导读:本文包含了延迟性异种排斥反应论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:异种,心脏,内皮,血红素,猕猴,细胞,血管。
延迟性异种排斥反应论文文献综述
张恒,杨洪吉[1]（2011）在《延迟性异种移植排斥反应机制及其对策研究进展》一文中研究指出延迟性异种移植排斥反应是目前影响异种移植走向临床的主要免疫学障碍,其反应机制尚未完全清楚。目前研究认为主要与异种反应性抗体的结合、内皮细胞的激活及NK细胞的活性等相关,由此发展出了与之对应的一系列策略。本文就近年来延迟性异种移植排斥反应机制及其应对策略作一综述。(本文来源于《实用医院临床杂志》期刊2011年06期）
叶文学[2]（2010）在《RNAi特异性抑制NF-κB p65抗异种移植延迟性排斥反应作用的初步研究》一文中研究指出背景:器官移植现在已经成为治疗终末期器官功能衰竭的有效手段,为缓解临床同种供体的不足,异种器官作为最可能的供体来源越来越受到重视。然而,异种器官移植作为远缘移植,其面临的排斥反应较同种移植更为强烈、复杂。异种器官移植排斥反应包括超急排(HAR)、延迟性排斥(DXR)、急性细胞性排斥(ACR)、移植物慢性失功(CGD)四个阶段。目前HAR被大量研究普遍认为已有方法(转基因猪、天然抗体抑制剂等)克服,接下来异种移植研究亟待克服的主要障碍是DXR,在这一过程中,由诱生抗体诱导的移植物Ⅱ型血管内皮细胞激活是异种移植物被排斥、功能丧失的关键。而核转录因子κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)对Ⅱ型血管内皮细胞激活起关键性作用。现已表明NF-κB的功能涉及到免疫反应、胸腺发育、胚胎发生、炎症和急性反应、细胞繁殖、细胞凋亡、病毒感染和其他多种病理过程。但尚未见有应用于研究心脏移植抗排斥方面。小鼠→大鼠心脏移植不发生HAR,而直接表现DXR,是研究DXR的理想动物模型。我们现拟利用RNA干扰(RNAi)技术特异性地抑制小鼠心脏核因子κB(NF-κB)的表达,以期抑制异种移植延迟性排斥反应中Ⅱ型血管内皮细胞的激活,从而克服或减弱DXR,探讨RNA干扰技术在异种器官移植中的应用前景。方法:1.设计并化学合成针对小鼠NF-κB p65的siRNA,合成时对用于转染后示踪的部分siRNA进行荧光素FAM标记。2.小鼠血管内皮细胞(EOMA)的体外转染。分组:(1)空白对照组(细胞内不加任何干扰因素);(2)阴性对照组(细胞转染阴性对照siRNA,即siRNA-NC);(3)实验组(细胞转染NF-κB siRNA)。于转染前一天,接种EOMA细胞,在转染后的24h~72h时提取各组细胞总RNA,行RT-PCR测定细胞内NF-κB p65 mRNA水平;提取各组细胞总蛋白,行Western blot测定NF-κB p65蛋白表达。3.将转染混合物(含2OD阴性对照siRNA)经颈静脉或尾静脉注入实验小鼠。48h后获取心、肺、肝、肾标本,快速冰冻切片荧光显微镜观察体内组织分布,对尾静脉途径与颈静脉途径对组织分布的影响进行比较。4.将转染复合物(含2OD siRNA-NC)经颈静脉注入小鼠,在从1小时到1周的五个时间点摘除心、肝、肺、肾四个器官切片行荧光显微镜检查。将2OD NF-κB p65siRNA和阳离子聚合物in vivo-jetPEI形成的复合物静脉注入成年小鼠,注射后第1、3、5、7天的五个时间点摘取心脏,提取总RNA,行Real-time PCR检查各时间点NF-κB p65mRNA水平动态变化。5.