导读:本文包含了兔出血症病毒论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:病毒,血症,杆状,免疫,蛋白,疫苗,活性。
兔出血症病毒论文文献综述
杨慧,刘吉山,李书光,王艳,于新友[1]（2019）在《兔出血症病毒次要衣壳蛋白VP12在大肠杆菌体内高效表达及特性研究》一文中研究指出试验旨在通过原核高效表达RHDV VP12蛋白,检测同源组织疫苗免疫后该蛋白抗体的产生情况。RT-PCR扩增获得抗原遗传变异株SQ-1株兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)次要衣壳蛋白VP12基因,定向克隆插入pET32a多克隆位点,构建Trx-His tag融合原核表达载体,PCR与序列测定正确后转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Western blot鉴定分析表达产物活性。测序结果显示,所扩增VP12基因ORF(开放阅读框)为354 bp,编码117个氨基酸,IPTG诱导后目的基因获得表达,融合载体Trx-His tag的重组VP12蛋白分子量为31 ku,与预期一致,且表达蛋白存在可溶性与包涵体两种形式;Western blot结果显示,可溶性表达蛋白与兔瘟肝组织灭活疫苗免疫后攻毒制备的RHDV阳性抗体能发生良好的抗原抗体杂交反应,说明该蛋白具有良好的反应原性。研究结果为开展RHDV VP12蛋白生物学与免疫学特性研究、开发诊断试剂奠定了基础。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2019年08期）
范志宇,王芳,胡波,魏后军,薛家宾[2]（2019）在《兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗临床免疫效力试验》一文中研究指出为了评估兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗在临床使用中的保护效力,试验选择3批次中试产品,分别在6家临床试验兔场对不同品种、不同日龄家兔进行免疫效力评价。结果显示,6家临床试验兔场试验期间均没有发生兔出血症;免疫持续期攻毒试验结果显示,疫苗对肉兔、獭兔、毛兔免疫期均可以达到7个月。结果表明,兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)临床效力检验合格,免疫期为7个月。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2019年07期）
朱杰[3]（2019）在《核仁素在兔出血症病毒感染与复制中的作用》一文中研究指出兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)为杯状病毒科的重要成员,对多个品种兔均具有高度致病性和致死性。长期以来,由于缺乏稳定的体外培养细胞系,RHDV生命过程中的许多分子机制尚不清楚。核仁素(Nucleolin,NCL)为宿主重要的多功能蛋白,我们前期的研究发现NCL可能参与RHDV的生命过程。鉴于此,本论文综合利用分子生物学方法和基因工程技术,系统研究了NCL在RHDV感染和复制中的作用及其分子机制。主要研究内容如下:(1)利用抑制剂及siRNA干扰技术,我们发现NCL在RHDV内化过程中发挥关键作用。然后,我们证明了NCL通过其N端结构域与RHDV衣壳蛋白(VP60)的保守区域DVN肽(~(472)Asp-Val-Asn~(474))段特异性的相互作用。随后,利用人工合成的DVN肽阻断VP60与NCL之间的结合后,病毒的内化效率明显降低。此外,本研究还发现NCL与网格蛋白轻链(Clathrin light chain A,CLTA)特异性结合,进而参与网格蛋白依赖的内吞作用。动物实验结果表明,DVN多肽可以保护大部分实验兔免受RHDV感染。上述研究结果表明NCL通过网格蛋白依赖的内吞作用介导RHDV的内化过程。(2)利用RHDV复制子系统和蛋白亲和纯化技术,我们成功分离并鉴定了RHDV复制复合物(RC)的主要成分,发现NCL与病毒蛋白(RdRp、p16和p23)参与病毒RC的形成。随后,我们证明了RdRp与病毒其他非结构蛋白不存在相互作用,而是通过NCL间接结合p16和p23病毒蛋白以及其他宿主蛋白,进而形成RC。同时,我们成功鉴定了RdRp、p16和p23与NCL相互作用的活性区域分别位于RdRp(第448-478位肽段)、p16(~(35)Cys-Ile-Arg-Ala~(38)肽段)和p23(第90-145位肽段)。此外,利用人工合成的RdRp多肽和p16多肽阻断NCL与病毒非结构蛋白的结合,我们发现RHDV的复制水平均显着降低。上述研究结果表明,NCL在RHDV RC的形成过程中发挥关键的桥梁作用。(3)我们发现RHDV感染后宿主NCL的转录水平显着提高,而蛋白水平并无明显变化。