导读:本文包含了减毒沙门氏菌论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:沙门氏菌,基因,免疫,旋毛虫,菌株,奇特,分枝。
减毒沙门氏菌论文文献综述
蒋如如,李欣,李洁,哈小琴[1]（2019）在《减毒沙门氏菌在抗肿瘤治疗中的应用》一文中研究指出目前用于肿瘤治疗的细菌已逐渐发展为肿瘤治疗的潜在策略,这主要是由于细菌菌株的发展保持了良好的抗肿瘤功效,同时也具有低毒的特性。细菌介导的肿瘤治疗依赖于兼性厌氧菌,这些厌氧菌可以在氧化良好或贫氧区域存活,可靶向肿瘤。其中,减毒沙门氏菌作为基因递送载体、抗肿瘤免疫激活剂和肿瘤细胞死亡诱导剂,可通过改善宿主免疫环境、降低吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达以及调节肿瘤细胞的自噬与凋亡发挥内在抗肿瘤活性。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2019年09期）
唐弘[2]（2019）在《携带Lipocalin 2基因重组减毒沙门氏菌的构建及其对分枝杆菌生长影响的研究》一文中研究指出目的:1.构建和鉴定脂质运载蛋白2(Lipocalin 2,Lcn2)基因重组减毒沙门氏菌。2.探讨携带Lipocalin 2的减毒沙门氏菌对分枝杆菌生长的影响。方法:1.以巨噬细胞RAW264.7提取RNA逆转录为c DNA为模版,采用PCR法扩增Lcn2基因,定向克隆到质粒p Bud CE4.1-orim的多克隆位点中,构建重组质粒p Bud CE4.1-orim-Lcn2;将重组质粒p Bud CE4.1-orim-Lcn2转染RAW264.7细胞,用RT-q PCR法检测Lcn2的m RNA表达。2.将重组质粒转入减毒沙门氏菌SL7207得到重组菌株SL7207-p Bud CE4.1-orim-Lcn2;重组菌感染RAW264.7细胞,用Western blot检测Lcn2的蛋白表达,RT-q PCR法检测Lcn2的m RNA表达;7H10平板上通过菌落计数观察重组菌对感染RAW264.7细胞的BCG生存的影响。3.用重组菌以灌胃的方式感染BALB/c小鼠后,检测脾组织中Lcn2表达,血清中IFN-γ和IL12的水平。4.建立BCG小鼠感染模型,以重组菌治疗后通过肺组织荷菌量和肺组织病理变化观察其对分枝杆菌生长的影响。结果:1.成功构建Lipocalin 2基因重组质粒,经双酶切及基因测序鉴定正确。重组质粒转染RAW264.7后用RT-q PCR法检测Lcn2的m RNA表达升高(P=0.000,F=22570)。2.成功构建重组菌株SL7207-p Bud CE4.1-orim-Lcn2,经PCR鉴定正确。重组菌感染RAW264.7细胞Lcn2的蛋白表达量较对照组增加(P=0.000)。RT-q PCR法检测重组菌m RNA表达较对照组明显升高(P=0.000,F=5.281)。7H10平板上重组菌组BCG数量与空载菌组相比明显减少(P=0.000,F=11.41)3.重组菌组与空载对照菌组相比小鼠脾组织Lcn2表达升高(P=0.000,F=4.449),重组菌组与生理盐水组相比血清IFN-γ升高(P=0.004,F=15.27),IL12未见明显差异(P>0.05,F=2.26)。4.空载菌组、重组菌组小鼠肺荷菌量分别为6.27±0.33log10、6.21±0.29log10。空载菌组与重组菌组肺荷菌量比较无统计学差异(P>0.05,F=1.30)。空载菌组、重组菌组肺组织病理变化未见明显差异。结论:1.成功构建了携带Lcn2基因的重组减毒沙门菌。2.重组菌感染RAW264.7细胞后Lcn2的表达增加,对感染RAW264.7的BCG存活起到一定的抑制作用。3.重组菌以灌胃的方式感染小鼠后,小鼠脾组织Lcn2表达增加,血清IFN-γ含量增加,血清IL-12含量未见明显变化,提示小鼠免疫状态有利于结核病转归。4.重组菌治疗BCG感染小鼠后,小鼠肺部BCG荷菌量与对照组无明显差异,肺部病理变化无明显差异。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