为分析剂量效应关系,实验分五组,每组3只小鼠,四组动物单次注射siRNA和in vivo-jetPEI复合物,siRNA量各组分别为1OD, 2OD, 3OD和4OD,in vivo-jetPEI量按N/P ratio=6和siRNA的量相应配置。其中一假手术组注射同等体积PBS溶液作对照。72h后获取小鼠心脏,行定量RT-PCR测定NF-κB p65 mRNA的表达。6.实验分四组,每组叁只小鼠均被注射相同剂量的复合物(含2OD siRNA),实验动物的存活情况被连续观察一周。第1、3、5、7天抽血检测血清主要生化指标。7.分别将siRNA-NC和NF-κB p65 siRNA经in vivo-jetPEI乳化形成的复合物(含2ODsiRNA)一次性经颈静脉注入小鼠,注射后24h摘取心脏,提取总RNA,行Real-time PCR检测NF-κB p65和下游基因ICAM-1、VCAM-1、IL-1a mRNA水平。8.将2ODsiRNA-NC和NF-κB p65 siRNA经in vivo-jetPEI乳化形成的复合物经颈静脉转染小鼠,48h后小鼠心脏移植至大鼠颈部,观察供心存活时间、病理学改变、心脏NF-κB p65的表达和相关粘附分子、细胞因子基因mRNA水平以及大鼠体内诱生抗体移植前后水平变化。结果:1.NF-κB p65 siRNA和阴性对照siRNA均能被阳离子脂质体转染培养细胞,转染效率几近90%。RT-PCR检测发现转染NF-κB p65 siRNA后mRNA的表达水平下调明显,而转染阴性对照siRNA则无干扰效应。2.经尾静脉途径注射,siRNA主要分布于肝脏,心脏和肺分布极少;经颈静脉途径注射则心脏和肺可以获得较多的分布。3.将转染复合物(含2OD siRNA-NC)一次性经颈静脉注入小鼠,结果:在注射后1小时仅肝和肺看到荧光染色,24小时后在心、肺、肝、肾四个器官都看到了荧光染色,并在48h至72h间达到最高,1w时又见减弱。4.将2OD NF-κB p65 siRNA转染复合物经颈静脉注射后第1、3、5、7天的五个时间点监测到NF-κB p65基因表达均受到抑制,沉默效应大于50%,与假手术组和正常小鼠相比P<0.05。5.目的基因NF-κB p65mRNA表达在2OD~4OD剂量组出现明显下调(与1OD组相比较P<0.05),但各组间差别不大(P>0.05),而1OD组表达下降程度轻微(与假手术组相比P>0.05)。6.转染动物均存活,其活力和食欲无任何改变;除了一只小鼠在注射后第一天ALT升高至337U/L,第叁天降至正常范围外,所有受试动物的主要生化指标在转染后均未受明显影响。7.剂量为2OD时NF-κB p65 siRNA体内转染小鼠,其心脏NF-κB p65和下游基因ICAM-1、VCAM-1、IL-1a mRNA的表达均下调。8.转染siRNA 48h后,小鼠心脏移植至大鼠颈部。无处理组(单纯将小鼠心脏移植到大鼠颈部)供心平均存活时间为(1.80±0.83)d。对照组(转染siRNA-NC的小鼠心脏移植到大鼠颈部)供心存活时间无延长(与无处理组比较,P>0.05),平均存活时间为(1.60±0.87)d。实验组(转染NF-κB p65 siRNA的小鼠心脏移植到大鼠颈部)见供心存活时间明显延长(与无处理组比较,*P<0.01),移植物平均存活时间为(5.17±1.63)d。9.供心未排斥时,对照组和实验组移植心脏光镜下可见心肌组织排列整齐,部分细胞可见轻度水肿,间质炎症细胞浸润和少量淋巴细胞浸润;电镜下血管内皮肿胀在对照组表现较明显,而实验组表现为部分内皮细胞凋亡。