导读:本文包含了噬菌体展示文库论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:噬菌体,文库,布鲁氏菌,抗体,蛋白,双峰驼,基因。
噬菌体展示文库论文文献综述
田栢会,易乐,王习文,李颂,付世杰[1]（2019）在《噬菌体展示禽流感病毒抗原变异性基因片段文库的构建》一文中研究指出构建T7噬菌体展示禽流感病毒抗原变异性基因片段文库.首先,从Gene Bank中查找筛选禽流感病毒抗原变异性基因,将其截短、修饰、简并后得到禽流感病毒抗原变异性基因微阵列.其次,将合成的禽流感病毒抗原变异性基因片段文库扩增、酶切,链接到双酶切后的T7噬菌体载体基因上,构成重组噬菌体DNA.最后,重组噬菌体DNA经体外包装和扩增,得到T7噬菌体展示文库,并进行T7噬菌体展示文库滴度、重组率和免疫活性测定.实验结果表明,从Gene Bank中查找、筛选、剪切和修饰共获得96 258条序列构建T7噬菌体展示文库,原始文库滴度为3.6×107个菌落/mL,重组率大于90%.用禽流感病毒H5N1抗体进行捕获,经聚合酶链式反应(PCR)鉴定,得到理想目的条带,证明噬菌体表面展示蛋白具有抗原活性,可用于禽流感病毒感染患者的快速检测及抗原表位筛选.(本文来源于《吉林大学学报(理学版)》期刊2019年04期）
王阔鹏,于凌娇,刘倩宏,刘麒,张履冰[2]（2019）在《噬菌体展示布鲁氏菌蛋白文库构建及差减筛选融合蛋白》一文中研究指出目的建立噬菌体展示羊型布鲁氏菌16M株表面蛋白文库,差减筛选具有良好特异性、亲和力及反应原性的蛋白,为确定新型诊断用抗原奠定基础。方法利用噬菌粒载体pYW01构建重组羊型布鲁氏菌16M株基因文库,辅助噬菌体VCSM13感染基因文库进而构建噬菌体展示羊型布鲁氏菌16M蛋白文库。利用PEG纯化后,扩增蛋白文库。随机挑取单克隆,提取质粒,测序鉴定蛋白文库。通过差减筛选,选择具有良好特异性、亲和力及反应原性的表面蛋白,为确定诊断用抗原奠定基础。结果通过DNA重组技术,构建羊型布鲁氏菌16M基因文库,库容量达到10~8pfu/mL,并且随机性良好。利用辅助噬菌体VCSM13包装基因文库,随机挑取蛋白文库中单克隆,提取质粒,经测序鉴定,成功构建噬菌体展示羊型布鲁氏菌16M株表面蛋白文库。利用免疫血清及感染血清对噬菌体展示蛋白文库进行差减淘选,筛选出6个噬菌体融合蛋白。经Western-blot分析6个噬菌体融合蛋白均具有较好的反应原性及特异性。结论成功构建噬菌体展示布鲁氏菌蛋白文库,差减筛选出6个具有较好反应原性及特异性的融合蛋白,为后续新型血清学诊断制剂筛选奠定基础。(本文来源于《中国人兽共患病学报》期刊2019年05期）
于凌娇,张履冰,王阔鹏,刘倩宏[3]（2019）在《噬菌体展示布鲁氏菌基因文库插入效率鉴定》一文中研究指出布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的以流产和发热为主要特征的人兽共患病,严重威胁着人和多种动物的生命健康,导致巨大经济损失及严重危害公共安全。实验室前期利用噬菌体展示技术建立布鲁氏菌16M株基因组文库,以期从该文库中筛选具有良好抗原性的诊断制剂。为检测构建文库的随机性及多样性,本研究利用Touch-down PCR对构建的噬菌体展示布鲁氏菌基因组文库进行评价。结果表明,构建文库具有较好随机性及多样性,为后续试验奠定基础。(本文来源于《吉林农业科技学院学报》期刊2019年01期）