冯雨晨,刘深圳,郭蒙蒙,贾慧婕,刘可欣[3]（2018）在《硝呋奇特联合运载IDO2-siRNA减毒沙门氏菌抗黑色素瘤作用及机制研究》一文中研究指出研究背景及目的 :黑色素瘤作为临床上一种恶性程度极高的皮肤肿瘤,对人类健康造成了很大的影响。目前治疗方法有限,无法有效的根治黑色素瘤。硝呋奇特是一种治疗肠道性溃疡的药物,现被证实可以抑制肿瘤。IDO是催化色氨酸沿犬尿氨酸途径分解代谢第一步的限速酶,其过度表达能够通过一系列机制阻止效应性T细胞的激活,抑制其抗肿瘤免疫反应。因此,抑制IDO的活性可以增强机体的抗肿瘤免疫反应。在本项目中,我们前期设计了针对IDO2的siRNA,已经证明其具有良好的干扰作用。我们团队前期发现减毒沙门氏菌能够有效地运载siRNA到达肿瘤部位,因此,我们的研究目的是探索减毒沙门氏菌运载自主构建的IDO2特异性siRNA质粒对于小鼠黑色素瘤的治疗作用,为临床上开发新的黑色素瘤治疗手段提供一定的实验及理论依据。材料及方法 :在体外,采用Western blot、MTT及划痕实验等方法研究硝夫奇特对黑色素瘤细胞的影响;在小鼠体内,采用流式、免疫组化、Western blot、Elisa等方法研究硝呋奇特联合运载IDO2-siRNA减毒沙门氏菌对于黑色素瘤小鼠模型的作用。结果 :1)与对照组相比,硝呋奇特作用于黑色素瘤细胞24小时、48小时后具有显着的杀伤作用,能够明显的抑制细胞的迁移,减少迁移相关蛋白MMP-2的表达,增加了凋亡相关蛋白Caspase-3的表达; 2)在动物模型中,相比模型组、scramble组、硝呋奇特组及IDO2组,减毒沙门氏菌运载IDO2-siRNA联合硝夫奇特能够显着延长荷瘤小鼠的生存期,抑制黑色素瘤的生长及迁移相关蛋白MMP2的表达。更重要的是,联合应用显着增强了黑色素瘤组织及脾脏中CD8+T淋巴细胞的浸润,抑制了肿瘤组织中IDO2的表达,增加了小鼠血清中IFN-γ的水平,降低了TGF-β的含量。结论 :与单独应用硝呋奇特和IDO2-siRNA相比,联合应用硝呋奇特及IDO2-siRNA更能够有效的抑制小鼠黑色素瘤的生长,提高了小鼠抗黑色素瘤的免疫反应。(本文来源于《第十叁届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2018-11-07）
郭蒙蒙,冯雨晨,黄文帅,张强,贾慧婕[4]（2018）在《减毒沙门氏菌运载IDO2-siRNA增强肝细胞原位癌小鼠的抗肿瘤作用》一文中研究指出研究背景及目的 :肝细胞癌做为临床上一种恶性程度极高的肿瘤,目前尚无非常有效的治疗方段。研究表明,IDO在肝细胞癌组织中高表达,显着抑制了机体的抗肿瘤免疫,已经成为了肝细胞癌治疗的一个靶点。IDO是一种具有免疫抑制作用的色氨酸犬尿氨酸代谢途径的限速酶,能够通过降解局部组织中的色氨酸,从而抑制T细胞免疫和抗肿瘤免疫。近年研究发现IDO包括IDO1和IDO2。IDO-2主要表达在肾脏、肝脏和生殖系统组织上,同时也在DC上检测到。目前已经证明IDO2与肝细胞的进展具有一定的关系。在本项目中,我们前期设计了针对IDO2的siRNA,已经证明其具有良好的干扰作用。我们团队前期发现减毒沙门氏菌能够有效地运载siRNA到达肿瘤部位因此,因此,我们的研究目的是探索减毒沙门氏菌运载自主构建的IDO2特异性siRNA质粒对于小鼠原位肝细胞癌的治疗作用,为临床上开发新的肝细胞癌治疗手段提供一定的实验及理论依据。材料及方法:建立小鼠肝原位癌模型后第8天将小鼠随机分为3组,模型组、Scramble组、IDO2-siRNA组。