论文摘要
为明确牙鲆雄性性别相关关键基因dmrt1 （doublesex and mab-3-related transcription factor 1）是否为pol-miR-26a、pol-miR-26b作用的靶基因,本研究利用PCR技术克隆了dmrt13’UTR区,并成功引入了特殊限制性内切酶PemⅠ和NotⅠ的识别位点;将得到的dmrt1 3’UTR区片段和psiCHECK-2载体进行双酶切、连接后得到野生型重组质粒;并且利用定点诱变法对dmrt1 3’UTR区进行体外定点诱变,将pol-miR-26a、pol-miR-26b识别的靶序列ACTGAA突变为TGACTT,形成突变型重组质粒。经琼脂糖凝胶电泳鉴定、双酶切及测序分析,成功获得了可用于pol-miR-26a、pol-miR-26b的靶基因dmrt1验证的野生型psiCHECK-dmrt1-3’UTR和突变型psiCHECK-mutated dmrt1-3’UTR的报告质粒,为进一步研究pol-miR-26a、pol-miR-26b的靶基因dmrt1鉴定和功能奠定了基础。
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文章来源
类型: 期刊论文
作者: 徐明琴,王前龙,王新艳,张俊玲,孙文慧,向玉婷
关键词: 牙鲆
来源: 基因组学与应用生物学 2019年02期
年度: 2019
分类: 基础科学,医药卫生科技,农业科技
专业: 生物学,水产和渔业
单位: 上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室,上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心,上海海洋大学上海水产养殖工程技术研究中心
基金: 国家自然科学青年基金项目(41306128)资助
分类号: Q78;S917.4
DOI: 10.13417/j.gab.038.000568
页码: 568-573
总页数: 6
文件大小: 279K
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标签：牙鲆论文;