导读:本文包含了片段克隆论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:枯草芽孢杆菌,启动子,P43,Pglv
片段克隆论文文献综述
程媛[1]（2019）在《枯草芽孢杆菌启动子片段的克隆及分子改造》一文中研究指出枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是芽孢杆菌属的一种,属于好氧型革兰氏阳性菌,它具有遗传背景清晰、易分离培养、胞外分泌能力强和非致病性等优点,十分适合作为表达和分泌异源蛋白的宿主菌株,作为芽胞杆菌属的模式菌株广泛应用于工业化生产。工业生产的实践结果表明,现有的枯草芽孢杆菌载体系统不能满足越来越多的外源基因的高效表达,因此尝试从表达系统中的启动子入手,筛选并经过改造后获得新型的能满足尽可能多的外源基因表达要求的强启动子,从而提高枯草芽孢杆菌系统的表达效果。本课题通过构建探针型载体筛选具有启动能力的片段,以卡那霉素抗性基因和四环素抗性基因构建了双向启动子探针载体pKT2,然后提取土壤菌DNA进行筛选启动子,但是由于转化枯草芽孢杆菌效率太低无法获得足够的转化子来筛选得到高效的启动子,最终选择对现有的组成型启动子P43和诱导型启动子Pglv进行突变改造,经过定点突变和关键保守序列替换杂交后,根据数据库比对分析,分别筛选到新启动子P43-35、P43-35quan、P43-35-10、P43-Pglv-35、Pglv-10、Pglv-35、Pglv-P43-10。分别以麦芽糖α-淀粉酶基因sva和碱性磷酸酶基因phoA为报告基因构建相关表达载体来检验启动子的功能,其中以麦芽糖α-淀粉酶基因sva为报告基因构建重组载体,构建成功后均转化进入宿主菌B.subtilis 1A857中进行表达,测得发酵液的最高粗酶酶活单位分别为1.214U/mL、1.334U/mL、1.042U/mL、1.1U/mL、1.184U/mL和 15.284 U/mL、14.635 U/mL、18.849 U/mL、7.651 U/mL,菌液最高OD595分别为2.553、2.188、2.485、2.338、2.57、5.433、5.847、5.29、7.103。其中只有针对组成型启动子P43的-35区进行突变的突变体pHS-P4335和诱导型启动子Pglv的-35区进行突变的突变体pHS-Pglv35的粗酶活有一定提升,分别为突变前的1.099倍和1.233倍,其余突变体的表达情况均呈现下降状态。以碱性磷酸酶基因phoA为报告基因构建重组载体pHP-Pglv、pHP-Pglv35,构建成功后均转化进入宿主菌B.subtilis 1A857中进行发酵表达,测得发酵液的最高粗酶酶活单位分别为10.176 U/mL和6.992 U/mL,较突变之前降低了约31%。研究表明对启动子的核心保守序列进行突变可能会带来一定正向的影响,提高启动子的转录活性。(本文来源于《广西大学》期刊2019-06-01）
苏军,管其龙,陈子强,陈在杰[2]（2019）在《水稻arf1基因3′-UTR片段的克隆和验证》一文中研究指出终止子是一段位于基因编码之后的序列,作为一种调控信号调控DNA的转录终止和RNA的释放,在基因工程技术应用中通常被构建在目的基因下游,用以调控基因的转录和表达.现有常用的终止子很少,克隆和验证新的终止子是植物基因工程技术发展的需要.通过生物信息学分析和Realtime-PCR表达验证,筛选出候选基因腺苷酸核糖基化作用因子(Similar to ADP-ribosylation factor1,arf1)基因,克隆了水稻arf1基因3′-UTR.结果显示,所克隆3′-UTR片段含有8个多聚信号元件和4个UE片段.将3′-UTR与gus基因融合后分别与玉米泛素启动子Ubiquitin和花椰菜花叶病毒(CaMV)启动子35S连接构建植物表达载体验证3′-UTR调控表达效果.烟草瞬时表达显示3′-UTR融合的gus基因在35S和Ubi启动子驱动下,在烟草叶片中能正常表达;3′-UTR调控下的gus基因在水稻根、茎、叶、花和种子中均可稳定表达,且表达量与T-Nos终止子相当.本研究表明所克隆的3′-UTR可替代T-nos终止子,可为植物基因工程技术的应用提供新的调控元件.(图5表3参29)(本文来源于《应用与环境生物学报》期刊2019年02期）