戴佩,邓湘赢,余敏君,李玲玲,罗丹[4]（2018）在《从T7噬菌体展示cDNA文库筛选生殖支原体黏附蛋白的互作蛋白》一文中研究指出目的:从人尿道上皮细胞(SV-HUC-1)T7噬菌体展示cDNA文库筛选生殖支原体黏附蛋白(MgPa)的互作蛋白。方法:以原核表达、纯化的重组生殖支原体黏附蛋白(r Mg Pa)为靶分子,对人尿道上皮细胞T7噬菌体展示cDNA文库进行4轮生物淘选,采用T7特异性引物扩增阳性克隆的插入片段,PCR产物测序后进行BLAST分析,间接ELISA、斑点免疫印迹和Far-western blot检测阳性噬菌体与rMgPa的特异结合。结果:经过4轮生物淘选,噬菌体克隆富集明显;DNA测序后经BLAST比对分析,结果表明随机挑取的32个阳性克隆包括7种不同序列,其中以RPL35重复次数最多;间接ELISA、斑点免疫印迹和Far-western blot结果表明7个代表性噬菌体均能与rMgPa特异结合。结论:60S核糖体蛋白L35(RPL35)可能是MgPa的互作蛋白,为深入了解MgPa的生物学功能以及生殖支原体的致病机制奠定了实验基础。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2018年05期）
马琳琳,朱敏,李光辉,李延飞,盖军伟[5]（2018）在《TIM-3纳米抗体噬菌体展示文库的构建及筛选》一文中研究指出肿瘤免疫治疗是肿瘤治疗的一个重要突破口。T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(T cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecule-3,TIM-3)作为T细胞抑制性免疫检查点,在肿瘤抗体治疗中具有独特的应用优势。骆驼科动物体内存在的一种天然缺失轻链的纳米抗体(nanobody,Nb),逐渐成为新一代抗体治疗的新兴力量。本研究利用TIM-3抗原成功免疫新疆双峰驼,建立噬菌体展示文库,并通过噬菌体展示技术初步筛选出29株序列差异的TIM-3纳米抗体。另外,本研究成功构建了TIM-3稳转细胞株,利用流式细胞仪从这29株纳米抗体中筛选出10株特异性强且亲和力高的TIM-3纳米抗体。本研究将为功能性阻断型TIM-3纳米抗体的后续筛选和TIM-3全人源纳米抗体创新药物的开发奠定基础。(本文来源于《药学学报》期刊2018年03期）
高川,董华,童朝阳,穆晞惠,张金平[6]（2016）在《相思子毒素(Abrin)亲和体定点随机突变噬菌体展示文库的构建》一文中研究指出目的构建相思子毒素亲和体定点随机突变噬菌体展示文库,并筛选出高亲和力的毒素特异识别亲和体。方法通过定点随机突变获得亲和体基因组合,克隆于噬菌体展示载体,构建噬菌体展示随机组合亲和体文库。以相思子毒素为靶分子对该文库进行3轮亲和筛选,用ELISA鉴定毒素结合活性。结果成功构建噬菌体展示亲和体随机组合文库,库容量为3.4×10~7,滴度为4×10~(14)pfu/mL;获得9株高活性亲和体噬菌体抗体,测序结果表明13个位点均发生了突变,突变率100%。结论通过亲和体噬菌体展示随机组合文库筛选获得了毒素新型抗体——亲和体,获得9种新型亲和体抗体。(本文来源于《2016中国环境科学学会学术年会论文集（第四卷）》期刊2016-10-14）
