增加雷斯青霉15α–羟化酶基因拷贝数提高甾体转化效率

增加雷斯青霉15α–羟化酶基因拷贝数提高甾体转化效率

论文摘要

孕二烯酮是第三代高效避孕药的主要成分.雷斯青霉(Penicilliumraistrickii)ATCC10490催化甾体左旋乙基甾烯双酮的C15α–羟基化反应合成孕二烯酮的重要中间体C15α–羟基左旋乙基甾烯双酮.为了提高现有生产菌种的转化效率,本文研究了在雷斯青霉ATCC10490中增加甾体C15α–羟化酶基因(PRH)拷贝数对转化效率的影响.分别构建了PRH基因的诱导型和组成型过表达载体pPZP-p800-PRH和pPZP-TrpC-PRH,并通过同源重组的方法定点整合到雷斯青霉基因组.转化实验表明,在出发菌株中增加一个PRH基因拷贝显著提高了甾体左旋乙基甾烯双酮转化效率,重组菌PRH-P800和PRH-TrpC的摩尔转化率分别提高了13%和20%,同时转化时间均缩短了12 h.

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌株与质粒
  •     1.1.2 酶与试剂
  •     1.1.3 主要溶液及缓冲液
  •     1.1.4 培养基
  •     1.1.5 甾体化合物
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 雷斯青霉ATCC10490重组菌的构建
  •     1.2.2 雷斯青霉ATCC10490孢子悬液的制备
  •     1.2.3 根癌农杆菌AGL-1的转化和培养
  •     1.2.4 雷斯青霉过表达转化子的筛选与验证
  •     1.2.5 重组雷斯青霉PRH基因的拷贝数检测
  •     1.2.6 雷斯青霉重组菌的甾体转化实验
  •     1.2.7 硅胶薄层层析 (TLC) 分析
  •     1.2.8 转化产物的高效液相色谱 (HPLC) 分析
  •     1.2.9 雷斯青霉重组菌转化效率测定
  • 2 结果与分析
  •   2.1 雷斯青霉ATCC10490诱导型启动子与组成型启动子过表达载体的构建
  •   2.2 雷斯青霉过表达载体转化根癌农杆菌
  •   2.3 雷斯青霉重组菌株的鉴定
  •   2.4 PRH过表达重组菌株拷贝数的确定
  •   2.5 增加甾体羟化酶基因一个拷贝对转化效率的影响
  • 3 结语
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李雪龙,李改,谢东奇,金鹏,毛淑红,王正祥,刘晓光

    关键词: 雷斯青霉,孕二烯酮,羟化酶,左旋乙基甾烯双酮

    来源: 天津科技大学学报 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 天津科技大学生物工程学院,天津科技大学化工与材料学院

    基金: 国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(2011AA02A211)

    分类号: Q78

    DOI: 10.13364/j.issn.1672-6510.20180080

    页码: 16-21+29

    总页数: 7

    文件大小: 1238K

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