马聚泽,吕换男,王海静,李晓颍,刘建珍[3]（2019）在《山楂Actin基因片段克隆及序列分析》一文中研究指出依据GenBank中已知的蔷薇科梨属Actin基因的保守序列设计1对特异性引物,以山楂叶片总DNA和总RNA为模板,分别利用PCR和RT-PCR技术从山楂中克隆得到Actin基因的DNA片段和cDNA片段,测序得到山楂Actin基因DNA片段长度为1 578 bp,cDNA片段长度为1 005 bp,编码334个氨基酸。生物信息学软件分析表明,该核苷酸序列与苹果、梨、桃的Actin基因同源性较高,分别为98%,97%,95%,而编码的氨基酸序列与苹果、梨、桃则完全相同,属间具有很好的保守性。试验克隆得到的基因为山楂Actin基因,命名为CpActin。进化树分析结果进一步表明,该Actin序列与苹果、梨、桃和草莓等亲缘关系最近;半定量RT-PCR结果显示,CpActin在山楂的叶片、花柱和花粉中能够稳定表达,可作为山楂的内参基因。(本文来源于《河北科技师范学院学报》期刊2019年01期）
袁惠君,李学勇,高泽,王春梅,李虎军[4]（2019）在《扁果枸杞肌动蛋白基因片段的克隆及其表达特征分析》一文中研究指出为克隆扁果枸杞(Lycium barbarum Bianguo)肌动蛋白基因作为基因表达模式分析的内参基因,根据几种茄科植物肌动蛋白氨基酸序列保守区设计引物,以扁果枸杞3周龄叶总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增肌动蛋白基因片段并连接到p MD18-T载体上,阳性克隆经PCR检测后测序。结果表明,该基因片段长598 bp,编码198个氨基酸,与枸杞(Lycium chinense)核苷酸序列的相似度和同源性分别达97%和100%,说明是肌动蛋白基因片段,命名为Lb ACT。荧光定量PCR分析表明,盐处理下Lb ACT基因在各器官中的Ct值稳定,可作为内参基因用于研究扁果枸杞功能基因的表达模式分析。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2019年06期）
孙威,徐僡,林建,马玲,申欢[5]（2018）在《日本蛇根草Actin基因片段的克隆及其序列分析》一文中研究指出为研究日本蛇根草功能基因的表达提供内参基因,笔者参照GenBank中桔梗的肌动蛋白基因(Actin)序列设计引物,以日本蛇根草的cDNA为模板,通过RT-PCR方法成功克隆获得日本蛇根草Actin基因片段,并将其命名为OjActin(OjActin片段长469 bp)。功能保守域分析显示OjActin归属于Actin超家族,与其他植物Actin的氨基酸序列同源性达94%以上;系统进化树分析显示,OjActin与咖啡的亲缘关系最近。(本文来源于《贵州师范大学学报(自然科学版)》期刊2018年06期）