冯亚宁,姜志强,马晓玲,李江伟[7]（2016）在《新疆双峰驼纳米抗体噬菌体展示文库多样性的生物信息学分析》一文中研究指出【目的】骆驼免疫系统中只存在重链抗体,其可变区VHH片段是最小的天然抗体片段。通过对双峰驼VHH基因进行序列分析,了解双峰驼VHH基因特征,分析VHH文库多样性组成。【方法】采用新疆双峰驼VHH特异引物扩增全部抗体基因片段,连接到M13噬菌粒载体上,与p III蛋白融合表达在噬菌体表面,构建噬菌体展示文库。基因测序和菌落PCR方法,分析文库大小和阳性克隆插入率。NCBI-Ig GBLAST工具对抗体序列进行IMGT编号命名,Web Logo工具分析抗体保守序列分布频率,MEGA6软件对VHH序列进行同源性比对和系统进化树构建。【结果】利用免疫的新疆双峰驼淋巴细胞,构建了库容量为1.4×109的VHH抗体噬菌体展示文库。对91个随机挑选的文库TG1单菌落进行PCR。结果表明该文库VHH阳性插入率为97%,DNA测序表明文库多样性为97.8%。对91个克隆DNA测序结果进一步分析表明,这些基因中除2个为常规VH抗体外,其余均为重链VHH抗体。根据抗体序列中的特征氨基酸分布,将91个抗体序列划分为7个亚群。【结论】构建的新疆双峰驼VHH文库多样性较好,生物信息学分析揭示出文库中多样性克隆的分布和特征,有助于新疆双峰驼纳米抗体噬菌体展示文库的进一步构建。(本文来源于《新疆农业科学》期刊2016年08期）
李若彤[8]（2016）在《抗小鼠CD40单链抗体噬菌体展示文库的构建及高亲和力抗体的筛选》一文中研究指出目的:构建大鼠抗小鼠CD40单链抗体(single chain Fragment variable,Sc Fv)的噬菌体展示文库并对文库进行库容及多样性分析,进而筛选出高亲和力的激动型抗体。方法:(1)将乳化成功的小鼠重组CD40蛋白沿脊柱两侧皮肤皮下注射免疫Lewis大鼠(2)多次免疫Lewis大鼠,解剖并游离脾脏提取总RNA,采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术获得大鼠抗小鼠CD40抗体的重链可变区(Heavy Variable,VH)及轻链可变区(Light Variable,VL)的DNA片段(3)采用重迭延伸拼接PCR法(splicing by overlap extension PCR SOE-PCR)将抗体可变区的重链和轻链拼接成Sc Fv(4)通过限制性内切酶酶切及定向克隆技术将Sc Fv插入噬菌粒p CANTAB5E,构建重组噬菌粒p CANTAB5E-Sc Fv(5)将重组噬菌粒转化TG1感受态细胞,构建原核表达文库。(6)使用M13KO7辅助噬菌体侵染TG1文库,抗小鼠CD40单链抗体的噬菌体展示文库构建完成。(7)梯度稀释噬菌体抗体库,进行噬菌斑形成实验,计算抗体库容量,并随机挑选阳性克隆,分析噬菌体文库多样性。(8)对构建的噬菌体库扩增,并把小鼠CD40蛋白作为靶抗原利用微孔板筛选法筛选噬菌体抗体库,经“吸附-洗脱-扩增”步骤进行几轮筛选并进行测序分析。结果:(1)RT-PCR扩增免疫大鼠体内抗小鼠CD40抗体的VH、VL片段。(2)重迭延伸拼接PCR将抗体可变区重链和轻链拼接成Sc Fv,经基因测序可知VH、VL片段连接位置合适,琼脂糖凝胶电泳检测Sc Fv碱基大小约740bp,电泳条带清晰,亮度较好,Sc Fv拼接正确。(3)构建的重组质粒p CANTAB5E-Sc Fv经限制性内切酶双酶切处理(Sfi I及Not I),凝胶电泳结果显示两条条带分别位于740bp、4200bp左右位置,表明Sc Fv插入p CANTAB5E载体片段大小及位置正确,重组噬菌粒构建成功。(4)使用辅助噬菌体M13KO7侵染重组质粒TG1,抗小鼠CD40单链抗体的噬菌体文库构建完成,铺平板鉴定噬菌体文库库容量约为1.2×107pfu/ml,噬菌体滴度1012。