导读:本文包含了连接肽论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,蛋白质,干扰素,聚糖,甘露,碳水化合物,胸腺肽。
连接肽论文文献综述
赵伟欣,刘松,刘立明,陈坚,堵国成[1]（2017）在《自组装双亲短肽氨基酸组成及连接肽对其融合酶表达量的影响》一文中研究指出自组装双亲短肽(self-assembling amphipathic peptides,SAPs)是一类亲疏水氨基酸按一定规律分布,具有自聚合效应的氨基酸短肽,融合在酶蛋白N端时,具有促进表达和稳定化的功能。以自组装双亲短肽S1(AEAEAKAKAEAEAKAK)为出发序列,与来源于Bacillus sp.WSHB04-02的碱性果胶酶(alkaline polygalacturonate lyase,PGL)组成的融合酶为模式蛋白,考察SAPs的氨基酸组成及SAPs融合蛋白内部连接肽(linker peptide)对PGL-SAP融合酶的表达量的影响。结果显示,含有较弱疏水性的甘氨酸和丙氨酸残基的PGL-S1突变体可使融合酶正常表达,其中,含有组氨酸的PGL-S1v1具有相对最高的胞外酶活,较野生型提高了9倍,较PGL-S1提高了1.5倍。连接肽方面,与刚性连接肽相比,含有柔性连接肽的融合酶具有更高的胞外酶活,含有(GGGGS)3的PGL-F-S1融合酶胞外酶活是野生型的14倍。上述结果表明,SAPs的氨基酸组成及融合蛋白之间的连接肽对PGL融合酶的表达具有重要影响。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2017年12期）
王春娟,唐诗涵,邬敏辰,董运海,杭宜岭[2]（2017）在《不同类型连接肽对β-甘露聚糖酶AuMan5A酶学性质的影响》一文中研究指出以柔性肽F(GGGGS)3或刚性肽R(EAAAK)3为连接肽,将海栖热胞菌27家族碳水化合物结合域(CBM27)与宇佐美曲霉5家族β-甘露聚糖酶(Au Man5A)的C末端融合,探讨不同类型连接肽对Au Man5A酶学性质的影响,获取具有优良酶学性质的融合酶。采用重迭PCR技术扩增融合酶基因Auman5A-F-cbm~27和Auman5A-R-cbm~27,分别将Auman5A和融合酶基因在毕赤酵母GS115中进行表达,分析表达产物reAuMan5A、reAuMan5A-F-C和reAuMan5A-R-C的酶学性质。结果表明:该3种β-甘露聚糖酶对角豆胶的K_m值分别为1.7、1.9和0.9 mg/mL。3种酶的最适温度T_(opt)分别为70、65和70℃;reAuMan5A-F-C和reAuMan5A-R-C在70℃的半衰期t_(1/2)~(70)分别为36 min和124 min,较reAuMan5A的(t_(1/2)~(70)=9 min)延长了3倍和12.8倍。reAuMan5A-R-C具有底物亲和力强、热稳定性高和pH稳定范围广等特点,在食品、饲料、医药和能源等领域有着巨大的应用潜力。(本文来源于《食品与生物技术学报》期刊2017年09期）
Jawad,Ullah[3]（2017）在《连接肽对枯草杆菌芽孢衣壳蛋白B表面展示海栖热袍菌脂肪酶Tm1350的影响》一文中研究指出工业酶是使用生物催化方法生产食品、医药、化工等产品的主要酶源。它们具有手性、立体异构和结构域特异性,并且具有在简单介质(如水)中而不是特定介质(如有机溶剂和其他溶液)中识别底物的能力。脂肪酶是α或β折叠水解酶,也是众所周知的蛋白拆分器。来自嗜热生物的脂肪酶能耐受高温,可用于工业生物过程。而且,这些酶的稳定性和表达可以通过将其展示在芽孢表面上来改善。芽孢展示技术效果显着,低成本,耗时少,因此是很有潜力的技术,可应用于环境、医疗和工业等行业中。芽孢能耐受恶劣的工业环境,包括耐热、耐碱、耐化学溶剂,易于回收和可再利用,因此芽孢展示技术工业中应用前景广泛。酵母菌和细菌(包括革兰氏阳性和阴性菌),是最常被用于展示各种蛋白质的载体,但与孢子不同,由于营养细胞对热、p H和化学物质敏感,易破裂。因此,芽孢是避免这些问题的最佳选择,并且相对于营养细胞展示技术,芽孢展示技术则具有多种应用领域。