基于miRNA-30b-5p/TLR4/NF-κB轴探究针灸改善大鼠膝骨关节炎损伤的实验研究

基于miRNA-30b-5p/TLR4/NF-κB轴探究针灸改善大鼠膝骨关节炎损伤的实验研究

论文摘要

目的:探究基于miRNA-30b-5p/TLR4/NF-κB轴针灸治疗膝骨关节炎(KOA)损伤大鼠的疗效。方法:40只大鼠随机分为5组(n=8):正常组、模型组、单一针灸治疗组、针灸+miRNA-30b-5p-mimics联合治疗组以及针灸+siRNA-TLR4联合治疗组。经过4周的治疗后,采用HE染色观察膝关节软骨组织病理变化;ELISA法检测各组大鼠滑膜液中TNF-α、IL-1β、IL-6和MMP-13的分泌水平;qRT-PCR检测软骨组织中miRNA-30b-5p、TLR4和NF-κB的表达水平;Western blot检测软骨组织中TLR4、NF-κB、IL-6和MMP-13蛋白水平的表达;TUNEL染色检测各组大鼠膝骨关节软骨中软骨细胞凋亡情况;双荧光素酶报告试验检测miRNA-30b-5p与TLR4的靶向关系。结果:与模型组比较,单一针灸及联合治疗显著改善了KOA大鼠软骨组织的病理学变化;显著下调了滑膜液中TNF-α、IL-1β、IL-6和MMP-13的分泌水平(P<0.05,P<0.01);显著抑制软骨组织中TLR4、NF-κB、IL-6和MMP-13的表达水平(P<0.05,P<0.01);同时促进miRNA-30b-5p的表达(P<0.01);显著抑制了膝关节软骨中软骨细胞的凋亡。此外,双荧光素酶报告试验证实TLR4为miRNA-30b-5p的靶基因。结论:针灸能显著改善KOA大鼠膝关节软骨组织的病理学变化,缓解炎症反应,抑制膝骨关节中软骨细胞的凋亡,这可能与其对miRNA-30b-5p/TLR4/NF-κB轴的调控密切相关。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 主要试剂及仪器
  •     1.1.2 实验动物
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 实验动物分组及大鼠KOA模型构建
  •     1.2.2 治疗方法
  •     1.2.3 样本采集
  •     1.2.4 病理学变化检测(HE染色)
  •     1.2.5 膝关节滑膜液TNF-α、IL-1β、IL-6和MMP-13的分泌水平检测
  •     1.2.6 qRT-PCR检测软骨组织中miRNA-30b-5p、TLR4和NF-κB的表达水平
  •     1.2.7 Western blot检测软骨组织中TLR4、NF-κB、IL-6和MMP-13蛋白表达量
  •     1.2.8 软骨组织中软骨细胞凋亡检测(TUNEL染色)
  •     1.2.9 双荧光素酶报告试验验证miRNA-30b-5p与TLR4的靶向关系
  •   1.3 统计学分析
  • 2 结果
  •   2.1 大鼠膝关节软骨组织病理学变化
  •   2.2 ELISA检测滑膜液TNF-α、IL-1β、IL-6和MMP-13的分泌水平
  •   2.3 软骨组织中miRNA-30b-5p、TLR4和NF-κB在mRNA水平上的表达
  •   2.4 软骨组织中TLR4、NF-κB、IL-6和MMP-13蛋白表达量
  •   2.5 TUNEL染色检测软骨组织中软骨细胞凋亡情况
  •   2.6 miRNA-30b-5p与TLR4的靶向关系预测及验证
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 林道冠,徐桂丽

    关键词: 针灸,膝骨关节炎,大鼠,炎症反应

    来源: 中国免疫学杂志 2019年22期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 中医学

    单位: 三亚市人民医院康复医学科,三亚市人民医院耳鼻喉科

    分类号: R245

    页码: 2730-2735

    总页数: 6

    文件大小: 861K

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