(5)随机选择18个阳性单克隆扩增后测序分析,其中13个阳性克隆插入序列的大小及位置正确,测序结果经IMGT软件分析显示重迭拼接的Sc Fv序列与大鼠抗体的基因结构匹配度较高,将任意两个序列互相比对评价文库多样性,比对结果未见完全相同的序列。(6)利用小鼠CD40蛋白作为靶抗原,按照104的筛选压力对噬菌体库进行2轮“吸附-洗脱-扩增”富集筛选。2轮阳性克隆的测序结果进行多重比对,相互之间差异性降低,序列出现收敛现象,不过仍需进一步筛选,从而获得高亲和力抗体。结论:(1)成功构建大鼠抗小鼠CD40单链抗体的噬菌体展示文库。(2)文库库容及多样性评估显示,本研究所构建的噬菌体文库原始库容及多样性较好,符合后续抗体筛选实验要求,进一步可筛选出展示高亲和力大鼠抗小鼠CD40的激动型抗体的目的噬菌体。(3)随着筛选强度的增大,洗脱回收的重组噬菌体数量减少,测序结果中序列出现收敛现象,说明筛选出的重组噬菌体所展示的抗体亲和力不断提高,并且也证明了抗体库的筛选策略合适。为后续实验奠定良好的基础。(本文来源于《天津医科大学》期刊2016-05-01）
李变英,陈飞燕,陈建平,毕蕾,高静[9]（2016）在《T7噬菌体展示人肺癌cDNA文库筛选丹参-人参组分复方靶点研究》一文中研究指出目的通过噬菌体展示技术筛选丹参-人参组分复方(丹参总酚酸、人参总皂苷、人参多糖)的作用靶点。方法经过T7噬菌体展示人肺癌c DNA文库的4轮淘选,获得阳性噬菌体克隆,随机挑选10个克隆进行DNA提取和测序。基因序列用Ex PASy网站的Translate tool查找开放阅读框(ORF)。选取代表性多肽用生物膜干涉技术检测亲和力。结果 4轮淘选后阳性噬菌体克隆得到高度富集,10个样品中7个有相同的DNA序列,长度为471 bp(序列1),另外3个完全一致,长度为58 bp(序列2)。序列1得到4个ORFs,序列2未进行分析。丹参-人参组分复方和多肽His-MNTGRFGKTTSSPALTLGNFQKPL亲和力最高,K_D=4.57×10~(-8)mol/L,人参多糖、丹参总酚酸和多肽亲和力分别为K_D=7.23×10~(-8)mol/L、K_D=7.66×10~(-8)mol/L,人参总皂苷与多肽没有典型的结合和解离效应。结论本研究获得了与丹参-人参组分复方高亲和力多肽,为丹参-人参组分复方肺癌靶向治疗研究提供依据。(本文来源于《中成药》期刊2016年04期）
冯金涛,韩愉,袁炜,张欣,许瑞[10]（2016）在《阳性水牛、黄牛IgG筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库》一文中研究指出为寻找有效的家畜日本血吸虫病诊断抗原,从感染日本血吸虫的水牛、黄牛血清中纯化IgG,以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫(44日龄)噬菌体展示c DNA文库。经每种动物IgG叁轮(总计六轮)筛选后,随机挑取53个阳性噬菌体克隆进行序列测定及生物信息学分析。获得了9个EST序列,其中7个EST序列与已知基因或表达序列标签同源,2个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,以噬菌体展示载体的10B衣壳蛋白开放阅读框(open reading frame,ORF)为依据,对上述7个与Gen Bank数据库资料同源的EST进行对码分析,结果 7个EST序列能和噬菌体展示载体阅读框对码,为有效展示序列。其中3个EST具有较高的重复度,在51个有效克隆中,25个为HSP70 homolog基因,15个为Keratin9基因有重复,6个为Ornithine--oxo-acid transaminase基因。研究结果显示,HSP70 homolog基因、Keratin9基因和Ornithine--oxo-acid transaminase基因作为诊断家畜血吸虫病候选抗原基因,值得进一步开展克隆、表达和诊断效果评估方面的研究。(本文来源于《中国动物传染病学报》期刊2016年02期）