发生排斥时,对照组和实验组供心光镜下见心肌细胞广泛水肿,排列变紊乱,心肌组织间大量的出血,大量炎细胞和少量单个核细胞和淋巴细胞浸润;电镜下实验组和对照组一致呈现部分血管内皮细胞胞质肿胀、粗面内质网增生的激活表现。10.阴性对照组未排斥时供心NF-κB p65 mRNA表达升高,但与正常心肌相比P>0.05;排斥时供心NF-κB p65 mRNA高表达,与正常心肌相比较P<0.05。实验组未排斥时供心NF-κB p65 mRNA表达明显下降,与正常心肌相比较<0.05;排斥时供心NF-κB p65 mRNA仍高表达,但与正常心肌相比较P>0.05。11.阴性对照组供心水平在移植后较正常小鼠心脏明显升高(siNCn VS N, p<0.05; siNCp VS N, p<0.01),且排斥后较排斥前升高更明显(siNCp VS siNCn, P<0.05)。实验组供心VCAM-1 mRNA水平在移植后较正常小鼠心脏明显下降(p<0.01),排斥后表达又明显升高,高于正常水平且与正常心脏相比p<0.01。12.阴性对照组供心移植后ICAM-1 mRNA水平较正常小鼠心脏明显升高(p<0.05),且排斥前后无明显差别(P>0.05)。实验组供心移植后ICAM-1 mRNA水平较正常小鼠心脏明显下降(p<0.05),排斥后表达又升高,但与正常心脏相比别p>0.05。13.阴性对照组供心移植后IL-1a mRNA水平较正常小鼠心脏明显升高(p<0.01),且排斥前后无明显差别(P>0.05)。实验组供心移植后IL-1a mRNA水平较正常小鼠心脏明显下降(p<0.05),但排斥后表达明显升高,与正常心脏相比别p<0.01。14.无处理组(单纯将小鼠心脏移植到大鼠颈部)、对照组(将转染siRNA-NC的小鼠心脏移植到大鼠)、实验组(将转染NF-κB p65 siRNA的小鼠心脏移植到大鼠颈部)叁组间受体外周血IgM、IgG水平在移植前、移植后均无明显差异(P>0.05);各组的IgM、IgG水平在移植后较移植前均明显升高(P<0.05)。结论:1.阳离子脂质体Lipofectamine?2000可在小鼠EOMA细胞高效转染化学合成的NF-κB p65 siRNA。2.细胞转染NF-κB p65 siRNA可实现内源性RNA降解,抑制相应的功能蛋白表达;本实验设计针对NF-κB p65的siRNA序列有效,适宜进行体内转染研究。3.颈静脉注射途径是靶向心脏体内转染研究的理想途径。4.颈静脉注射NF-κB p65 siRNA/in vivo-jetPEI复合物能介导ICR小鼠心脏的NF-κB p65基因表达沉默;且获得50%以上沉默效应的siRNA最小剂量为2OD。5. NF-κB p65 siRNA(剂量2OD)转染ICR小鼠后48h至72h心脏siRNA表达最高,是进行心脏移植的最佳时间。6.剂量为2OD时NF-κB p65 siRNA体内转染对ICR鼠是安全的。7.体内转染NF-κB p65 siRNA(剂量2OD)可抑制小鼠心脏NF-κB p65蛋白水平,实现NF-κB下游靶基因转录的有效抑制。8.体内转染NF-κB p65 siRNA(剂量2OD)使小鼠供心存活时间延长。9.体内转染NF-κB p65 siRNA(剂量2OD),小鼠供心未排斥时血管内皮细胞表现为凋亡,而发生排斥时表现为激活。10.体内转染NF-κB p65 siRNA(剂量2OD)可抑制心脏移植后内环境刺激下的供心NF-κB表达和下游基因ICAM-1、VCAM-1、IL-1αmRNA水平。(本文来源于《苏州大学》期刊2010-05-01）