减毒沙门氏菌每周注射1次,共2次。最后一次注射后7天处死小鼠。采用流式、免疫组化、Western blot、Elisa等方法研究减毒沙门氏菌运载IDO2-siRNA对于小鼠肝原位癌模型的治疗作用。结果 :结果显示,与模型组、Scramble组相比,IDO2-siRNA组显着抑制了肿瘤组织中IDO2的表达,延长了荷瘤小鼠的生存期,抑制了肝细胞癌的生长以及迁移相关蛋白MMP2的表达。更重要的是,减毒沙门氏菌运载IDO2-siRNA组显着地增强了肝细胞癌组织及脾脏中CD8+T淋巴细胞及的浸润及表达,抑制了Treg细胞的表达,增加了小鼠血清中IFN-γ的水平,降低了TGF-β的水平。结论 :减毒沙门氏菌运载IDO2-siRNA能够有效的抑制小鼠原位肝细胞癌的生长,提高了小鼠抗肝细胞癌的免疫应答,为临床上开发新的肝细胞癌治疗手段提供一定的实验及理论依据。(本文来源于《第十叁届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2018-11-07）
郭婧,刘笑铭,杨云帆,赵铁锁[5]（2018）在《Nifuroxazide联合减毒沙门氏菌运载PD1-siRNA抗黑色素瘤作用研究》一文中研究指出研究背景:黑色素瘤作为一种恶性程度极高的皮肤肿瘤,对人类健康造成了很大影响。随着免疫学发展,针对免疫检查点PD1的单克隆抗体已经证明能够有效地治疗黑色素瘤。目前的单克隆抗体主要是从蛋白水平上抑制PD1通路,而信号通路的抑制也可以直接干扰其基因的表达。因此,我们设想利用RNAi技术实现对PD1通路的抑制,从而提高机体的抗肿瘤免疫反应。我们前期发现减毒沙门氏菌运载PD1干扰序列能够有效到达黑色素肿瘤组织,抑制肿瘤中PD1表达。与此同时,单一疗法的有限治疗效果使得联合治疗受到了学者们越来越多的关注。研究表明,抑制Stat3表达能够显着降低黑色素瘤细胞中PD-L1的表达。Nifuroxazide做为一种抗肠道细菌药物,已经被证明能够抑制Stat3的激活,进而抑制PD-L1的表达。研究目的 :探索Nifuroxazide联合减毒沙门氏菌运载PD1-siRNA对小鼠黑色素瘤的治疗作用,为临床上开发新的黑色素瘤治疗手段提供一定的实验及理论依据。研究方法 :建立小鼠黑色素瘤模型后第7天将小鼠分为模型组、Scramble组、Nifuroxazide组、PD1-siRNA组及Nifuroxazide联合PD1-siRNA组。Nifuroxazide以200μg/只的剂量腹腔注射,每天1次,连续7天。减毒沙门氏菌瘤内注射,每周注射1次,共2次。最后一次注射后7天处死小鼠。采用流式、免疫组化、Western Blot等方法研究Nifuroxazide联合减毒沙门氏菌运载PD1-siRNA对小鼠黑色素瘤的治疗作用。结果:自主构建的PD1-siRNA能够显着抑制肿瘤中PD1的表达,Nifuroxazide能够明显抑制Stat3的表达。与其它组相比,Nifuroxazide联合PD1-siRNA更加明显延长了荷瘤小鼠生存期,抑制黑色素瘤生长。Western Blot结果显示,Nifuroxazide联合PD1-siRNA显着抑制了迁移相关蛋白MMP2的表达,增加了凋亡相关蛋白Caspase3的表达。不仅如此,联合组显着增强了脾脏中CD8+T淋巴细胞、NK细胞的浸润及表达,抑制了Treg细胞及PD1+CD8+T的表达。结论 :相比单独应用Nifuroxazide及PD1-siRNA,Nifuroxazide联合PD1-siRNA能够更加有效的抑制小鼠黑色素瘤生长,提高小鼠抗黑色素瘤的免疫反应。(本文来源于《第十叁届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2018-11-07）
