导读:本文包含了原毒素论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:毒素,杆菌,棉铃虫,蛋白,晶体,杀虫,芽孢。
原毒素论文文献综述
陆秀青[1]（2016）在《苏云金芽胞杆菌Cry1类原毒素C端区域的功能研究》一文中研究指出苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis,简称Bt)是当前世界上应用最为广泛的微生物杀虫剂,其杀虫活性主要来源于伴胞晶体。有研究表明,苏云金芽胞杆菌Cry1类原毒素C端区域对于Bt杀虫晶体的形成具有重要作用,研究原毒素C端区域的功能,对提高杀虫晶体蛋白的产量,增强Bt杀虫晶体蛋白的溶解性及杀虫毒力具有重要意义。有研究表明,在昆虫中肠道的碱性环境中,Cry1Ac菱形晶体的溶解能力明显高于Cry2Aa方形晶体。为了增强Cry2Aa原毒素的溶解能力,本研究利用Cry2Aa原毒素的N-端与Cry1Ac的C-端区域构建了融合蛋白,分析融合蛋白的表达情况及杀虫毒力。从Bt4.0718高毒力菌株中分别扩增cry1Ac和cry2Aa基因,利用Red/ET同源重组技术构建cry2Aa与cry1Ac的C-端区域编码序列形成的融合基因,将含该融合基因的表达载体转化至Bt无晶体突变株XBU001中。对重组菌株进行相差显微镜和扫描电镜观察,并对表达产物进行SDS-PAGE分析和质谱鉴定。进一步对融合蛋白的碱溶性、胰酶激活特性及对棉铃虫(Helicoverpa armigera)的毒力进行分析测定。结果表明,重组菌株能产生不定形的伴胞晶体并表达130 kDa的融合蛋白。在pH 10.5的环境下,融合晶体蛋白和Cry1Ac晶体蛋白均可溶解出80%的原毒素,而Cry2Aa晶体蛋白只能溶解出10%的原毒素,且融合蛋白能够被胰蛋白酶正常激活。此外,当Cry1Ac/Cry2Aa晶体蛋白按不同的比例组合时,对棉铃虫的毒力显示出增强效果,而Cry1Ac/Cry2Aa-1Ac则具有明显的协同活性。由此我们得出结论,Cry1Ac原毒素的C-端区域能够增强Cry2Aa晶体的溶解性及其在昆虫中肠道的毒力。130～140 kDa的Cry1类原毒素非毒性C-端区域中富含半胱氨酸(Cys)残基,研究者普遍认为这些Cys残基对原毒素组装形成晶体具有重要作用。本研究前期基础已成功构建有HD73菌株的cry1Ac基因C-端区域14个Cys单点突变以及逐一迭加突变的Bt菌株。为了更深入研究非毒性区域Cys残基的功能,对所有突变菌株进行扫描电镜观察,发现所有突变菌株依然能形成典型的菱形晶体。对野生Cry1Ac蛋白及C-端Cys残基全部突变的Cry1Ac蛋白溶解性和胰酶稳定性分析发现,C-端全部突变的Cry1Ac蛋白在pH 7.5时就可少量的溶解,而野生的Cry1Ac蛋白要在pH 9.5时才能溶解,说明突变后提高了 Cry1Ac蛋白在偏中性pH值中的溶解度,同时还发现突变型晶体蛋白对胰蛋白酶更加敏感,容易在短时间内降解成毒性片段。研究野生Cry1Ac和C-端全部突变的Cry1Ac晶体蛋白对枞色卷蛾中肠细胞系CF203/2.5活性和细胞增殖影响,将两种晶体蛋白毒素以不同浓度梯度作用CF203/2.5细胞48h后,通过倒置显微镜观察发现,与对照相比,两种毒素对细胞都具有毒性,可以发现细胞聚集成团,细胞生长受到抑制、数量变少,形成很多细胞碎片。同时,利用MTT实验来检测蛋白对CF203/2.5细胞增殖的影响。结果显示,随着两种蛋白浓度的提高,细胞毒性也逐渐增强,呈现浓度依赖性,野生Cry1Ac和C-端全部突变的Cry1Ac蛋白浓度为54 μg/mL时,死亡率分别是69%、82%,说明突变后毒性有明显的提高。综上,我们得出这样的一个结论:Cry1Ac的C-端对晶体形成具有重要作用,但是不一定依赖于Cys残基,这与以前的报道不同。本论文的研究有助于阐明Cry1类原毒素C端非毒性区域的功能,对构建苏云金芽胞杆菌高效杀虫工程菌提供理论依据。(本文来源于《湖南师范大学》期刊2016-05-01）