同时,我们发现NCL通过与组蛋白去乙酰化酶2(Histone deacetylase 2,HDAC2)结合,发生去乙酰化,随之被泛素化降解。我们还发现HDAC2对RHDV具有抗病毒作用,病毒的复制水平与HDAC2的活性呈负相关性。此外,本研究还发现RHDV利用p16与HDAC2特异性结合降低HDAC2的去乙酰化酶活性。以上结果表明,HDAC2通过诱使NCL去乙酰化,导致其被泛素化途径降解,进而抑制RHDV的复制,而RHDV则利用p16蛋白拮抗HDAC2的抗病毒作用。综上所述,本论文首次发现RHDV通过劫持NCL完成入侵细胞的内化过程。同时,我们还发现NCL在RHDV复制复合体的形成过程中发挥关键的桥梁作用。此外,本研究还发现宿主蛋白HDAC2对RHDV具有抗病毒作用。上述研究成果使我们进一步认识了RHDV感染和复制的分子机制,为该病毒的防控提供了重要的理论基础。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2019-05-01）
尹曼曼,楼觉人[4]（2019）在《利用毕赤酵母表达系统表达兔出血症病毒样颗粒及其免疫原性研究》一文中研究指出为研究毕赤酵母表达的兔病毒性出血症病毒(RHDV)病毒样颗粒(VLP)的免疫保护性,本研究将RHDV VP60的基因克隆到pPIC3.5K载体中,并导入毕赤酵母KM71菌株中,重组菌株经发酵和甲醇诱导,通过western blot检测目的蛋白的表达;透射电镜观察表达产物是否组装形成VLP;并通过动物试验评估VLP的免疫原性和攻毒保护效果。Western blot结果显示VP60蛋白能够在酵母内表达,电镜下观察到表达的VP60能够自发装配成大小均一的颗粒,与天然RHDV大小相当,约为30 nm～40 nm,表明表达的VP60可以自发组装成VLP。动物实验结果表明:表达的VLP与佐剂MONTANIDE GEL 01 PR混合后免疫实验兔,能够刺激实验兔产生保护性抗体,免疫后21 d攻毒,对实验兔的保护率达100%,且保护性抗体至少可以持续6个月。本研究利用毕赤酵母表达了RHDV的VLP,为研制RHDV亚单位疫苗奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年03期）
Zhu,Jie,Miao,Qiu-hong,Tang,Jing-yu[5]（2018）在《兔出血症病毒侵入细胞的分子机制》一文中研究指出兔出血症病毒(Rabbit haemorrhagic disease virus,RHDV)是一种与兔养殖业密切相关的病毒,主要感染青壮年兔,由其引发的兔出血症(RHD)为急性、败血性传染病,该病具有极高的发病率和病死率,是兔的一种毁灭性传染病,俗称"兔瘟"。1984年,(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2018年12期）
杨慧,于雪,孙培娇,王艳,刘吉山[6]（2018）在《兔出血症病毒镇江株的分离鉴定及VP60蛋白活性表达》一文中研究指出试验旨在分离兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)镇江株,分析其遗传进化变异,并表达具有良好活性的重组VP60蛋白。通过排除细菌感染、血凝(HA)和血凝抑制(HI)检测、动物攻毒试验与病毒传代、LD50测定等方法,自江苏省镇江市某兔场发病死亡动物肝脏组织样品中分离病原并鉴定;RT-PCR方法获得VP60基因,通过分析VP60基因核苷酸及氨基酸序列研究其遗传进化;将VP60基因与pCold-Sumo载体连接,构建低温诱导、融合Sumo标签原核表达载体,15℃、IPTG诱导表达重组VP60蛋白并对表达产物进行反应原性鉴定。结果显示,分离鉴定获得RHDV ZJ2015毒株,该毒株能凝集人"O"型红血球,HA效价为11log2,其血凝性能被RHDV(AV33)抗血清抑制,该毒株的LD50为10-6.38/mL,具有较强的毒力;RT-PCR扩增得到大小约为1 740bp的特异性条带,系统进化树分析显示,该毒株属于RHDV1抗原遗传变异株(RHDVa),与RHDV1和RHDV2VP60基因核苷酸序列同源性分别为89.4%～97.6%和81.1%～81.5%,氨基酸序列同源性分别为93.8%～98.3%和87.4%～87.6%。构建的低温原核融合表达质粒pCold-VP60在大肠杆菌Rosetta(DE3)中成功表达,通过SDS-PAGE及Western blotting分析,在分子质量74ku处有特异性表达蛋白条带,且与抗血清发生特异性抗原抗体结合反应,说明重组蛋白具有良好的反应原性。本研究为开展兔病毒性出血症流行病学研究、开发新型重组疫苗与诊断试剂提供参考依据。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2018年12期）