徐文玲,张博伦,张晶[6]（2018）在《减毒沙门氏菌应用于免疫缺陷宿主的安全性检测》一文中研究指出肿瘤靶向细菌是一种全新的肿瘤治疗方法,减毒沙门氏菌VNP20009是细菌介导肿瘤治疗的典型代表.VNP20009在野生型沙门氏菌背景上敲除基因msbB和purI后降低了沙门氏菌对宿主的致病力,因而具有良好的抗肿瘤疗效,得到广泛应用.以减毒沙门氏菌VNP20009为研究对象,以免疫缺陷型转基因鼠TNFR1KO小鼠为敏感模型,对VNP20009感染的毒副性及其应用范畴进行评估.研究表明,减毒沙门氏菌VNP20009对正常小鼠无明显毒副性,但对免疫缺陷型小鼠具有致死毒性,出现严重肝脾肥大以及引发全身性感染.通过体外巨噬细胞侵染实验发现,VNP20009在TNFR1敲除的巨噬细胞内能大量增殖并引发巨噬细胞死亡,导致体内巨噬细胞的大幅减少.研究认为,VNP20009仅适用于免疫力正常的宿主,但在免疫力缺陷或低下的宿主中进行应用则无安全性保障.(本文来源于《南京大学学报(自然科学)》期刊2018年05期）
鲜思美,李婷,冯将,李鹏飞,包细明[7]（2018）在《携带DEV-gB/NP28重组减毒沙门氏菌诱导鸭的免疫应答研究》一文中研究指出为探究表达鸭肠炎病毒(DEV)gB/NP28双基因重组减毒沙门菌口服疫苗在鸭体内诱导免疫应答能力,本研究将构建的重组菌(pcDNA3.1-DEV-gB/NP28)/SL7207、DVE弱毒疫苗、重组质粒pcDNA3.1-DEV-gB/NP28及PBS分别免疫雏鸭,通过间接免疫荧光法检测免疫鸭脾脏、胸腺、法氏囊、哈德氏腺组织中的抗原表达;双抗体夹心ELISA方法检测肠道黏膜sIgA;间接ELISA方法监测血清中DEV特异性抗体、外周血T淋巴细胞增殖及IFN-γ、IL-4细胞因子含量,对该口服疫苗进行免疫学评价。结果表明,重组菌能够诱导鸭产生良好的黏膜免疫、体液免疫和细胞免疫应答;攻毒试验显示,在DVE强毒攻击下重组菌免疫可提供75%以上的保护,表明重组菌免疫对DEV攻击具有一定的免疫保护作用。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2018年04期）
赵晶晶[8]（2018）在《IDO抑制剂联合运载Stat3-siRNA减毒沙门氏菌抗乳腺癌的作用》一文中研究指出背景乳腺癌是发生在乳腺上皮组织的恶性肿瘤,由于其发生原因的多样性,单一的治疗方法对其效果有限,因此我们期望找到一种有效的联合治疗方案。研究发现,吲哚胺2,3-双加氧酶(Indoleamine2,3-Dioxygenase,IDO)是一种具有免疫抑制作用的色氨酸代谢途径的限速酶,抑制IDO的表达能够有效提高机体的抗肿瘤免疫反应。Stat3做为一种信号转导子和转录活化子家族成员,已经被证实在多种肿瘤中高表达,促进肿瘤的进展,抑制机体抗肿瘤免疫反应,同时提高了IDO的表达。RNAi技术能够通过长度为21-25nt的双链小干扰RNA,特异地降解靶目标RNA,阻断其对应蛋白的合成。因此我们设想利用RNAi技术抑制Stat3,同时联合IDO抑制剂研究其对小鼠乳腺癌的治疗作用。目的探索IDO抑制剂联合运载Stat3-siRNA减毒沙门氏菌是否能够提高乳腺癌荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫作用。方法EMT-6乳腺癌细胞皮下接种于Balb/c小鼠建立乳腺癌荷瘤小鼠模型,随机的分为以下5组:模型组(PBS)、IDO抑制剂组(D-MT)、运载Scramble-siRNA减毒沙门氏菌组(Scramble-siRNA)、运载Stat3-siRNA减毒沙门氏菌组(Stat3-siRNA)、IDO抑制剂+运载Stat3-siRNA减毒沙门氏菌组(D-MT+Stat3-siRNA)。IDO抑制剂腹腔给药、1天1次、持续给药1周,运载干扰片段的减毒沙门氏菌组瘤内注射、1周给药1次、治疗2周。