王硕[2]（2015）在《棉铃虫幼虫中肠蛋白酶对Cry2Aa和Cry2Ab原毒素活化位点的鉴定及蛋白酶活性检测》一文中研究指出苏云金芽抱杆菌Bacillusthuringiensis是土壤中的一种革兰氏阳性细菌,在其芽抱形成期产生具有杀虫特性的伴抱晶体,即6内毒素。Bt制剂作为一种对人畜安全、无环境污染的微生物杀虫剂,在农林及卫生害虫的防治中发挥了重要作用;自1996年转Bt基因抗虫作物商业化种植以来,Bt的使用范围、效果和效益得到进一步拓展和提升。棉铃虫Hellicoverpa armigera(Huibner)属鳞翅目夜蛾科,是棉花等多种作物上的重要害虫,我国自1997年开始种植转Bt基因抗虫棉(简称Bt棉)以控制棉铃虫的危害。Bt棉的大面积种植不仅减轻了棉铃虫对多种寄主作物的危害,同时也大量减少了化学农药的使用,Bt棉的推广种植创造了显着的经济效益和良好的生态效益。Cry2Aa因同时具有对鳞翅目和双翅目昆虫较高的毒杀活性,是Cry毒素蛋白中较特殊的一类。它比广泛应用于农业生产的Cry1A类毒素有更广的鳞翅目昆虫毒杀谱,且与Cry1A的交互抗性水平较低。同时转入Cry1Ac和Cry2Ab毒素基因的双价Bt棉如今已广泛种植,由于两种毒素的氨基酸序列差异大,在昆虫中肠上有不同的受体,因此靶标害虫不容易对双价Bt棉产生抗性。关于Cry1A毒素的活化、作用机制和抗性机理,已有大量的研究和报道,而对Cry2A毒素相关内容的研究则较少。Cry2Aa和Cry2Ab原毒素均具有633个氨基酸,其N端的一部分序列被切除后才能转化成为活化毒素。本文系统研究并比较了 Cry2Aa和Cry2Ab在棉铃虫中肠液作用下的消解动态及酶切位点,为建立棉铃虫中肠液对Cry2Aa和Cry2Ab原毒素活化能力的定量检测方法提供了重要基础。同时,研究了本实验室建立的棉铃虫Cry2Ab抗性品系(An2Ab)和敏感品系(AY)幼虫中肠蛋白酶对Cry2Aa和Cry2Ab原毒素的活化降解过程以及中肠蛋白酶活性,均没有发现显着差异,从而表明了棉铃虫中肠蛋白酶未参与An2Ab抗性品系对Cry2Ab抗性的形成。1.棉铃虫中肠液对Cry2Aa和Cry2Ab原毒素活化位点的鉴定丝氨酸蛋白酶类是鳞翅目昆虫碱性的中肠环境中主要的消化酶,包含胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等,在Bt原毒素的活化及活化毒素降解过程中发挥重要作用。生物测定结果显示Cry2Ab对棉铃虫的毒力略高于Cry2Aa。通过SDS-PAGE分析、Cry2Aa和Cry2Ab活化毒素的N端氨基酸测序,发现Cry2Aa和Cry2Ab毒素具有不同的活化位点。Cry2Aa原毒素N端被切除49个氨基酸后转化为活化毒素,Cry2Ab原毒素N端切除139个氨基酸后转化为活化毒素;根据蛋白酶切除位点前一个氨基酸推测,Cry2Aa原毒素的活化主要由胰凝乳蛋白酶完成,而Cry2Ab原毒素的活化则主要由胰蛋白酶承担。2.棉铃虫Cry2Ab抗性和敏感品系幼虫中肠蛋白酶活性的比较作为鳞翅目昆虫中肠主要的消化酶,丝氨酸蛋白酶性质和活性的改变通过影响Bt原毒素的溶解活化及活化毒素的降解过程而与Bt抗性的产生密切相关。本实验室建立的棉铃虫An2Ab抗性品系对Cry2Ab原毒素具有140倍抗性,为了明确中肠蛋白酶是否参与Cry2Ab抗性的形成,本文开展了以下研究:比较了 Cry2Ab抗性、敏感品系棉铃虫中肠总丝氨酸蛋白酶、胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶活性,发现两品系蛋白酶活性差异不显着;SDS-PAGE分析棉铃虫中肠液对Cry2Aa和Cry2Ab原毒素的活化及活化毒素的降解过程,发现棉铃虫抗性品系中肠液对两种毒素的水解过程均略快于敏感品系,但差异不显着;通过Native-PAGE酶谱分析棉铃虫抗性、敏感品系中肠蛋白酶,发现两品系酶谱无显着差异。上述结果表明,棉铃虫An2Ab抗性品系幼虫中肠蛋白酶对Cry2Ab原毒素的活化和降解未产生明显改变,与Cry2Ab抗性的形成关系不大。(本文来源于《南京农业大学》期刊2015-06-01）
