赤芍水提物及芍药苷对大肠杆菌抗菌增敏活性的影响

赤芍水提物及芍药苷对大肠杆菌抗菌增敏活性的影响

论文摘要

旨在考察中药赤芍水提物及其主要成分芍药苷对磷霉素钠的抗菌增敏活性,验证芍药苷对外排泵转运子AcrB的抑制作用,推测其抗菌增敏机制。首先,通过微量棋盘稀释法检测赤芍水提物及其主要成分芍药苷与磷霉素钠联合应用对临床分离的禽多重耐药大肠杆菌E320和质控菌株大肠杆菌ATCC35218的抑菌作用;其次,利用YASARA软件,以大肠杆菌多重耐药AcrAB-TolC系统中的外排泵转运子AcrB为靶标,与芍药苷进行分子对接模拟,探讨两者的识别机制;通过尼罗红外排试验验证芍药苷对外排泵的抑制作用;最后,通过实时荧光定量PCR验证芍药苷降低AcrB mRNA的表达量进而发挥抗菌增敏作用。试验结果证实赤芍水提物和芍药苷与磷霉素钠联合用药均具有协同抑制多重耐药大肠杆菌E320的作用(FICI≤0.5);分子对接结果显示芍药苷与AcrB蛋白受体的结合能达到8.333 kJ/mol,作用主要位点是AcrB蛋白受体上Phe628、Phe615、Val612、Ile277、Asn274、Gly179、Phe178等氨基酸残基,分子间主要作用力为疏水作用力;外排抑制试验结果显示芍药苷可以抑制耐药大肠杆菌外排泵活性,明显阻滞尼罗红的外排;实时荧光定量PCR结果显示芍药苷联合磷霉素钠比单独使用磷霉素钠显著降低大肠杆菌AcrB mRNA的表达量。本试验证明芍药苷通过作用外排泵转运子AcrB,使抗生素在菌体内积聚;并能显著降低AcrB mRNA的表达量进而起到抗菌增敏作用,为临床提供一种有效的抗菌增敏剂,对治疗耐药菌引起的细菌感染具有重要意义。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 主要材料
  •   1.2 药物处理
  •   1.3 最小抑菌浓度(MIC)测定
  •   1.4 赤芍水提物、芍药苷与磷霉素钠联合抑菌试验
  •   1.5 芍药苷与AcrB分子对接
  •   1.6 芍药苷对尼罗红外排抑制试验
  •   1.7 芍药苷及磷霉素钠对AcrB表达量的影响
  •   1.8 实时荧光定量PCR检测芍药苷和磷霉素钠对AcrB 表达量的影响
  • 2 结果
  •   2.1 药物对大肠杆菌的MIC
  •   2.2 药物联合抑菌试验
  •     2.2.1 赤芍水提物、芍药苷联合磷霉素钠对大肠杆菌ATCC35218的抑菌作用
  •     2.2.2 赤芍水提物、芍药苷联合磷霉素钠对大肠杆菌E320的抑菌作用
  •   2.3 芍药苷与AcrB分子对接
  •   2.4 芍药苷对尼罗红外排抑制作用
  •   2.5 常规PCR检测AcrB
  •   2.6 实时荧光定量PCR检测AcrB
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 贾泽,王春光,张石磊,张鹏,张铁

    关键词: 赤芍水提物,芍药苷,抗菌增敏剂,外排泵,分子对接

    来源: 中国兽医学报 2019年10期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 河北农业大学动物医学院

    基金: 国家自然科学基金资助项目(31572560),河北省自然科学基金资助项目(C2018204092)

    分类号: S852.61

    DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.10.23

    页码: 2026-2032

    总页数: 7

    文件大小: 2367K

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