唐华,姚榛祥,刘胜春[3]（2009）在《E-selectin在延迟性异种心脏移植排斥反应中的表达》一文中研究指出目的:观察小鼠→大鼠异种心脏移植后延迟性排斥反应(DXR)的病理特征,研究E-selectin在异种移植心脏的表达变化,探讨DXR发生机制。方法:袖套法建立小鼠→大鼠颈部异位异种心脏移植模型,将接受异种心脏移植的大鼠随机分为5组,1组(n=16)在供心停跳时取心,余4组(每组n=4)分别在移植术后3、8、16、24 h供心仍跳动时取心,另取未移植小鼠心脏作为对照组(n=4)。各组标本作HE染色、免疫组化SABC法检测E-selectin表达变化。结果:移植心脏HE染色表现为血管内皮损伤、血栓形成、心肌实质损伤、间质出血、炎症细胞浸润等病理特征随移植术后时间逐渐加重,完全排斥时部分心肌凝固性坏死及溶解、广泛间质出血、血管结构崩解及血管内血栓形成、严重炎症细胞浸润。对照组心脏无E-selectin表达,移植组心脏在移植后3 h即有E-selectin表达于血管内皮细胞,且随时间推移表达逐渐增强,排斥时达到高峰。结论:血管内皮细胞激活参与DXR发生,E-selectin表达与DXR发生和发展密切相关,E-selectin表达可早期提示DXR发生。(本文来源于《陕西医学杂志》期刊2009年06期）
刘胜春,姚榛祥,孙正魁,唐华,董蒲江[4]（2005）在《HO-1在延迟性异种心脏移植排斥反应中的表达及意义》一文中研究指出目的:探讨血红素氧合酶-1在延迟性异种心脏移植排斥反应中的表达及意义。方法:建立NIH-Wistar颈部异位心脏移植模型,分别于移植前、移植后1h、6h、12h、24h、48h和72h切取移植心脏,应用RT-PCR、Western Blot检测HO-1mRNA、HO-1蛋白表达并检测HO-1酶活性;同时比较钴原卟啉(CoPP)诱导HO-1对延迟性异种心脏移植排斥反应的影响。结果:移植心脏均有HO-1表达,HO-1mRNA(t=2.5170,P<0.05)、HO-1蛋白表达(t=2.3702,P<0.05)及酶活性(t=2.246,P<0.05)移植术后24~48h表达到达高峰;CoPP诱导的HO-1明显延长了移植心脏的存活时间(t=4.74442,P<0.001)。结论:HO-1表达在延迟性异种心脏移植后24~48h到达高峰;CoPP诱导的HO-1能延长延迟性异种心脏移植的存活时间。(本文来源于《重庆医科大学学报》期刊2005年05期）
刘胜春[5]（2005）在《血红素氧合酶-1对延迟性异种心脏移植排斥反应的影响》一文中研究指出目的 :为解决移植器官短决的难题,探索异种器官移植的可行性,为异种器官移植进入临床提供理论基础。本实验借助 NIH 小鼠-Wistar 大鼠颈部异位心脏移植模型,研究 HO-1 在 NIH 小鼠-Wistar 大鼠颈部异位移植心脏中的表达;并通过热休克预处理及 CoPP 诱导 NIH 小鼠 HO-1的表达评价 HO-1 对 DXR 的影响以及 HO-1 对小鼠-大鼠异种移植物时免疫反应的作用。方法、材料和结果1,将袖套法建立的小鼠→大鼠心脏移植模型中受体的麻醉方式由常规一次腹腔内注射,改进为首次注射半量,术中逐渐增加,并在改进组单独处理肺静脉建立 NIH-Wistar 颈部异位心脏移植模型。手术成功率分别为 80%(16/20)及 90%(18/20)。异种心脏移植平均成活时间2.10 土 0.7379 天(n=34)。改进前平均失血量 0.82±0.24ml,改进后为0.32±0.17ml(t=2.6321,P<0.01)。