梭菌和芽孢杆菌的各种菌株都能形成芽孢,但是枯草芽孢杆菌最合适做展示载体,因为根据世卫组织认定它对人类是安全的,被认为是“GRAS”(通常被认为是安全的)。芽孢表面展示技术在工业、疫苗开发、环境等方面有着各种应用,细胞表面展示增强了蛋白质表达稳定性和活性,合适的连接肽会使展示的融合蛋白活性和稳定性增强。在本研究中,以海栖热袍菌和枯草芽孢杆菌染色体基因组作为模板进行PCR扩增脂肪酶Tm1350和Cot B基因,在Tm1350和Cot B之间融合了一系列具有不同长度、刚柔性和残基位置的连接肽基因,将所需基因插入大肠杆菌B.subtilis穿梭载体PHS,构建了重组质粒。将重组质粒PHS-Cot B-LxTm1350转化到枯草芽孢杆菌中并诱导芽孢形成。纯化芽孢,通过western印迹分析证实了Cot B-Lx-Tm1350的表达。检测了各种温度(40-80℃),不同p H(范围4.0-10)和不同有机溶剂对含各种连接肽的芽孢表面展示酶生物活性的影响。结果表明所有芽孢展示的融合蛋白的最适温度为75℃,L8和L10的最适p H为8.5,对于L0,L5,L6和L9,最适p H为9.0,而对于L1,L2,L3,L4和L7最适p H为9.5。在最佳温度和p H下,具有较长柔性连接肽L9(GGGGS-GGGGS-GGGGS-GGGGS)和L7(GGGGS-GGGGS-EAAAK-EAAAK-GGGGS-GGGGS)的融合蛋白具有比原始活性高1.29和1.16倍的活性。此外,在80℃下,孵育5小时后,具有连接肽L3(EAAAKGGGGS)和L9(GGGGS-GGGGS-GGGGS-GGGGS)的展示酶热稳定性最好,分别比原来的活性高1.40和1.35倍。测定了不同氨基酸残基位置取向和长度的连接肽的展示酶生物活性,其中L5,L6和L7含有30个不同氨基酸残基取向的连接肽的测定结果表明L7展示酶的活性分别是L6和L5的1.05和1.27倍。研究了0.1%蛋白酶K和菠萝蛋白酶,20%乙醇和30%甲醇对含连接肽的重组芽孢活性的影响。具有适当甘氨酸残基(柔性)的连接肽展示比丙氨酸残基(刚性)具有更高的活性。综上所述,为了提高工业过程中展示酶的活性和稳定性,通过在一定程度上优化连接肽的氨基酸残基位置取向和刚柔性,能达到改善效果。(本文来源于《江苏大学》期刊2017-06-05）
王春娟[4]（2016）在《β-甘露聚糖酶与27家族CBM的融合及连接肽的优化》一文中研究指出β-1,4-D-甘露聚糖酶(endo-β-1,4-D-mannanase,EC 3.2.1.78)可随机切割线性甘露聚糖或其衍生物主链上的β-1,4糖苷键,产生低分子量的水溶性寡糖。其可被广泛应用于食品、饲料、石油钻探、纺织印染等工业领域。宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)GH 5家族β-甘露聚糖酶(Au Man5A)具有较高的最适温度和较强的pH耐受性,但其仍存在温度耐受性差与底物亲和力弱等缺陷,限制了其在工业中的应用。为改善其酶学性质,本研究将27家族的碳水化合物结合结构域(CBM)与AuMan5A融合,并对融合酶的连接肽进行优化,最终成功获得具有优良酶学性质的β-甘露聚糖酶。从CAZy数据库中选取多条27家族的编码CBM的序列,对其进行同源比对,构建CBM27进化树并进行同源建模。利用软件对CBM27与甘露五糖分子进行分子对接,并计算其结合自由能。其中来自于海栖热胞菌(Thermotoga maritima)MSB8的TmCBM27与甘露五糖的结合自由能最低,为-209.99 kcal/mol。采用重迭PCR技术将TmCBM27分别融合至AuMan5A的C末端及N末端,得到融合酶基因Auman5A-cbm27及cbm27-Auman5A,构建重组表达质粒pPIC9K-Auman5A-cbm27和pPIC9K-cbm27-Auman5A。将上述两种质粒及pPIC9K-Auman5A电转入毕赤酵母GS115中,经甲醇诱导发酵并纯化后,重组酶reAuMan5A、reAuMan5A-CBM27、reCBM27-AuMan5A的比活性分别为230.6 U/mg、280.3 U/mg和281.1 U/mg。酶学性质结果显示:叁者的Topt分别为70℃、70℃和60℃。