杜冰[3]（2014）在《棉铃虫钙粘蛋白基因r_1突变对Cry1Ac毒素和原毒素抗性水平及对精子竞争的影响》一文中研究指出表达Bt毒素CrylAc的Bt棉花在我国的推广种植有效地控制了棉铃虫的为害,减少了化学农药的使用,降低了生产成本。Bt棉在其整个生长期内持续表达Bt毒素,靶标害虫棉铃虫长期处于Bt选择压下必将导致其对Bt毒素产生抗性,棉铃虫是否产生抗性将直接影响Bt棉的使用寿命。研究棉铃虫Bt抗性的机理及其对适合度的影响,对于开发早期抗性检测技术、预测抗性进化方向和速度具有重要意义。室内筛选的SCD-rl品系为钙粘蛋白突变(r1)品系,本文利用Cry1Ac原毒素对SCD-r1品系进行连续10代的筛选,比较了筛选前后该品系毒素和原毒素抗性水平的差异,以及中肠蛋白酶活性、中肠酶液对原毒素的降解差异。为了明确钙粘蛋白缺失突变是否会引起SCD-r1品系繁殖力方面的适合度代价,利用分子标记对不同杂交组合的后代进行鉴定,分析了野生型钙粘蛋白基因(s)和突变基因(r1)对精子竞争的影响。本文的研究结果对于明确Cry1Ac毒素与钙粘蛋白的互作、了解基于钙粘蛋白基因突变的Bt抗性的进化规律具有重要的意义。1.棉铃虫SCD-r1品系对Cry1Ac毒素和活化毒素抗性的差异棉铃虫SCD-r1品系为钙粘蛋白缺失突变品系,对Cry1Ac活化毒素具有422的抗性,对Cry1Ac原毒素只有22倍左右的抗性,两者抗性水平相差19倍。用Cry1Ac原毒素对SCD-r1品系连续筛选10代,其对原毒素抗性上升至69倍,对活化毒素的抗性上升至618倍,两者抗性水平的差异下降至9倍。为了探究SCD-r1抗性品系对Cry1Ac原毒素和活化毒素抗性水平差异的可能原因,比较了SCD-r1品系及其筛选品系和SCD敏感品系叁者之间中肠蛋白酶活性及对原毒素活化的差异。3个品系中SCD-r1品系胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶活力均高于SCD品系和SCD-r1筛选品系,但叁者之间差异小于2倍；3个品系总蛋白酶活性相近,无显着差异；因此,各品系中肠蛋白酶活性与Cry1Ac原毒素和活化毒素的抗性水平没有相关性。在离体条件下比较了3个品系中肠酶液对Cry1Ac原毒素降解的差异。结果显示,SCD-r1筛选品系和SCD品系中肠酶液对原毒素的活化速率略低于SCD-r1品系,但叁者的中肠蛋白酶均能把原毒素活化为大小相同的活化毒素,延长作用时间均未发现活化毒素的进一步降解；该结果表明中肠蛋白酶对Cry1Ac的活化、降解与SCD-r1品系及SCD-r1筛选品系对Cry1Ac原毒素与活化毒素抗性水平差异的关系不大。因此推断,棉铃虫SCD-r1品系对Cry1Ac毒素和活化毒素抗性水平差异的主要原因在于两种毒素与中肠受体的差异性互作。2.棉铃虫钙粘蛋白突变对精子竞争的影响钙粘蛋白是一种细胞“粘结剂”,对维持细胞结构完整起着重要作用,并参与细胞识别,信号传递等多种生理功能,已有报道指出,钙粘蛋白突变会导致昆虫Bt抗性品系的适合度下降。本实验所用的SCD-r1抗性品系是由钙粘蛋白突变引起的,推测钙粘蛋白缺失可能会引起棉铃虫发育繁殖等方面的适合度代价。本文以两部分的实验研究钙粘蛋白缺失突变对棉铃虫精子竞争的影响：1.源自两头不同基因型(rr型、ss型)的雄虫之间的父权竞争。2.