重组蛋白ApSerpin-FA72的包涵体复性及活性研究

论文摘要

[目的]原核表达及制备重组光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂（Ap Serpin-FA72）,探索包涵体最优复性条件与最适酶反应条件。[方法]采用超声破碎获得大量包涵体,通过包涵体的洗涤、包涵体的溶解方法对包涵体进行纯化,获得高纯度的包涵体进行复性液成分与复性方法的摸索。测定Trx A-Ap Serpin-FA72对胰蛋白酶的IC50、最适反应p H和最适反应温度。[结果]在32℃、180 r/min、0. 4 mmol/L IPTG浓度下以沉淀形式表达大量蛋白,通过包涵体复性在含有L-精氨酸复性液中获得有生物活性的Trx A-Ap Serpin-FA72,对胰蛋白酶的IC50为0. 48μmol/L,p H在7～9,温度在60℃时有较高的抑制活性。[结论]L-精氨酸是复性液中重要的组成部分,复性的重组蛋白Trx A-Ap SerpinFA72对胰蛋白酶有较强的抑制能力,是一种热稳定较好的弱碱性胰蛋白酶抑制剂。

论文目录

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验材料

1.1.2 试剂

1.1.3 仪器

1.2 方法

1.2.1 融合蛋白的表达与表达形式鉴定

1.2.2 融合蛋白的Western Blotting鉴定

1.2.3 包涵体的制备

1.2.4 融合蛋白的变性与复性条件筛选

1.2.5 蛋白含量的测定

1.2.6 丝氨酸蛋白酶蛋白酶抑制剂的活性检测

1.2.7 融合蛋白复性方法的比较

1.2.8 最适pH检测

1.2.9 最适温度

2 结果与分析

2.1 重组蛋白TrxA-ApSerpin-FA72的表达形式分析

2.2 重组蛋白TrxA-ApSerpin-FA72包涵体的制备

2.3 重组蛋白TrxA-ApSerpin-FA72复性条件的筛选

2.4 重组蛋白TrxA-ApSerpin-FA72复性方法的比较

2.5 重组蛋白TrxA-ApSerpin-FA72的最适pH

2.6 重组蛋白TrxA-ApSerpin-FA72的热稳定性

3 讨论

4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 贾洋洋,张蕊,刘阳,刘忠渊

关键词: 丝氨酸蛋白酶抑制剂,复性,包涵体,活性检测

来源: 生物技术 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 新疆大学生命科学与技术学院,四川轻化工大学

基金: 四川省应用基础研究项目(2019YJ0459),四川轻化工大学人才引进项目(2017RCL63)

分类号: Q78

DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.05.0076

页码: 456-462+469

总页数: 8

文件大小: 710K

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重组蛋白ApSerpin-FA72的包涵体复性及活性研究

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