手术时间常规组 115.25±30.20 分,改进组 86.31±14.56 分(t= 3.8603,P﹤0.001)。空白对照组与移植组血浆 IgA,IgG,IgM,C3,C4 没有差异(t=0.5460,P>0.05)。被排斥的心脏体积增大,显微镜下见被排斥心脏的心肌中有广泛血管内血栓形成及出血,炎症细胞浸润,部分心肌凝固性坏死及溶解。所有被排斥心脏中未见补体 C3沉积(0/34),但 70.59%(24/34)有 IgG 沉积。所有排斥心脏中的浸润炎症细胞中均见有大量 CD68 阳性细胞,CD68弥漫性分布于巨噬胞浆中。该模型可用于 DXR 研究。改进措施可降低出血等并发症的发生并缩短手术时间。2. 利用 DXR 心脏移植模型,借助免疫组化、RT-PCR、Westrn Blot蛋白印迹杂交、以及血红素氧合酶活性测定 NIH-Wistar 异位心脏移植后 HO-1mRNA 表达、HO-1 蛋白表达,以及 HO-1 酶活性的变化规律。结果显示移植心脏中HO-1蛋白主要表达在血管内皮及周围邻近心肌细胞,浸润的炎症细胞中有表达。NIH-Wistar 心脏移植 6 小时后移植物组织中的 HO-1mRNA 开始增加(0.03209±0.012051),24 小时达到高峰(0.16752 ± 0.0304496) , 48 小 时 以 后 已 开 始 下 降 (0.150875 ±0.027486)。而其蛋白表达高峰则在 48 小时,HO-1 酶活性与蛋白表达基本一致。说明器官移植后移植物组织内的 HO-1 蛋白表达及其酶活性峰值略迟于 mRNA,但其表达高峰多在 24-48 小时内,在接近发生排斥反应时 HO-1mRNA 及蛋白表达均已在下降。协调性异种器官移植通常移植后 2～3 天发生延迟性异种移植排斥反应,用于 HO-1 对器官移植影响的研究较为合适。3.热休克预处理 NIH 小鼠诱导出 HO-1 表达,借助 NIH-Wistar 大鼠异位心脏移植模型,探讨 HO-1 对 DXR 的影响。 采用自制取暖器加热法对 NIH 小鼠进行热休克预处理,分别于热休克后 1h,6h,12h,24h,48h,72h 各取 6 只小鼠,处死后切取肝脏、脾脏和心脏,HO-1 免疫组(本文来源于《重庆医科大学》期刊2005-05-01）
夏漫辉[6]（2005）在《不同异种抗原胸腺修饰对延迟性异种排斥反应的作用研究》一文中研究指出目的:通过小鼠—大鼠异位心脏移植,建立小动物异种移植的延迟性排斥反应模型,采用不同抗原(供体脾细胞、供体血管内皮细胞)胸腺修饰的方法预处理受体,并联合全身照射的方法。研究T细胞在协调性异种移植延迟性排斥反应中的作用,以及不同抗原胸腺修饰对于内皮细胞系统在协调性异种移植延迟性排斥反应中功能的影响。 方法:供体(雄性NIH小鼠)和受体(雄性SD大鼠)随机分为四组:①A组(对照组):仅行颈部异位心脏移植;②B组(照射组):受体在d-17(移植前17天)天接受3.5Gy~(60)Coγ射线的全身照射,d-0天行心脏移植。③C组(照射+脾细胞胸腺修饰组):d-17天受体接受同等剂量全身照射后,d-14(移植前14天)天胸腺内注射小鼠脾细胞(SCs)5×10~6个/只,d-0天行心脏移植。④D组(照射+血管内皮细胞胸腺修饰组):d-17天受体接受同上照射后,d-14天胸腺内注射小鼠血管内皮细胞(VECs)5×10~6个/只,d-0天行心脏移植。观察各组移植心脏的存活时间;在移植前当天作供受体单向异种混合细胞反应(MCR);在移植前后用流式细胞仪连续检测受体外周血IgG抗体水平的变化;ELISA法检测移植后各组受体外周血ICAM-1和VCAM-1的变化。 