源自同一杂合雄虫(rs)的r型和s型两种基因型精子之间的精子竞争。结果显示：两头不同的雄虫竞争同一雌虫时,最终只有其中一头雄虫决定了全部的子代基因型,父权竞争结果并不受交配次序影响,父权竞争结果主要受雌虫基因型影响,更倾向于选择异基因型雄虫的精子。来源于同一雄虫的两类精子r型、s型与一头纯合的雌虫交配时,后代中两种基因型比例并不全都是1：1,在与rr型雌虫交配时,s型精子有着明显的竞争优势。这些结果均显示,与Cry1Ac抗性相关的钙粘蛋白缺失突变对雄虫父权有显着的影响,雄虫父权最终结果取决于雌雄个体双方基因型的共同作用。(本文来源于《南京农业大学》期刊2014-06-01）
余杰,韦宏伟,李香香,畅红,苏建亚[4]（2008）在《苏云金芽孢杆菌Cry1Ac原毒素、毒素制备及其对棉铃虫的毒力测定》一文中研究指出对提取苏云金芽孢杆菌Cry1Ac原毒素与活化毒素的制备方法进行了改进,经牛胰蛋白酶作用后用等电点沉淀法和纯化法获得毒素。对样品进行SDS-PAGE分析,并测定其对棉铃虫初孵幼虫的毒力。结果表明制备的Cry1Ac原毒素和毒素降解较少,杀虫活性高。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2008年05期）
夏立秋,付祖娇,丁学知,孙运军[5]（2008）在《苏云金芽胞杆菌4.0718新菌株功能基因组的研究及其原毒素表达谱的质谱鉴定新方法》一文中研究指出苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)4.0718新菌株已成功用于商业化生产。该菌株在芽胞形成的同时能够产生菱形和方形两种晶体,对棉铃虫(Helicoverpa armigera)等农业害虫表现出高效杀虫活性。本研究系统分析了Bt 4.0718菌株的杀虫基因型及表型,包括质粒带型、杀虫基因类型和晶体蛋白类型的研究。4.0718菌株在质粒带型和蛋白带型上是一个独特的菌株。发现该菌株含有5种cry(本文来源于《中国微生物学会《第二届全国农业微生物研究及产业化研讨会》和《第十一届全国杀虫微生物学术研讨会》暨《湖北省暨武汉市微生物学会和内蒙古微生物学会2008年会》论文摘要》期刊2008-06-01）
周学永,高建保,喻子牛[6]（2008）在《高岭土和蛭石对Bt WG-001原毒素杀虫活性及构象影响研究》一文中研究指出Bt WG-001菌粉经碱溶法提取130 kDa原毒素,高岭土和蛭石采用离心沉降法制备粒径<200 nm的矿物粉体。在pH7-9条件下,Bt WG-001原毒素与矿物颗粒发生吸附,离心除去上清液得到矿物-原毒素吸附复合物。采用棉铃虫为供试昆虫,测定原毒素、吸附态原毒素的杀虫活性;将原毒素与吸附态原毒素在30W紫外灯(距离50cm)下照(本文来源于《中国微生物学会《第二届全国农业微生物研究及产业化研讨会》和《第十一届全国杀虫微生物学术研讨会》暨《湖北省暨武汉市微生物学会和内蒙古微生物学会2008年会》论文摘要》期刊2008-06-01）
周学永,陈守文,吴新世,黄巧云[7]（2006）在《苏云金芽胞杆菌原毒素在蒙脱石上的吸附特性研究》一文中研究指出采用河南信阳产钠型蒙脱石为实验材料,研究了苏云金芽胞杆菌(Bt)工程菌株WG-001原毒素蛋白(130kDa)在粒径为0～0.2μm和0～2μm的蒙脱石上的吸附特性。结果表明,蒙脱石在碳酸盐缓冲体系(pH9)对Bt原毒素蛋白的等温吸附曲线符合Langmuir方程(r2>0.99),当原毒素与蒙脱石的质量比例相同时,蒙脱石的平均粒径越小,单位质量吸附量越高。在磷酸盐体系(pH6～8)pH7时单位质量吸附量最大,在碳酸盐体系(pH9～11)单位质量吸附量随pH的增加而下降。Bt原毒素在蒙脱石上的吸附0.5～1.0h就能达到平衡。随着蒙脱石质量比例的增加,蒙脱石对原毒素的单位质量吸附量减小,但吸附百分率增加。在10℃～50℃范围内,温度对单位质量吸附量影响不大。透射电镜分析表明,吸附原毒素前后蒙脱石的粒径没有明显改变。XRD分析证实,吸附原毒素后蒙脱石层间距没有发生变化。(本文来源于《农业环境科学学报》期刊2006年04期）