杨慧,武玉香,王文秀,孙培姣,于雪[7]（2019）在《兔出血症病毒VP60蛋白单克隆抗体的制备及活性鉴定》一文中研究指出为制备兔出血症病毒VP60单克隆抗体,利用HEK 293T细胞瞬时表达VP60,免疫Balb/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选获得阳性克隆细胞株-5D11。利用血凝抑制(HI)、间接免疫荧光(IFA)和Western blot等方法对5D11分泌的单克隆抗体活性进行鉴定,并对其识别区域进行了定位。结果显示,5D11能抑制病毒凝集人"O"型红细胞,与杆状病毒表达的VP60蛋白发生特异性抗原抗体反应,且其识别VP60蛋白线性抗原表位,并定位于494 aa-579 aa区段。成功制备了抗VP60蛋白单克隆抗体,为开展病原学检测、流行病学研究等奠定了基础。(本文来源于《动物医学进展》期刊2019年08期）
蒙正群,周丽军,罗怡琳,冷依伊,张鹏飞[8]（2018）在《2株兔出血症病毒全基因测定与遗传进化分析》一文中研究指出对2株兔出血症病毒(RHDV)SCH04、Sch07进行全基因组序列测定,并进行同源性及遗传进化分析。按照病毒核酸组成,将病毒基因分7段进行RT-PCR扩增,将分段扩增产物分别克隆到p MD-19T载体进行测序,用DNAStar进行拼接,得到全基因组序列;参照Gen Bank上登陆的31株RHDV毒株全基因核苷酸序列、VP60基因核苷酸序列以及ORF2编码基因核苷酸序列对2株病毒进行同源性和遗传进化分析。结果显示,SCH04基因组全长7 439 bp,Sch07基因组全长7 438 bp,2株病毒全基因的核苷酸序列同源性为99.8%,与31株参考毒株全基因的核苷酸序列同源性为78.3%~97.0%;2株病毒的VP60基因核苷酸序列同源性为99.7%,ORF2编码基因核苷酸序列同源性为99.2%。进化树显示2株病毒同属于抗原变异株RHDVa(GI.1a)基因群,且亲缘关系最近。VP60基因核苷酸序列与ORF2编码基因核苷酸序列均可以作为RHDV遗传进化分析。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2018年04期）
范志宇,胡波,魏后军,宋艳华,薛家宾[9]（2018）在《兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗临床免疫效力试验》一文中研究指出本研究依据农业部兽用生物制品临床试验批件对南京某公司中试生产的3批次兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)在六家养殖场对不同品种、不同日龄家兔进行免疫,通过疫苗注射后的临床观察、攻毒保护试验等开展该疫苗免疫期内免疫效力等相关研究工作。选择35～42日龄幼兔、2月龄健康家兔,使用批号2013002中试产品分别在江苏A兔场、浙江A兔场、江苏C兔场和浙江B兔场进行免疫,使用批号2013003中试产品在山东A兔场进行免疫,使用批号2013004中试产品在江苏B兔场进行免疫;使用批号129083同类疫苗分别在六家兔场进行免疫;同时有一定数量的不同日龄家兔留作对照兔,皮下注射灭菌生理盐水。在注射后第150、210日分别在六家试验兔场随机选择中试产品和同类疫苗免疫家兔及对照兔,5只/组/批/次,采用攻毒法进行效力检验。对六家临床试验兔场家兔,免疫后每隔1个月进行一次血液采集,分离血清,使用血凝抑制(HI)方法和ELISA方法进行抗体检测。结果显示,使用中试产品相继在六家养殖场共免疫家兔26133只,其中幼兔24313只、2月龄兔1820只,家兔在试验期间均未发生兔出血症。攻毒结果显示,中试产品疫苗对不同品种家兔可产生7个月的保护。同类疫苗对不同品种的家兔可产生6个月的保护。抗体检测结果显示,7个月内家兔血清抗体HI效价和OD_(450nm)值均维持在较高水平,不同批次疫苗免疫兔血清抗体水平没有显着差异。结论:兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)中试产品可以保护免疫兔场不发生兔出血症,免疫期为7个月,临床效力检验合格。该疫苗于2017年2月获得国家一类新兽药注册证书([2017]新兽药证字06号),该疫苗也必将替代兔病毒性出血症组织灭活疫苗,在兔出血症的免疫防控中起到重要作用。(本文来源于《中国畜牧兽医学会养兔学分会第二届学术交流大会论文集》期刊2018-08-10）
