茶树Ankyrin基因启动子的克隆及其5′UTR内含子功能

茶树Ankyrin基因启动子的克隆及其5′UTR内含子功能

论文摘要

为了解启动子在茶树Ankyrin基因(CsAnkyrin)表达调控中的作用,以茶树新品系‘1005’嫩芽为材料,通过染色体步移技术克隆CsAnkyrin基因启动子序列,利用Neural Network Promoter Prediction和PlantCARE在线软件等对启动子序列进行生物信息学分析,将含有内含子和删除内含子的启动子序列(+intron/-intron)分别定向替换pCAMBIA1301表达载体的CaMV35S启动子,构建重组表达载体后分别转化拟南芥,并进行GUS组织化学染色分析.结果显示,克隆得到的CsAnkyrin启动子序列(命名为proAnk)为1 010 bp,含有一个5′UTR(5′Untranslated regions,5′非编码区)内含子.启动子序列除含有启动子核心元件TATA-box和CAAT-box,还存在有激素响应元件、光响应元件、厌氧胁迫应答元件以及大量功能未知或功能特异的顺式作用元件.删除5′UTR内含子后的启动子序列能够驱动下游GUS报告基因表达,保留5′UTR内含子的启动子序列不能驱动下游GUS报告基因正常表达,但是RT-PCR实验结果表明5′UTR内含子在转录后没有被切除,而是和GUS基因一起转录产生融合mRNA.本研究表明,proAnk具有诱导型启动子特性,5′UTR内含子对下游基因正常表达具有负调控作用,且可能是在翻译水平上对下游基因表达产生影响.(图7表1参32)

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 茶树总DNA的提取与CSAnkyrin基因5′侧翼序列的扩增
  •     1.2.2 PCR扩增产物的回收纯化、克隆与测序
  •     1.2.3 启动子的生物信息学分析
  •     1.2.4 茶树CsAnkyrin基因启动子(+intron/-intron)融合表达载体的构建
  •     1.2.5 拟南芥的遗传转化、阳性植株的筛选鉴定与启动子的驱动活性分析
  •     1.2.6 p1301-proAnk-GUS转基因拟南芥不同器官的转录水平鉴定与分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 茶树CsAnkyrin基因5′侧翼序列的克隆
  •   2.2 茶树CsAnkyrin基因启动子序列分析及顺式作用元件预测
  •   2.3 CsAnkyrin基因启动子(+intron/-intron)融合表达载体的构建
  •   2.4 拟南芥的遗传转化、阳性植株的筛选鉴定与启动子驱动活性分析
  •   2.5 p1301-proAnk-GUS转基因拟南芥不同器官的转录水平的鉴定与分析
  • 3 讨论与结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 郑世仲,江胜滔,陈美霞,林玉玲,赖钟雄,林金科

    关键词: 茶树,启动子,顺式作用元件,内含子

    来源: 应用与环境生物学报 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑,农业科技

    专业: 生物学,农作物

    单位: 宁德师范学院生命科学学院,闽东特色生物资源福建省高校工程研究中心,福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福建农林大学安溪茶学院

    基金: 福建省高校杰出青年科研人才培育计划项目资助~~

    分类号: Q943.2;S571.1

    DOI: 10.19675/j.cnki.1006-687x.2019.05011

    页码: 1381-1387

    总页数: 7

    文件大小: 2869K

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