周学永,陈守文,孙宇,梁宝臣[8]（2006）在《由苏云金芽胞杆菌胞晶混合物直接提取原毒素的方法》一文中研究指出采用室内实验技术,研究了直接从苏云金芽胞杆菌胞晶混合物提取原毒素的方法。胞晶混合物依次用0.5mol·L-1NaCl和无菌去离子水洗涤3次,洗涤后的沉淀物用0.05mol·L-1NaOH+0.1mmol·L-1PMSF溶液溶解10min,10000r·min-1离心15min去除不溶物。上清液以25%乙酸调至pH4.4,得原毒素蛋白沉淀,冷冻干燥。SDS-PAGE电泳扫描结果表明,原毒素分子量为130kDa,在提取过程中没有发生降解。该提取方法具有操作简便、成本低、效率高等优点。(本文来源于《农业环境科学学报》期刊2006年02期）
夏立秋,邹先琼,莫湘涛[9]（2001）在《苏云金杆菌4.0718菌株杀虫晶体65kD原毒素的质谱分析》一文中研究指出以苏云金杆菌 4.0 718菌株杀虫晶体 6 5kD原毒素为材料 ,探索了从SDS -PAGE胶上回收蛋白质进行质谱分析的方法。蛋白纯化的步骤包括SDS -PAGE、电洗脱、脱盐、除SDS。电洗脱采用半透膜法 ,用超滤法脱盐 ,冷丙酮沉淀法除去SDS。结果表明 ,纯化的 6 5kD原毒素经ESI -MS检测 ,分子量约 6 45 0 0Da。经MALDI-MS检测 ,未能有明显蛋白峰出现 ,这可能是该蛋白由于较强的疏水作用 ,溶解性差 ,在与基质混合时处于聚和悬浮态所致。(本文来源于《激光生物学报》期刊2001年04期）
原毒素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
苏云金芽抱杆菌Bacillusthuringiensis是土壤中的一种革兰氏阳性细菌,在其芽抱形成期产生具有杀虫特性的伴抱晶体,即6内毒素。Bt制剂作为一种对人畜安全、无环境污染的微生物杀虫剂,在农林及卫生害虫的防治中发挥了重要作用;自1996年转Bt基因抗虫作物商业化种植以来,Bt的使用范围、效果和效益得到进一步拓展和提升。棉铃虫Hellicoverpa armigera(Huibner)属鳞翅目夜蛾科,是棉花等多种作物上的重要害虫,我国自1997年开始种植转Bt基因抗虫棉(简称Bt棉)以控制棉铃虫的危害。Bt棉的大面积种植不仅减轻了棉铃虫对多种寄主作物的危害,同时也大量减少了化学农药的使用,Bt棉的推广种植创造了显着的经济效益和良好的生态效益。Cry2Aa因同时具有对鳞翅目和双翅目昆虫较高的毒杀活性,是Cry毒素蛋白中较特殊的一类。它比广泛应用于农业生产的Cry1A类毒素有更广的鳞翅目昆虫毒杀谱,且与Cry1A的交互抗性水平较低。同时转入Cry1Ac和Cry2Ab毒素基因的双价Bt棉如今已广泛种植,由于两种毒素的氨基酸序列差异大,在昆虫中肠上有不同的受体,因此靶标害虫不容易对双价Bt棉产生抗性。关于Cry1A毒素的活化、作用机制和抗性机理,已有大量的研究和报道,而对Cry2A毒素相关内容的研究则较少。Cry2Aa和Cry2Ab原毒素均具有633个氨基酸,其N端的一部分序列被切除后才能转化成为活化毒素。本文系统研究并比较了 Cry2Aa和Cry2Ab在棉铃虫中肠液作用下的消解动态及酶切位点,为建立棉铃虫中肠液对Cry2Aa和Cry2Ab原毒素活化能力的定量检测方法提供了重要基础。同时,研究了本实验室建立的棉铃虫Cry2Ab抗性品系(An2Ab)和敏感品系(AY)幼虫中肠蛋白酶对Cry2Aa和Cry2Ab原毒素的活化降解过程以及中肠蛋白酶活性,均没有发现显着差异,从而表明了棉铃虫中肠蛋白酶未参与An2Ab抗性品系对Cry2Ab抗性的形成。