reAuMan5A-CBM27可在68℃及以下保持稳定,比reAuMan5A与reCBM27-AuMan5A的温度稳定性(60℃和58℃)分别提高了8℃和10℃。reAuMan5A、re AuMan5A-CBM27、reCBM27-AuMan5A的Tm值分别为66.5℃、74.2℃、61.3℃,与酶的热稳定性基本保持一致。叁者对角豆胶的Km值分别为1.71 mg/m L、0.94 mg/mL、1.26 mg/m L。数据表明TmCBM27连在C末端时,其对催化域发挥了热保护作用,且其对甘露糖特有的结合力也使得融合酶更易与底物结合,从而提高了融合酶的热稳定性与底物的亲和力。分别选择柔性连接肽F(GGGGS)3和刚性连接肽R(EAAAK)3对reAuMan5A-CBM27进行连接肽优化。采用重迭PCR技术构建融合酶基因Auman5A-F-cbm27及Auman5A-R-cbm27,并在毕赤酵母中成功表达,重组融合酶reAuMan5A-F-C和reAuMan5A-R-C的比活性分别为217.2 U/mg和341.7 U/mg。酶学性质结果显示:reAuMan5A-F-C和reAuMan5A-R-C的Topt分别为65℃和70℃;温度稳定性分别为60℃和70℃;Tm值分别为68.4℃和74.9℃。表明α-螺旋的刚性连接肽使得融合酶reAuMan5A-R-C的整体结构更加稳定。两者对角豆胶的Km值分别为1.95 mg/m L、0.73 mg/mL。reAuMan5A-R-C较强的底物亲和力也表明其具有重要的工业应用价值。选择reAuMan5A-R-C对角豆胶进行水解,条件为:配制浓度为30 mg/m L的角豆胶水溶液,添加60 U/g角豆胶的酶液,在温度为60℃下酶解6 h,角豆胶的水解率可达55.5%。本论文的理性设计并结合基因融合技术用于改善AuMan5A酶学性质的实验方案和结果,迄今为止未见有文献报道。(本文来源于《江南大学》期刊2016-06-01）
蔡晓娜[5]（2014）在《不同连接肽的TRAIL-Fc融合蛋白在E.coli中的重组表达及其活性研究》一文中研究指出肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducingligand，TRAIL)与TNF-α和Fas-L类似，是肿瘤坏死因子家族TNF的成员之一，但具有比后两者更广的抗癌谱。TRAIL可与死亡受体特异性结合引起肿瘤细胞凋亡，但对正常细胞无明显影响，且不会产生严重的炎症反应，是肿瘤药物研究的热点，然而，TRAIL在体内的半衰期较短，严重影响了其体内疗效。将人IgG1Fc片段与目的蛋白片段进行融合表达已用于增加目的蛋白的半衰期，并可减少TRAIL可能带来的肝细胞毒性，是理想的增强TRAIL半衰期和安全性的手段。研究目的：本研究利用大肠杆菌分泌表达系统重组表达含不同连接肽的重组TRAIL-Fc融合蛋白，通过摇瓶表达、鉴定筛选结构稳定的连接肽，确定候选的TRAIL-Fc融合蛋白结构。在此基础上，筛选高表达的工程菌株、优化发酵条件及纯化工艺、得到高纯度TRAIL-Fc融合蛋白，进行结构确定和体内外活性测定，确定最终结构的TRAIL-Fc融合蛋白，为进一步研发肿瘤药物奠定基础。研究方法：①设计并构建含不同连接肽的重组表达质粒pET-22b-TRAIL-Fc，并分别采用CaCl2法转化表达宿主菌E.coli BL21(DE3)plysS。②利用IPTG进行诱导表达重组TRAIL-Fc融合蛋白，通过SDS-PAGE电泳、液质联用LC-MS检测并筛选蛋白结构稳定且高表达、不易在Hinge处断裂的蛋白结构，并进行30L发酵培养。③对TRAIL-Fc融合蛋白纯化工艺进行研究，利用Q离子交换层析柱、Protein A亲和层析柱、CM离子交换层析柱纯化目的蛋白，并对目的蛋白进行结构确认研究。④采用MTT法检测TRAIL-Fc融合蛋白体外对多株肿瘤细胞的生长抑制作用，建立H22小鼠肝癌模型，检测TRAIL-Fc融合蛋白对体内肿瘤细胞生长抑制作用，研究TRAIL-Fc融合蛋白体内外的生物学活性。研究结果：①经双酶切及测序鉴定，成功的构建了重组质粒pET-22b-TRAIL-Fc-L1、pET-22b-TRAIL-Fc-L2、pET-22b-TRAIL-Fc-L3和pET-22b-TRAIL-Fc-L4，并成功转化至E.coli BL21(DE3)plysS。