穿膜肽TAT和R9的生物学效应的体内体外研究

穿膜肽TAT和R9的生物学效应的体内体外研究

论文摘要

本文比较了两种常用穿膜肽TAT和R9的体外穿膜效率、对细胞影响以及小鼠活体内不同器官的穿膜效率。非特异性穿膜肽TAT和R9分别为11个氨基酸和9个氨基酸的短肽,能够有效地穿过细胞膜进入细胞。本研究纯化制备出融合蛋白TAT-EGFP及R9-EGFP多肽,用相同浓度的活性TAT-EGFP和R9-EGFP处理肺癌细胞,观察比较二者的穿膜活性及效率;设置不同浓度梯度检测两种穿膜肽是否对细胞产生影响;通过小鼠腹腔注射TAT-EGFP和R9-EGFP活性肽段,研究二者在活体能够穿膜到达的靶位置,并比较分析二者穿膜的效果器官分布。结果显示制备获得的两种融合蛋白TAT-EGFP和R9-EGFP均能有效穿过实现穿膜功能,两种穿膜肽对乳腺癌细胞影响较小。活体试验证明两种穿膜肽在心、肝、脾、肺、肾器官均有分布,R9主要富集在小鼠的肾和肝脏中,TAT在6种被研究的器官都有富集,两种细胞穿膜肽都能透过血脑屏障到达脑部。相对来说,TAT在小鼠活体中的穿膜效果更好,荧光富集多,R9整体穿膜效果较弱。本研究分析比较了两种穿膜肽的细胞安全性浓度和活体的穿膜能力,为TAT和R9两种穿膜肽在后续试验中的合理有效的选择和使用,提供了基础数据和指导性依据。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 pHis-Tat-eGFP的构建
  •     1.2.2 融合蛋白的制备及检测
  •     1.2.3 荧光倒置显微镜观察融合蛋白穿膜活性
  •     1.2.4 不同浓度梯度的两种融合蛋白对细胞的影响
  •     1.2.5 小鼠体内试验
  • 2 结果与分析
  •   2.1 pHis-Tat-eGFP的构建
  •   2.2 融合蛋白TAT-EGFP和R9-EGFP的纯化及鉴定
  •   2.3 融合蛋白TAT-EGFP和R9-EGFP的穿膜活性检测
  •   2.4 观察融合蛋白TAT-EGFP和R9-EGFP对细胞影响
  •   2.5 融合蛋白TAT-EGFP和R9-EGFP在小鼠体内的分布
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 徐咏婷,陈燕,余雳,谭桂湘,谭拥军,黄明敏

    关键词: 细胞穿膜肽,穿膜效率,活体穿膜

    来源: 激光生物学报 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 湖南大学生物学院

    基金: 长沙市创新平台建设专项项目,长发改备案﹝2018﹞34号

    分类号: Q51

    页码: 323-329

    总页数: 7

    文件大小: 1581K

    下载量: 168

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