噬菌体展示文库论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的建立噬菌体展示羊型布鲁氏菌16M株表面蛋白文库,差减筛选具有良好特异性、亲和力及反应原性的蛋白,为确定新型诊断用抗原奠定基础。方法利用噬菌粒载体pYW01构建重组羊型布鲁氏菌16M株基因文库,辅助噬菌体VCSM13感染基因文库进而构建噬菌体展示羊型布鲁氏菌16M蛋白文库。利用PEG纯化后,扩增蛋白文库。随机挑取单克隆,提取质粒,测序鉴定蛋白文库。通过差减筛选,选择具有良好特异性、亲和力及反应原性的表面蛋白,为确定诊断用抗原奠定基础。结果通过DNA重组技术,构建羊型布鲁氏菌16M基因文库,库容量达到10~8pfu/mL,并且随机性良好。利用辅助噬菌体VCSM13包装基因文库,随机挑取蛋白文库中单克隆,提取质粒,经测序鉴定,成功构建噬菌体展示羊型布鲁氏菌16M株表面蛋白文库。利用免疫血清及感染血清对噬菌体展示蛋白文库进行差减淘选,筛选出6个噬菌体融合蛋白。经Western-blot分析6个噬菌体融合蛋白均具有较好的反应原性及特异性。结论成功构建噬菌体展示布鲁氏菌蛋白文库,差减筛选出6个具有较好反应原性及特异性的融合蛋白,为后续新型血清学诊断制剂筛选奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
噬菌体展示文库论文参考文献
[1].田栢会,易乐,王习文,李颂,付世杰.噬菌体展示禽流感病毒抗原变异性基因片段文库的构建[J].吉林大学学报(理学版).2019
[2].王阔鹏,于凌娇,刘倩宏,刘麒,张履冰.噬菌体展示布鲁氏菌蛋白文库构建及差减筛选融合蛋白[J].中国人兽共患病学报.2019
[3].于凌娇,张履冰,王阔鹏,刘倩宏.噬菌体展示布鲁氏菌基因文库插入效率鉴定[J].吉林农业科技学院学报.2019
[4].戴佩,邓湘赢,余敏君,李玲玲,罗丹.从T7噬菌体展示cDNA文库筛选生殖支原体黏附蛋白的互作蛋白[J].中国免疫学杂志.2018
[5].马琳琳,朱敏,李光辉,李延飞,盖军伟.TIM-3纳米抗体噬菌体展示文库的构建及筛选[J].药学学报.2018
[6].高川,董华,童朝阳,穆晞惠,张金平.相思子毒素(Abrin)亲和体定点随机突变噬菌体展示文库的构建[C].2016中国环境科学学会学术年会论文集（第四卷）.2016
[7].冯亚宁,姜志强,马晓玲,李江伟.新疆双峰驼纳米抗体噬菌体展示文库多样性的生物信息学分析[J].新疆农业科学.2016
[8].李若彤.抗小鼠CD40单链抗体噬菌体展示文库的构建及高亲和力抗体的筛选[D].天津医科大学.2016
[9].李变英,陈飞燕,陈建平,毕蕾,高静.T7噬菌体展示人肺癌cDNA文库筛选丹参-人参组分复方靶点研究[J].中成药.2016
[10].冯金涛,韩愉,袁炜,张欣,许瑞.阳性水牛、黄牛IgG筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库[J].中国动物传染病学报.2016
论文知识图