②经SDS-PAGE电泳、液质联用LC-MS检测，重组TRAIL-Fc-L3、TRAIL-Fc-L4融合蛋白的结构较稳定，不易于Hinge区发生断裂。③纯化回收发酵表达样品，成功获得重组融合蛋白TRAIL-Fc-L3、TRAIL-Fc-L4，纯度达到95%以上，经SDS-PAGE电泳、质谱测定和Western Blot分析证明TRAIL-Fc-L3、TRAIL-Fc-L4的分子量、C端和N端与理论相符，表达的目的蛋白结构正确。④体外细胞活性测定表明TRAIL-Fc-L3对各种肿瘤细胞生长的抑制作用更明显，且TRAIL-Fc-L3对TRAIL对照品不敏感的肿瘤细胞更为敏感。体内活性测定表明TRAIL-Fc-L3能明显抑制肿瘤细胞的生长并对小鼠肝功能无毒副作用，同时TRAIL与Fc片段的融合蛋白的半衰期明显提高，叁天给药一次即可起到较好的效果。(本文来源于《重庆理工大学》期刊2014-03-20）
李堰忠,杨旭中,吕强,王富军,赵健[6]（2013）在《一种人源性穿膜肽融合蛋白中连接肽的引入及其在HeLa细胞中的穿膜活性》一文中研究指出p14ARF(alternate reading frame)是一种人肿瘤抑制因子,其N端1-22位氨基酸可以携带药物蛋白进入细胞发挥药理作用,记为ARF。在示踪蛋白EGFP和ARF间引入了二肽(linker 2)、柔性七肽(linker 7F)和刚性七肽(linker 7S),研究其对融合蛋白EGFP-ARF穿膜活性的影响。实验结果显示引入七肽(linker 7)的融合蛋白,其荧光强度高于linker 2的融合蛋白。激光共聚焦观察表明,引入linker 7F的融合蛋白比引入linker 2的融合蛋白的穿膜效率高5倍左右,比引入linker 7S的融合蛋白高3.8倍左右。结果表明连接肽的形式对融合蛋白的结构和功能都有显着影响,为ARF作为药物运输载体的研究提供了依据。(本文来源于《江西农业大学学报》期刊2013年06期）
张立超,李军明,葛高顺,孔令岭,胡学军[7]（2013）在《连接肽对融合蛋白ELP[I]_(30)-linker-eGFP相变的影响》一文中研究指出研究G4S和Poly N连接肽对融合蛋白ELP[I]30-linker-eGFP相变的影响.将编码两种不同连接肽G4S和Poly N的绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)基因克隆到pET28-ELP[I]30表达载体中,在宿主菌E.coli BLR(DE3)中经IPTG诱导表达ELP[I]30-linker-eGFP,通过可逆相变循环(inverse transition cycling,ITC)及镍柱亲和层析纯化ELP[I]30-linker-eGFP蛋白.结果显示,成功构建、表达具有活性的两种连接肽的融合蛋白ELP[I]30-linker-eGFP,连接肽G4S使融合蛋白产生不可逆相变,而Poly N不影响融合蛋白可逆相变,该研究对类弹性蛋白标签的应用具有指导意义.(本文来源于《生命科学研究》期刊2013年05期）
沈维强[8]（2013）在《连接肽对双功能融合蛋白于药动学及药效学之影响》一文中研究指出我们以转铁蛋白(Tf)与人生长激素(GH)或人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的融合蛋白为模型,来研究双功能融合蛋白的药动学与药效学。在融合蛋白的两个蛋白结构域之间加入不同的连接肽可以改变融合蛋白与其两个相应受体之间的亲和力。因此,融合蛋白的血浆半衰期及生物活性都会受到影响。融合蛋白中活性蛋白结构域(GH或G-CSF)对受体的亲和力和融合蛋白血浆半衰期之间有强烈的关联性。不同连接肽的引入也显示出转铁蛋白受体在融合蛋白的循环回收以及血浆半衰期延长中发挥了作用。由于融合蛋白在生物体内的疗效取决于它的血浆半衰期和生物活性,所以在决定双功能融合蛋白在生物体内的治疗效能时,药动学和药效学都需要纳入考虑。(本文来源于《2013第六届国际蛋白质和多肽大会论文集》期刊2013-03-21）