治疗结束后,肿瘤称重,比较各组小鼠肿瘤大小;免疫蛋白印迹(Western blot,WB)检测荷瘤小鼠肿瘤组织免疫相关蛋白CD8~+T淋巴细胞的表达;免疫组化(immunohistochemistry,IHC)检测肿瘤中CD8~+T淋巴细胞浸润的情况;HE(haematoxylin-eosin,HE)染色检测模型组乳腺癌荷瘤小鼠与不同治疗组乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤组织,对比其细胞凋亡情况;流式:取模型组和不同治疗组乳腺癌荷瘤小鼠的脾脏组织,检测CD3、CD4、CD8、NK等免疫相关指标。结果1.肿瘤对比结果显示,不同治疗组与模型组乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤大小相比,发现在治疗结束后,联合组明显抑制肿瘤的生长;2.HE染色结果显示,不同治疗组与模型组乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤组织相比,发现治疗组中尤其是联合治疗组的小鼠肿瘤组织中出现大量的凋亡细胞;3.Western结果显示,不同治疗组与模型组乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤组织相比,发现联合治疗组的小鼠中CD8表达升高、MMP2表达降低;4.流式结果显示,不同治疗组与模型组乳腺癌荷瘤小鼠脾脏组织中CD3、CD4、CD8、NK1.1等指标相比,发现联合组中NK1.1含量最高,以及CD3标记后的CD4、CD8表达量也是最高。结论IDO抑制剂联合Stat3-siRNA治疗可显着抑制乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长,其机制可能通过提高免疫细胞的数量。(本文来源于《新乡医学院》期刊2018-04-01）
孟霞,陈凯,陈斌杰,朱国强[9]（2017）在《表达肠炎沙门氏菌SEF14菌毛的减毒鸡伤寒沙门氏菌重组菌的构建及免疫保护作用研究》一文中研究指出引言肠炎沙门氏菌(Salmonella enterica serovar Enteritidis,S.Enteritidis)是一种重要的人畜共患病原菌,成年家禽感染后一般呈无症状带菌状态,长期排菌,污染肉蛋产品,并引起人类严重的食品安全问题。开发具有强保护力的新型疫苗是防治家禽肠炎沙门氏菌感染较为有效的方法。SEF14菌毛特异性表达干肠炎沙门氏菌以及相近的D-群沙门氏菌中,以SEF14菌毛为抗原,含有asd基因为(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会论文集》期刊2017-08-20）
王君耀[10]（2017）在《旋毛虫ES抗原43ku基因重组减毒沙门氏菌构建及其免疫保护效果评价》一文中研究指出旋毛虫病(Trichinosis)是由毛尾目,毛形科的旋毛形线虫(Trichinella spiralis)引起的人畜共患病,严重危害畜牧业发展和人类健康。目前旋毛虫病的治疗仅依靠服用化学药物来达到效果,这对宿主机体的损伤非常严重。随着现代生物学技术的发展,利用基因工程技术研制的活载体疫苗作为新型疫苗之一,具有免疫方式简单、免疫原性强和成本低等优点,为旋毛虫新型疫苗研制提供了新思路。减毒沙门氏菌(attenuated Salmonella vector,RASV)作为载体的优点在于其本身有较强的侵入性,但又没有沙门氏菌的毒性,从而作为活载体疫苗具有应用价值。本试验通过旋毛虫43kuES抗原基因与减毒沙门氏菌载体pYA3681构建重组质粒pYA3681-Ts43,电转入减毒沙门氏菌χ11802中,经双酶切验证和质粒测序鉴定成功后,IPTG诱导减毒沙门菌进行目的蛋白表达,最后经动物实验评价重组减毒沙门氏菌的免疫效果。