1.棉铃虫中肠液对Cry2Aa和Cry2Ab原毒素活化位点的鉴定丝氨酸蛋白酶类是鳞翅目昆虫碱性的中肠环境中主要的消化酶,包含胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等,在Bt原毒素的活化及活化毒素降解过程中发挥重要作用。生物测定结果显示Cry2Ab对棉铃虫的毒力略高于Cry2Aa。通过SDS-PAGE分析、Cry2Aa和Cry2Ab活化毒素的N端氨基酸测序,发现Cry2Aa和Cry2Ab毒素具有不同的活化位点。Cry2Aa原毒素N端被切除49个氨基酸后转化为活化毒素,Cry2Ab原毒素N端切除139个氨基酸后转化为活化毒素;根据蛋白酶切除位点前一个氨基酸推测,Cry2Aa原毒素的活化主要由胰凝乳蛋白酶完成,而Cry2Ab原毒素的活化则主要由胰蛋白酶承担。2.棉铃虫Cry2Ab抗性和敏感品系幼虫中肠蛋白酶活性的比较作为鳞翅目昆虫中肠主要的消化酶,丝氨酸蛋白酶性质和活性的改变通过影响Bt原毒素的溶解活化及活化毒素的降解过程而与Bt抗性的产生密切相关。本实验室建立的棉铃虫An2Ab抗性品系对Cry2Ab原毒素具有140倍抗性,为了明确中肠蛋白酶是否参与Cry2Ab抗性的形成,本文开展了以下研究:比较了 Cry2Ab抗性、敏感品系棉铃虫中肠总丝氨酸蛋白酶、胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶活性,发现两品系蛋白酶活性差异不显着;SDS-PAGE分析棉铃虫中肠液对Cry2Aa和Cry2Ab原毒素的活化及活化毒素的降解过程,发现棉铃虫抗性品系中肠液对两种毒素的水解过程均略快于敏感品系,但差异不显着;通过Native-PAGE酶谱分析棉铃虫抗性、敏感品系中肠蛋白酶,发现两品系酶谱无显着差异。上述结果表明,棉铃虫An2Ab抗性品系幼虫中肠蛋白酶对Cry2Ab原毒素的活化和降解未产生明显改变,与Cry2Ab抗性的形成关系不大。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
原毒素论文参考文献
[1].陆秀青.苏云金芽胞杆菌Cry1类原毒素C端区域的功能研究[D].湖南师范大学.2016
[2].王硕.棉铃虫幼虫中肠蛋白酶对Cry2Aa和Cry2Ab原毒素活化位点的鉴定及蛋白酶活性检测[D].南京农业大学.2015
[3].杜冰.棉铃虫钙粘蛋白基因r_1突变对Cry1Ac毒素和原毒素抗性水平及对精子竞争的影响[D].南京农业大学.2014
[4].余杰,韦宏伟,李香香,畅红,苏建亚.苏云金芽孢杆菌Cry1Ac原毒素、毒素制备及其对棉铃虫的毒力测定[J].江苏农业科学.2008
[5].夏立秋,付祖娇,丁学知,孙运军.苏云金芽胞杆菌4.0718新菌株功能基因组的研究及其原毒素表达谱的质谱鉴定新方法[C].中国微生物学会《第二届全国农业微生物研究及产业化研讨会》和《第十一届全国杀虫微生物学术研讨会》暨《湖北省暨武汉市微生物学会和内蒙古微生物学会2008年会》论文摘要.2008
[6].周学永,高建保,喻子牛.高岭土和蛭石对BtWG-001原毒素杀虫活性及构象影响研究[C].中国微生物学会《第二届全国农业微生物研究及产业化研讨会》和《第十一届全国杀虫微生物学术研讨会》暨《湖北省暨武汉市微生物学会和内蒙古微生物学会2008年会》论文摘要.2008
[7].周学永,陈守文,吴新世,黄巧云.苏云金芽胞杆菌原毒素在蒙脱石上的吸附特性研究[J].农业环境科学学报.2006
[8].周学永,陈守文,孙宇,梁宝臣.由苏云金芽胞杆菌胞晶混合物直接提取原毒素的方法[J].农业环境科学学报.2006
[9].夏立秋,邹先琼,莫湘涛.苏云金杆菌4.0718菌株杀虫晶体65kD原毒素的质谱分析[J].激光生物学报.2001
论文知识图