安凯,孔惠萍,邢小勇,温峰琴,包世俊[10]（2018）在《兔出血症病毒GS/YZ分离株VP60截段基因的原核表达及免疫效力评价》一文中研究指出兔(Lepus)出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)属杯状病毒科(Caliciviridae)兔病毒属(Lagovirus)。VP60为RHDV的衣壳蛋白与免疫原性蛋白,且其抗原表位区主要集中在N端。本研究应用反转录(reverse transcription-PCR,RT-PCR)扩增获得VP60截段基因并将其亚克隆至p MD20-T,构建原核表达质粒pET-RHDV-VP60。转化大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)后经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,表达产物纯化后免疫Balb/C小鼠(Mus musculus)制备多抗,进而应用间接酶联免疫吸附试验(indirect enzyme linked immunosorbent assay,iELISA)和Western-blot对重组蛋白免疫原性进行分析。用混有弗氏佐剂的重组蛋白、商品苗、RHDV GS/YZ灭活苗、磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)分别注射易感兔,14 d后重组蛋白组加强免疫1次,21 d后用HA(hemagglutination)效价为210的RHDV GS/YZ肝脏悬液全部攻毒,观察14 d,并记录结果。结果表明:RHDV GS/YZ株VP60截段基因与RHDV HB株(登录号:KU207100.1)和RHDV WX株(登录号:AF402614.1)同源性最高,达98.6%;RHDV GS/YZ株VP60截段氨基酸序列与与RHDV WX株(登录号:AF402614.1)和RHDV Mexico 89株(登录号:AF295785.1)同源性最高,达99.1%;RHDV GS/YZ株VP60截段片段在Rosetta(DE3)中成功获得表达,且以包涵体形式存在;i ELISA测定制备的多克隆抗体效价为1∶32 000;Western-blot结果显示,重组蛋白具有良好的免疫原性;免疫保护实验表明,免疫组在攻毒后全部存活,保护率为100%,商品苗血凝抑制效价为2~5~2~8,自制灭活苗为2~5~2~6,重组蛋白加佐剂为2~4~2~5,而只注射了PBS的对照组在攻毒后的96 h全部死亡,表明大肠杆菌表达的VP60截段蛋白在混有弗氏佐剂后能够完全抵抗RHDV强毒的攻击。研究结果为RHD亚单位疫苗的研发及其快速诊断方法的建立提供了资料基础。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2018年05期）
兔出血症病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了评估兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗在临床使用中的保护效力,试验选择3批次中试产品,分别在6家临床试验兔场对不同品种、不同日龄家兔进行免疫效力评价。结果显示,6家临床试验兔场试验期间均没有发生兔出血症;免疫持续期攻毒试验结果显示,疫苗对肉兔、獭兔、毛兔免疫期均可以达到7个月。结果表明,兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)临床效力检验合格,免疫期为7个月。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
兔出血症病毒论文参考文献
[1].杨慧,刘吉山,李书光,王艳,于新友.兔出血症病毒次要衣壳蛋白VP12在大肠杆菌体内高效表达及特性研究[J].家畜生态学报.2019
[2].范志宇,王芳,胡波,魏后军,薛家宾.兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗临床免疫效力试验[J].中国兽医杂志.2019
[3].朱杰.核仁素在兔出血症病毒感染与复制中的作用[D].中国农业科学院.2019
[4].尹曼曼,楼觉人.利用毕赤酵母表达系统表达兔出血症病毒样颗粒及其免疫原性研究[J].中国预防兽医学报.2019
[5].Zhu,Jie,Miao,Qiu-hong,Tang,Jing-yu.兔出血症病毒侵入细胞的分子机制[J].中国预防兽医学报.2018
[6].杨慧,于雪,孙培娇,王艳,刘吉山.兔出血症病毒镇江株的分离鉴定及VP60蛋白活性表达[J].中国畜牧兽医.2018
[7].杨慧,武玉香,王文秀,孙培姣,于雪.兔出血症病毒VP60蛋白单克隆抗体的制备及活性鉴定[J].动物医学进展.2019
[8].蒙正群,周丽军,罗怡琳,冷依伊,张鹏飞.2株兔出血症病毒全基因测定与遗传进化分析[J].江苏农业学报.2018
[9].范志宇,胡波,魏后军,宋艳华,薛家宾.兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗临床免疫效力试验[C].中国畜牧兽医学会养兔学分会第二届学术交流大会论文集.2018
[10].安凯,孔惠萍,邢小勇,温峰琴,包世俊.兔出血症病毒GS/YZ分离株VP60截段基因的原核表达及免疫效力评价[J].农业生物技术学报.2018
论文知识图