具体研究内容和实验结果如下:(1)旋毛虫ES抗原43ku基因重组减毒沙门氏菌构建将感染旋毛虫40天后的BALB/c小鼠断颈处死,采集肌肉,用胃蛋白酶消化肌肉,收集旋毛虫,于液氮中用研钵处理后提取旋毛虫总RNA,用反转录体系将RNA反转录为cDNA,根据GenBank上旋毛虫43kuES抗原基因序列信息,采用Primer5.0设计含有KpnⅠ和SacⅡ酶切位点的上下游引物,利用PCR扩增旋毛虫43kuES抗原基因,扩增产物经凝胶电泳鉴定,回收目的基因。-20℃保存备用。将回收的旋毛虫目的基因Ts43与减毒沙门氏菌载体pYA3681连接过夜,电转入大肠杆菌感受肽χ6212,经双酶切鉴定后电转入减毒沙门氏菌χ11802中,再次进行双酶切鉴定和序列测定。最后IPTG诱导进行目的蛋白表达,Western Blottig结果表明重组减毒沙门氏菌表达Ts43具有反应原性,可以对其免疫效果进行评价。(2)重组减毒沙门氏菌pYA3681-Ts43的免疫保护效果每组10只4-5周龄的BALB/c小鼠,将小鼠随机分为4组:空白对照组、PBS对照组、减毒沙门氏菌空载体组(pYA3681)、重组减毒沙门氏菌组(p YA3681-Ts43)。空白对照组正常喂食,不免疫;PBS组每次每只口服免疫200μLPBS溶液;pYA3681组每次每只口服免疫200μL空载体减毒沙门氏菌;pYA3681-Ts43组每次每只口服免疫200μL重组减毒沙门氏菌。每周免疫1次,每次免疫相隔7天,连续免疫3周,在第3次免疫过后7天,断颈处死5只小鼠,取血和肠道灌洗液,ELISA方法检测IgG、IgA、IL-4、IL-17a和IFN-γ水平。取脾脏和肠系膜淋巴结分离单细胞,流式细胞术检测小鼠CD4+T细胞及其胞内IL-4、IL-17a和IFN-γ细胞因子水平。第3次免疫后7天,将剩余的小鼠每只攻旋毛虫300条,攻旋毛虫后记录小鼠15天体重,计算体重丢失率。攻虫第42天处死小鼠检测肌肉中旋毛虫数量,计算减虫率,并取小鼠舌肌,做病理切片,观察病理损伤情况。实验结果表明:重组的减毒沙门氏菌可以有效的刺激脾脏和肠系膜淋巴结的增殖,通过ELISA方法检测的IgG、IgA、IL-4、IL-17a和IFN-γ水平明显升高,流式细胞术检测小鼠CD4+T细胞及其胞内IL-4、IL-17a和IFN-γ细胞因子水平也明显升高。通过小鼠的病理切片和减虫率可以发现,PBS组和空载体组小鼠肌肉内旋毛虫数量没有太大的变化情况,而重组菌组小鼠体内的旋毛虫数量明显减少。通过本试验可以发现,免疫过重组减毒沙门氏菌的小鼠对旋毛虫侵入机体有一定的抑制作用。这为制备旋毛虫病减毒沙门氏菌活载体疫苗研究奠定了基础,为该病免疫防治提供了新思路。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2017-05-01）
减毒沙门氏菌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:1.构建和鉴定脂质运载蛋白2(Lipocalin 2,Lcn2)基因重组减毒沙门氏菌。2.探讨携带Lipocalin 2的减毒沙门氏菌对分枝杆菌生长的影响。方法:1.以巨噬细胞RAW264.7提取RNA逆转录为c DNA为模版,采用PCR法扩增Lcn2基因,定向克隆到质粒p Bud CE4.1-orim的多克隆位点中,构建重组质粒p Bud CE4.1-orim-Lcn2;将重组质粒p Bud CE4.1-orim-Lcn2转染RAW264.7细胞,用RT-q PCR法检测Lcn2的m RNA表达。2.将重组质粒转入减毒沙门氏菌SL7207得到重组菌株SL7207-p Bud CE4.1-orim-Lcn2;重组菌感染RAW264.7细胞,用Western blot检测Lcn2的蛋白表达,RT-q PCR法检测Lcn2的m RNA表达;7H10平板上通过菌落计数观察重组菌对感染RAW264.7细胞的BCG生存的影响。3.