叶玉妍,梁海峰,杨礼香[6]（2018）在《番杏Actin基因片段的克隆及生物信息学分析》一文中研究指出本实验为研究番杏(Tetragonia tetragonioides)功能基因表达模式提供内参基因,根据登录在NCBI上植物的Actin基因的保守区域设计简并性引物,通过RT-PCR克隆获得番杏的Actin基因片段,将该片段连接于载体pGEM-T后进行测序,并将该基因序列通过生物信息学软件进行分析。结果显示,克隆所得基因片段大小为598 bp,编码198个氨基酸;该序列与登录在NCBI上的其他植物的Actin基因的核苷酸序列的同源性最大可达86%以上,编码蛋白的氨基酸序列同源性在88%以上。结果表明,本研究克隆所得的基因序列为番杏Actin基因片段。该基因命名为TtActin1,在Gen Bank的登录号为MH33308。(本文来源于《生物资源》期刊2018年05期）
周振国,孟亚雄,宋展树,李葆春,马小乐[7]（2018）在《盐生草基因Unigene7547片段的克隆与分析》一文中研究指出为了从分子生物学角度研讨盐生草耐盐机理,挖掘耐盐基因,本研究以盐生草(Halogeton glomeratus)为材料,根据盐生草转录组测序结果,利用RT-PCR与SMARTer RACE技术克隆耐盐基因Unigene7547的cDNA全长,并应用生物信息学方法对该基因相关功能进行预测分析。结果克隆到Unigene7547基因的cDNA全长,该基因全长1 306 bp,开放阅读框为1 218 bp,编码405个氨基酸,分子量为45.16 kD,通过生物信息学分析显示,Unigene7547基因编码蛋白属于亲水性蛋白,呈酸性,无信号肽及跨膜区,亚细胞定位于细胞核内。发现Unigene7547中含有Thr、Ser、Tyr等磷酸化位点,主要以Thr、Ser磷酸化位点为主,可能影响细胞生理活动修饰调控等方面。Unigene7547基因蛋白二级结构中随机卷曲为37.78%、延伸链为28.89%、α螺旋为23.46%、β-转角为9.88%。该研究结果为进一步解析盐生草耐盐机理与培育耐盐新品种具有重要意义。(本文来源于《分子植物育种》期刊2018年22期）
孙威,林建,申欢,李欲轲,马玲[8]（2018）在《马缨杜鹃Actin基因片段的克隆及序列分析》一文中研究指出为研究马缨杜鹃相关功能基因的表达模式提供内参基因,本研究根据Gen Bank中公布的锦绣杜鹃肌动蛋白基因(Actin)的保守序列设计引物,以马缨杜鹃c DNA为模板,利用RT-PCR方法克隆得到马缨杜鹃Actin基因部分c DNA片段,将其命名为Rd Actin。结果显示:该基因片段长度为468 bp,编码156个氨基酸;保守域分析表明该基因具有Actin的功能保守域,同时Rd Actin与其它植物Actin的氨基酸序列同源性达97%以上。(本文来源于《贵州师范大学学报(自然科学版)》期刊2018年05期）
张乐,巩新,刘波,吴军[9]（2018）在《呼吸道合胞病毒F1片段膜外区的原核表达及其多克隆抗体制备》一文中研究指出目的:利用大肠杆菌表达人呼吸道合胞病毒(RSV)F蛋白的F1片段膜外区,制备其多克隆抗体,为RSV的相关研究提供检测抗体。方法:采用全基因合成方法合成RSV的F1片段膜外区基因,构建带有His-Tag的原核表达载体p ET28a-F1-His,转化大肠杆菌BL21(DE3)细胞,37℃、IPTG诱导表达,超声波破菌,离心收集包涵体,溶解后经镍离子亲和层析方法进行纯化。纯化的蛋白经SDS-PAGE回收后切胶研磨,免疫大耳白兔,制备RSV的F蛋白多抗血清,采用Western印迹检测血清特异性。结果:构建的p ET28a-F1-His重组质粒在大肠杆菌中表达目的蛋白,其相对分子质量约44×10~3,与理论值一致,免疫后获得的多克隆抗体可特异性识别RSV F蛋白。结论:制备了RSV F蛋白的兔源多克隆抗体,为进一步研究RSV F蛋白疫苗奠定了基础。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2018年04期）
