首页> 正文

基于蛋白质组学与乙酰化修饰组学对沙门菌耐药机制研究

2020-12-08阅读(417)

基于蛋白质组学与乙酰化修饰组学对沙门菌耐药机制研究

论文摘要

沙门菌是重要的食源性人兽共患病原菌,可引起胃肠炎、伤寒和败血症等疾病,对人类健康和畜牧业发展有很大危害。氟喹诺酮类药物(Fluoroquinolones,FQs)是治疗沙门菌病的常用药物,但由于FQs在临床上广泛不合理的使用,导致沙门菌耐药率不断升高。沙门菌的耐药性已成为一个重要的临床问题。因此,研究和克服沙门菌FQs的耐药性问题,探索其耐药机制具有重要意义。目前,研究细菌耐药机制的常用方法是通过人工诱导敏感株对单一药物耐药,得到稳定的耐药菌株进行研究。本实验室前期已完成了对鼠伤寒沙门菌环丙沙星耐药株的体外诱导。本研究利用二维电泳和质谱鉴定技术,对鼠伤寒沙门菌环丙沙星体外诱导耐药株与标准株的蛋白质组表达差异蛋白进行筛选,寻找鼠伤寒沙门菌耐药株的耐药相关蛋白;利用TMT标记和乙酰化富集技术,对沙门菌环丙沙星体外诱导耐药株和标准株进行乙酰化修饰组学定量研究,筛选乙酰化位点表达差异的蛋白,并进行定量研究和生物信息学分析,为进一步研究蛋白质乙酰化与沙门菌耐药性的关系提供重要依据。具体研究内容与结果如下:第一,沙门菌耐药株和标准株的蛋白表达差异分析。将沙门菌耐药株和标准株在LB培养基中培养至对数期,然后超声破碎细菌制备蛋白样品,进行二维电泳,电泳胶经扫描分析后选取蛋白点进行质谱鉴定。耐药株与标准株间筛选到25个差异表达蛋白,22个蛋白鉴定成功,按功能分为4类:耐药相关蛋白5个、毒力相关蛋白2个、蛋白质合成相关蛋白3个、代谢相关蛋白有12个。表明耐药性的产生会引起多种蛋白发生变化,提示这些蛋白与沙门菌耐药性的产生相关。第二,沙门菌耐药株和标准株的乙酰化修饰组学研究。以体外诱导环丙沙星耐药株和标准株为研究对象,采用TMT标记和乙酰化富集技术,筛选沙门菌获得耐药后的乙酰化位点表达差异的蛋白,并对其进行定量研究和生物信息学分析。结果共鉴定到631个乙酰化蛋白,涉及1259个乙酰化位点。在定量到的乙酰化位点中,耐药株与标准株相比,112个位点的修饰水平发生上调,149个位点的修饰水平发生下调,主要富集通路为微生物代谢过程、抗生素生物合成、细菌趋化性等。在乙酸化修饰水平显著差异的蛋白中,筛选出13个与细菌耐药性相关的蛋白,表明蛋白质的乙酰化修饰参与了沙门菌体外诱导株耐药性的产生。本研究通过对鼠伤寒沙门菌体外诱导环丙沙星耐药株和标准株的蛋白质组学和蛋白质乙酰化修饰组学的分析,筛选出了与耐药相关的差异蛋白和代谢通路,为深入研究沙门菌耐药机制奠定了基础。

论文目录

  • 致谢
  • 摘要
  • Abstract
  • 英文缩略表
  • 文献综述
  • 引言
  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌株
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 主要仪器
  •   1.4 主要试剂的配置
  •     1.4.1 培养基（液）的配制
  •     1.4.2 蛋白电泳所用溶液
  •     1.4.3 二维电泳所用溶液
  •   1.5 菌株培养
  •   1.6 最小抑菌浓度的测定
  •   1.7 沙门菌环丙沙星耐药株和标准株的蛋白表达差异分析
  •     1.7.1 全菌蛋白的提取
  •     1.7.2 蛋白的纯化和浓度的测定
  •     1.7.3 沙门菌耐药菌株与标准菌株总蛋白二维电泳分离
  •     1.7.4 图像扫描和软件分析
  •     1.7.5 采点、质谱分析和数据库检索
  •   1.8 沙门菌标准株与耐药株乙酰化修饰组学研究
  •     1.8.1 蛋白提取和定量
  •     1.8.2 样品胰酶酶解、TMT标记蛋白及HPLC分级和修饰富集
  •     1.8.3 液相色谱-质谱联用分析和数据库搜索
  •     1.8.4 生物信息学分析方法
  • 2 结果与分析
  •   2.1 药敏试验结果
  •   2.2 标准株与耐药株的二维电泳结果
  •     2.2.1 二维电泳pH的确定
  •     2.2.2 二维电泳图谱分析与质谱鉴定
  •     2.2.3 差异蛋白功能分类及其亚细胞定位
  •   2.3 耐药株与标准株的乙酰化修饰组学研究结果
  •     2.3.1 蛋白样品的质控结果
  •     2.3.2 鼠伤寒沙门菌中乙酰化修饰的鉴定结果
  •     2.3.3 乙酰化蛋白GO功能注释和亚细胞定位
  •     2.3.4 差异乙酰化修饰位点对应蛋白的功能富集分析
  •     2.3.5 蛋白修饰的基序（motif）分析
  •     2.3.6 差异乙酰化蛋白质相互作用网络
  •     2.3.7 与耐药性和毒力相关的差异乙酰化蛋白
  • 3 讨论
  •   3.1 沙门菌耐药株和标准株的蛋白表达差异分析
  •     3.1.1 耐药相关蛋白
  •     3.1.2 毒力和蛋白质合成相关蛋白
  •     3.1.3 代谢相关蛋白
  •   3.2 沙门菌耐药株和标准株的差异乙酰化分析
  •     3.2.1 乙酰化与细菌耐药性
  •     3.2.2 乙酰化与细菌毒力
  •     3.2.3 乙酰化与细菌代谢
  • 4 结论
  • 参考文献
  • 附录
  • 作者简介

    • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 张瑞良

    导师: 李琳

    关键词: 鼠伤寒沙门菌,二维电泳,蛋白质乙酰化,耐药性

    来源: 安徽农业大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 安徽农业大学

    分类号: S852.61

    DOI: 10.26919/d.cnki.gannu.2019.000109

    总页数: 72

    文件大小: 5861K

    下载量: 99

    相关论文文献

    • [1].鸭沙门菌高密度发酵工艺的研究[J]. 山东畜牧兽医 2020(01)
    • [2].一例印地安纳沙门菌致小儿败血症的鉴定溯源分析[J]. 疾病监测 2019(12)
    • [3].基于方法学评估与检测基线预测广西玉林市从业人员沙门菌带菌水平[J]. 疾病监测 2020(03)
    • [4].饲料中沙门菌检测技术研究进展[J]. 上海畜牧兽医通讯 2019(04)
    • [5].韦太夫雷登沙门菌引起的食物中毒分析[J]. 国际检验医学杂志 2017(15)
    • [6].一起韦太夫雷登沙门菌食物中毒的分子病原学分析[J]. 现代预防医学 2017(19)
    • [7].鸡胴体中沙门菌的定量检测及风险评估[J]. 中国微生态学杂志 2015(08)
    • [8].广西食源性沙门菌主动监测网建立及其结果分析[J]. 中国卫生检验杂志 2010(07)
    • [9].广东省零售市场鸡肉中肯塔基沙门菌的流行情况及耐药性分析[J]. 畜牧兽医学报 2019(12)
    • [10].鸡白痢沙门菌研究进展[J]. 中国兽医学报 2016(09)
    • [11].一起由维尔肖沙门菌引起的食物中毒事件的病原溯源[J]. 中国卫生检验杂志 2012(10)
    • [12].欧洲鸡群中沙门菌的有效控制[J]. 中国家禽 2010(01)
    • [13].利用实时荧光定量聚合酶链式反应快速检测人及动物粪便中的沙门菌[J]. 疾病监测 2020(02)
    • [14].福建省首次自临床血流感染病例检出特勒凯比尔沙门菌[J]. 中国人兽共患病学报 2020(08)
    • [15].沙门菌快速检测技术研究进展[J]. 应用预防医学 2017(02)
    • [16].禽沙门菌疫苗的免疫保护机制研究进展[J]. 中国家禽 2013(02)
    • [17].一起韦太夫雷登沙门菌引起食物中毒的调查报告[J]. 中国卫生检验杂志 2008(09)
    • [18].研究揭示沙门菌对HIV感染者的致命缘由[J]. 中国艾滋病性病 2008(04)
    • [19].源于东南亚的韦太夫雷登沙门菌在全球的传播扩散[J]. 疾病监测 2016(01)
    • [20].一株非A～F群沙门菌的鉴定与分析[J]. 实验与检验医学 2016(03)
    • [21].食物中毒鸭沙门菌的生物学特性及分子分型研究[J]. 医学动物防制 2013(05)
    • [22].2010年四川省部分地区肉鸡中沙门菌污染监测[J]. 预防医学情报杂志 2013(09)
    • [23].脉冲场凝胶电泳检测一起汤卜逊沙门菌食物中毒[J]. 中国卫生检验杂志 2012(05)
    • [24].食品中沙门菌检测方法探讨[J]. 上海预防医学 2011(06)
    • [25].利齐菲尔德沙门菌引起食物中毒的实验室检测[J]. 中国当代医药 2010(27)
    • [26].2007年重庆市人群沙门菌监测分析[J]. 疾病监测 2009(05)
    • [27].透明质酸钠沙门菌检查方法的验证[J]. 食品与药品 2008(01)
    • [28].鸽源阿哥纳沙门菌的分离鉴定和生物学特性研究[J]. 中国畜牧兽医 2020(06)
    • [29].生牛肉中沙门菌的血清型鉴定与耐药性检测[J]. 食品安全质量检测学报 2018(17)
    • [30].浙江5个地区2010~2012年沙门菌流行特征及分子分型研究[J]. 临床检验杂志 2013(08)

    标签：;  ;  ;  ;  

    基于蛋白质组学与乙酰化修饰组学对沙门菌耐药机制研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕论降 版权所有 鄂ICP备12018319号-6