用重组菌以灌胃的方式感染BALB/c小鼠后,检测脾组织中Lcn2表达,血清中IFN-γ和IL12的水平。4.建立BCG小鼠感染模型,以重组菌治疗后通过肺组织荷菌量和肺组织病理变化观察其对分枝杆菌生长的影响。结果:1.成功构建Lipocalin 2基因重组质粒,经双酶切及基因测序鉴定正确。重组质粒转染RAW264.7后用RT-q PCR法检测Lcn2的m RNA表达升高(P=0.000,F=22570)。2.成功构建重组菌株SL7207-p Bud CE4.1-orim-Lcn2,经PCR鉴定正确。重组菌感染RAW264.7细胞Lcn2的蛋白表达量较对照组增加(P=0.000)。RT-q PCR法检测重组菌m RNA表达较对照组明显升高(P=0.000,F=5.281)。7H10平板上重组菌组BCG数量与空载菌组相比明显减少(P=0.000,F=11.41)3.重组菌组与空载对照菌组相比小鼠脾组织Lcn2表达升高(P=0.000,F=4.449),重组菌组与生理盐水组相比血清IFN-γ升高(P=0.004,F=15.27),IL12未见明显差异(P>0.05,F=2.26)。4.空载菌组、重组菌组小鼠肺荷菌量分别为6.27±0.33log10、6.21±0.29log10。空载菌组与重组菌组肺荷菌量比较无统计学差异(P>0.05,F=1.30)。空载菌组、重组菌组肺组织病理变化未见明显差异。结论:1.成功构建了携带Lcn2基因的重组减毒沙门菌。2.重组菌感染RAW264.7细胞后Lcn2的表达增加,对感染RAW264.7的BCG存活起到一定的抑制作用。3.重组菌以灌胃的方式感染小鼠后,小鼠脾组织Lcn2表达增加,血清IFN-γ含量增加,血清IL-12含量未见明显变化,提示小鼠免疫状态有利于结核病转归。4.重组菌治疗BCG感染小鼠后,小鼠肺部BCG荷菌量与对照组无明显差异,肺部病理变化无明显差异。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
减毒沙门氏菌论文参考文献
[1].蒋如如,李欣,李洁,哈小琴.减毒沙门氏菌在抗肿瘤治疗中的应用[J].基础医学与临床.2019
[2].唐弘.携带Lipocalin2基因重组减毒沙门氏菌的构建及其对分枝杆菌生长影响的研究[D].重庆医科大学.2019
[3].冯雨晨,刘深圳,郭蒙蒙,贾慧婕,刘可欣.硝呋奇特联合运载IDO2-siRNA减毒沙门氏菌抗黑色素瘤作用及机制研究[C].第十叁届全国免疫学学术大会摘要汇编.2018
[4].郭蒙蒙,冯雨晨,黄文帅,张强,贾慧婕.减毒沙门氏菌运载IDO2-siRNA增强肝细胞原位癌小鼠的抗肿瘤作用[C].第十叁届全国免疫学学术大会摘要汇编.2018
[5].郭婧,刘笑铭,杨云帆,赵铁锁.Nifuroxazide联合减毒沙门氏菌运载PD1-siRNA抗黑色素瘤作用研究[C].第十叁届全国免疫学学术大会摘要汇编.2018
[6].徐文玲,张博伦,张晶.减毒沙门氏菌应用于免疫缺陷宿主的安全性检测[J].南京大学学报(自然科学).2018
[7].鲜思美,李婷,冯将,李鹏飞,包细明.携带DEV-gB/NP28重组减毒沙门氏菌诱导鸭的免疫应答研究[J].中国预防兽医学报.2018
[8].赵晶晶.IDO抑制剂联合运载Stat3-siRNA减毒沙门氏菌抗乳腺癌的作用[D].新乡医学院.2018
[9].孟霞,陈凯,陈斌杰,朱国强.表达肠炎沙门氏菌SEF14菌毛的减毒鸡伤寒沙门氏菌重组菌的构建及免疫保护作用研究[C].中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会论文集.2017
[10].王君耀.旋毛虫ES抗原43ku基因重组减毒沙门氏菌构建及其免疫保护效果评价[D].吉林农业大学.2017
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