陈海涛,邵亚林,赵展平,赵平,刘小烛[10]（2018）在《樟叶越桔VdARP7基因片段克隆与表达分析》一文中研究指出基于樟叶越桔叶芽转录组测序数据,筛选获得ARP7基因cDNA片段,采用RACE-PCR技术克隆了樟叶越桔VdARP7基因cDNA序列,并应用半定量PCR技术分析了VdARP7基因在樟叶越桔不同组织中的表达特征。结果表明:克隆了VdARP7基因964 bp cDNA片段,包括3'UTR完整区域和Poly A尾巴特征,VdARP7属于Actin超级家族ARPs亚家族基因新成员,与多种高等植物已知ARP7基因具有较高的同源性,推导编码VdARP7蛋白的C-末端225个氨基酸残基序列,含1个NBD_sugar-kinase_HSP70_actin保守结构域。VdARP7基因能在樟叶越桔叶芽、嫩叶、老叶、花芽和花等组织中稳定表达,推测ARP7作为组成型表达的蛋白质在植物生长和发育等过程中发挥重要生理功能。(本文来源于《西南林业大学学报(自然科学)》期刊2018年04期）
片段克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
终止子是一段位于基因编码之后的序列,作为一种调控信号调控DNA的转录终止和RNA的释放,在基因工程技术应用中通常被构建在目的基因下游,用以调控基因的转录和表达.现有常用的终止子很少,克隆和验证新的终止子是植物基因工程技术发展的需要.通过生物信息学分析和Realtime-PCR表达验证,筛选出候选基因腺苷酸核糖基化作用因子(Similar to ADP-ribosylation factor1,arf1)基因,克隆了水稻arf1基因3′-UTR.结果显示,所克隆3′-UTR片段含有8个多聚信号元件和4个UE片段.将3′-UTR与gus基因融合后分别与玉米泛素启动子Ubiquitin和花椰菜花叶病毒(CaMV)启动子35S连接构建植物表达载体验证3′-UTR调控表达效果.烟草瞬时表达显示3′-UTR融合的gus基因在35S和Ubi启动子驱动下,在烟草叶片中能正常表达;3′-UTR调控下的gus基因在水稻根、茎、叶、花和种子中均可稳定表达,且表达量与T-Nos终止子相当.本研究表明所克隆的3′-UTR可替代T-nos终止子,可为植物基因工程技术的应用提供新的调控元件.(图5表3参29)
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
片段克隆论文参考文献
[1].程媛.枯草芽孢杆菌启动子片段的克隆及分子改造[D].广西大学.2019
[2].苏军,管其龙,陈子强,陈在杰.水稻arf1基因3′-UTR片段的克隆和验证[J].应用与环境生物学报.2019
[3].马聚泽,吕换男,王海静,李晓颍,刘建珍.山楂Actin基因片段克隆及序列分析[J].河北科技师范学院学报.2019
[4].袁惠君,李学勇,高泽,王春梅,李虎军.扁果枸杞肌动蛋白基因片段的克隆及其表达特征分析[J].食品与发酵工业.2019
[5].孙威,徐僡,林建,马玲,申欢.日本蛇根草Actin基因片段的克隆及其序列分析[J].贵州师范大学学报(自然科学版).2018
[6].叶玉妍,梁海峰,杨礼香.番杏Actin基因片段的克隆及生物信息学分析[J].生物资源.2018
[7].周振国,孟亚雄,宋展树,李葆春,马小乐.盐生草基因Unigene7547片段的克隆与分析[J].分子植物育种.2018
[8].孙威,林建,申欢,李欲轲,马玲.马缨杜鹃Actin基因片段的克隆及序列分析[J].贵州师范大学学报(自然科学版).2018
[9].张乐,巩新,刘波,吴军.呼吸道合胞病毒F1片段膜外区的原核表达及其多克隆抗体制备[J].生物技术通讯.2018
[10].陈海涛,邵亚林,赵展平,赵平,刘小烛.樟叶越桔VdARP7基因片段克隆与表达分析[J].西南林业大学学报(自然科学).2018