张鹏,李明谦,郝林琳,官员,房希碧[9]（2012）在《猪干扰素α1与胸腺肽α1融合蛋白连接肽的初步筛选》一文中研究指出猪α干扰素具有广谱抗病毒活性,且具有毒副作用小、速效多能的特点。胸腺肽是28个氨基酸的多肽,无种属特异性,能够增强NK细胞功能,连续诱导T细胞分化、发育和成熟,提高机体免疫力。医学临床表明,干扰素与胸腺肽具有协调和互补作用,联合应用优于单独使用,且具有更低的毒副作用。本研究拟利用基因工程方法将猪干扰素α1(poIFN-α1)和胸腺肽α1(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2012年S1期）
张鹏,李明谦,郝林琳,官员,房希碧[10]（2012）在《猪干扰素α1与胸腺肽α1融合蛋白连接肽的初步筛选》一文中研究指出猪α干扰素具有广谱抗病毒活性,且具有毒副作用小、速效多能的特点。胸腺肽是28个氨基酸的多肽,无种属特异性,能够增强NK细胞功能,连续诱导T细胞分化、发育和成熟,提高机体免疫力。医学临床表明,干扰素与胸腺肽具有协调和互补作用,联合应用优于单独使用,且(本文来源于《全国动物生理生化第十二次学术交流会论文摘要汇编》期刊2012-08-01）
连接肽论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
以柔性肽F(GGGGS)3或刚性肽R(EAAAK)3为连接肽,将海栖热胞菌27家族碳水化合物结合域(CBM27)与宇佐美曲霉5家族β-甘露聚糖酶(Au Man5A)的C末端融合,探讨不同类型连接肽对Au Man5A酶学性质的影响,获取具有优良酶学性质的融合酶。采用重迭PCR技术扩增融合酶基因Auman5A-F-cbm~27和Auman5A-R-cbm~27,分别将Auman5A和融合酶基因在毕赤酵母GS115中进行表达,分析表达产物reAuMan5A、reAuMan5A-F-C和reAuMan5A-R-C的酶学性质。结果表明:该3种β-甘露聚糖酶对角豆胶的K_m值分别为1.7、1.9和0.9 mg/mL。3种酶的最适温度T_(opt)分别为70、65和70℃;reAuMan5A-F-C和reAuMan5A-R-C在70℃的半衰期t_(1/2)~(70)分别为36 min和124 min,较reAuMan5A的(t_(1/2)~(70)=9 min)延长了3倍和12.8倍。reAuMan5A-R-C具有底物亲和力强、热稳定性高和pH稳定范围广等特点,在食品、饲料、医药和能源等领域有着巨大的应用潜力。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
连接肽论文参考文献
[1].赵伟欣,刘松,刘立明,陈坚,堵国成.自组装双亲短肽氨基酸组成及连接肽对其融合酶表达量的影响[J].食品与发酵工业.2017
[2].王春娟,唐诗涵,邬敏辰,董运海,杭宜岭.不同类型连接肽对β-甘露聚糖酶AuMan5A酶学性质的影响[J].食品与生物技术学报.2017
[3].Jawad,Ullah.连接肽对枯草杆菌芽孢衣壳蛋白B表面展示海栖热袍菌脂肪酶Tm1350的影响[D].江苏大学.2017
[4].王春娟.β-甘露聚糖酶与27家族CBM的融合及连接肽的优化[D].江南大学.2016
[5].蔡晓娜.不同连接肽的TRAIL-Fc融合蛋白在E.coli中的重组表达及其活性研究[D].重庆理工大学.2014
[6].李堰忠,杨旭中,吕强,王富军,赵健.一种人源性穿膜肽融合蛋白中连接肽的引入及其在HeLa细胞中的穿膜活性[J].江西农业大学学报.2013
[7].张立超,李军明,葛高顺,孔令岭,胡学军.连接肽对融合蛋白ELP[I]_(30)-linker-eGFP相变的影响[J].生命科学研究.2013
[8].沈维强.连接肽对双功能融合蛋白于药动学及药效学之影响[C].2013第六届国际蛋白质和多肽大会论文集.2013
[9].张鹏,李明谦,郝林琳,官员,房希碧.猪干扰素α1与胸腺肽α1融合蛋白连接肽的初步筛选[J].畜牧与兽医.2012
[10].张鹏,李明谦,郝林琳,官员,房希碧.猪干扰素α1与胸腺肽α1融合蛋白连接肽的初步筛选[C].全国动物生理生化第十二次学术交流会论文摘要汇编.2012
论文知识图
