鼠酰胺化酶基因转入拟南芥,将获得的表达酰胺化酶的拟南芥与表达降钙素的拟南芥进行杂交和筛选,得到了降钙素和酰胺化酶共表达的植株,为进一步研究植物表达降钙素的体内酰胺化打下了基础。同时,酰胺化酶也被构建到油体蛋白表达系统中,所表达的酰胺化酶通过油体蛋白结合在油体上,可以作为固定化酶使用,为降钙素等基因工程产物的体外酰胺化提供了一条新的途径。胰岛素样生长因子I(hIGF-Ⅰ)也是一类重要的药用蛋白,本研究分别用大肠杆菌和拟南芥表达和纯化了hIGF-Ⅰ。大肠杆菌中表达的带多聚组氨酸(6×His)标签的hIGF-Ⅰ表达量为菌体总蛋白的9.6%,其中50%以可溶的形式存在,50%位于包涵体中。拟南芥中表达的hIGF-Ⅰ被置于拟南芥18.5 kDa油体蛋白的C-端,在拟南芥18.5 kDa油体蛋白启动子的驱动下积累于种子中,Oleosin-hIGF-Ⅰ融合蛋白表达量达到种子总蛋白的1%。经烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus,TEV)蛋白酶切割后,hIGF-Ⅰ从融合蛋白中释放出来,表达量为种子总蛋白的0.23%,在已有植物中表达hIGF-Ⅰ的基础上提高了7倍。(本文来源于《复旦大学》期刊2008-04-15）
徐妙云,刘德虎[3]（2006）在《大豆24KDa油体蛋白基因的克隆及其融合表达系统的建立》一文中研究指出油体蛋白(oleosin)独特的分子结构和生化特性使其非常适于应用在一些重组外源蛋白的融合表达及加工提取过程中,原因在于:1)油体蛋白在产油植物种子内的含量很高,以大豆为例,油体蛋白约占到种子总蛋白的2％-10％左右,而该含量与大豆种子储藏蛋白的积累水平相当。2)用缓冲液处理种子研磨物时,油体及附着在其上的油体蛋白会一起漂浮在水相表面,经过反复离心洗涤很容易洗去其它蛋白成份,可获得高纯度的油体蛋白;3)油体(本文来源于《中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会论文摘要集》期刊2006-08-01）
油体蛋白表达系统论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
利用植物生产重组药用蛋白,即植物生物反应器或分子药业,是近年来植物基因工程的研究热点之一。目前已经开发出多种生产重组蛋白的植物表达系统,其中油体蛋白表达系统通过利用植物油体蛋白(Oleosin)作为重组蛋白的“载体”,将重组蛋白定位至油料植物种子等器官的油体(oil body)上从而实现重组蛋白的高效表达,该系统因具有重组蛋白表达量高、纯化方便等优点而极具应用前景。本文利用该系统在拟南芥中进行了表达鲑鱼降钙素(salmon calcitonin,sCT).大鼠酰胺化酶(α-amidating enzyme,α-AE)和人胰岛素样生长因子I(human insulin-like growth factor I,hIGF-I)的研究,取得了一定进展。sCT是长度为32个氨基酸、N-端含有一对二硫键、C-端为脯氨酰胺结构的多肽激素,其主要作用是抑制骨的溶解,在骨质疏松症、Paget's骨病等与骨代谢有关的疾病的临床治疗中起着非常重要的作用。本文根据天然鲑鱼降钙素sCT和活性更高的突变型鲑鱼降钙素msCT([Gly8,Ala16,des-Tyr22]sCT)的酰胺化酶作用前体sCTgly和msCTgly的氨基酸序列,按照植物偏爱密码子优化设计了sCTgly和msCTgly基因,将sCTgly基因与大豆24 kDa油体蛋白基因的3'端融合后置于烟草花叶病毒(Cauliflower mosaic virus,CaMV)的35S启动子下,将所构建的载体转化拟南芥,发现融合蛋白主要在转基因拟南芥种子中积累并正确定位至油体上。将msCTgly基因与油菜20 kDa油体蛋白基因3’端融合后置于油菜油体蛋白启动子下,将所构建的载体转化拟南芥,发现融合蛋白在拟南芥种子中特异表达,Oleosin-msCTgly融合蛋白表达量达到种子总蛋白(total seed protein,TSP)的1.32%。通过“悬浮-离心”的方法纯化到融合蛋白并用凝血酶(Thrombin)将msCTgly从融合蛋白中释放出来,进一步用高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)纯化获得了msCTgly蛋白。msCTgly的表达量为种子总蛋白的0.17%,在已有报道植物中表达sCT的基础上提高了8倍。质谱分析发现,拟南芥种子中表达的msCTgly为末酰胺化的形式。C-端酰胺化结构为降钙素活性所必需,为了直接从植物中得到经酰胺化修饰的鲑鱼降钙素,本研究将大鼠酰胺化酶基因转入拟南芥,将获得的表达酰胺化酶的拟南芥与表达降钙素的拟南芥进行杂交和筛选,得到了降钙素和酰胺化酶共表达的植株,为进一步研究植物表达降钙素的体内酰胺化打下了基础。同时,酰胺化酶也被构建到油体蛋白表达系统中,所表达的酰胺化酶通过油体蛋白结合在油体上,可以作为固定化酶使用,为降钙素等基因工程产物的体外酰胺化提供了一条新的途径。胰岛素样生长因子I(hIGF-Ⅰ)也是一类重要的药用蛋白,本研究分别用大肠杆菌和拟南芥表达和纯化了hIGF-Ⅰ。大肠杆菌中表达的带多聚组氨酸(6×His)标签的hIGF-Ⅰ表达量为菌体总蛋白的9.6%,其中50%以可溶的形式存在,50%位于包涵体中。拟南芥中表达的hIGF-Ⅰ被置于拟南芥18.5 kDa油体蛋白的C-端,在拟南芥18.5 kDa油体蛋白启动子的驱动下积累于种子中,Oleosin-hIGF-Ⅰ融合蛋白表达量达到种子总蛋白的1%。经烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus,TEV)蛋白酶切割后,hIGF-Ⅰ从融合蛋白中释放出来,表达量为种子总蛋白的0.23%,在已有植物中表达hIGF-Ⅰ的基础上提高了7倍。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
油体蛋白表达系统论文参考文献
[1].马敬.利用油体蛋白表达系统表达人成骨蛋白的研究[D].山东师范大学.2011
[2].李威.油体蛋白表达系统生产鲑鱼降钙素和人胰岛素样生长因子Ⅰ的研究[D].复旦大学.2008
[3].徐妙云,刘德虎.大豆24KDa油体蛋白基因的克隆及其融合表达系统的建立[C].中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会论文摘要集.2006