结果:①供心平均存活时间(MST):A组(59.9±4.7h),B组(94.4±21.5h),C组(125.6±18.2h),D组(156.2±19.7h)。异种抗原胸腺修饰组(C组,D组)平均存活时间均显着延长(P<0.05),而C,D两组中,供体VECs为诱导原的D组又较供体SCs为诱导原的C组延长(P<0.05)。②供受体单向异种混合细胞反应(XMCR)刺激效应CPM值:A组(4187.5±567.9),B组(3780.3±323.0),C组(2775.1±344.4),D组(1626.3±233.7)。C,D两组MCR刺激效应均显着减弱(P<0.05),D组与C组比较有显着差异(P<0.05)。③受体外周血IgG抗体水平变化:移植前各组之间受体IgG水平无显着差异;移植后C,D两组IgG水平上(本文来源于《苏州大学》期刊2005-04-01）
陈栋,曹荣华,郭晖,陈刚,王西墨[7]（2005）在《猪-猕猴延迟性异种移植排斥反应的发生机制》一文中研究指出目的 :探讨猪 猕猴延迟性异种移植排斥反应 (DXR)的发生机制。方法 :建立湖北白猪 云南猕猴的腹腔异位心脏移植模型 ,应用中华眼镜蛇毒因子 (Y CVF)完全清除受者体内补体 ,并应用环孢素A(CsA)、环磷酰胺 (CTX)和甲泼尼龙 (M .P)叁联免疫抑制治疗。检测血清C3、C4、抗猪内皮细胞天然抗体 ,免疫组化方法染色检测移植物中C3、C5b 9、IgG、IgM、细胞间黏附分子 1(ICAM 1)、肿瘤坏死因子 α(TNF α)、单核巨噬细胞 (CD6 8)、NK细胞 (CD5 7)、CD4 +T细胞和CD8+T细胞的表达。结果 :移植心存活时间分别为 8、10、13和 13天 ,血清C3和补体总活性均下降为 0 ,抗猪内皮细胞天然抗体水平在移植后则有一个更为明显的下降 ,在移植心失功前 2～ 4天开始天然抗体稍有回升 ,但较术前正常时仍明显偏低。移植心有程度不等的C3、C4、C5b 9、IgG及IgM沉积 ,大量的单核细胞 (5 0 % ) ,少量的NK细胞 (8%～ 10 % )、CD4 +T细胞 (15 % )和CD8+T细胞(2 5 % )。移植物血管内皮细胞表面出现ICAM 1的表达上调 ,移植物间质中出现TNF α的表达增加。结论 :体液免疫和细胞免疫参与猪 猕猴DXR排斥反应的发生。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2005年01期）
陈栋,曹荣华,郭晖,陈刚,王西墨[8]（2004）在《单核细胞、NK细胞和T细胞在猪-猕猴延迟性异种移植排斥反应中的作用》一文中研究指出目的 观察单核细胞、NK细胞和T细胞在猪 猕猴延迟性异种移植排斥反应 (DXR)中的作用。方法 建立湖北白猪 云南猕猴的腹腔异位心脏移植模型 ,实验分为 2组 :对照组 (n =5 ) ,不使用中华眼睛蛇毒因 (Y CVF) ;实验组 (n =4)应用Y CVF完全清除受者体内补体。 2组受体猴均采用环孢素A(CsA) ,环磷酰胺 (CTX)和甲基强的松龙 (MP)叁联免疫抑制治疗。免疫组织化学方法检测移植心组织中细胞间黏附分子 (ICAM ) 1、肿瘤坏死因子 (TNF) α、单核细胞、NK细胞和T细胞的表达。结果 对照组 3个移植心在 15～ 60min内发生超急性排斥反应 (HAR) ,另 2个分别存活 2 2h及 6d ,移植心均未见明显的炎性细胞浸润及ICAM 1和TNF α的表达。实验组移植心存活时间分别为 8、10、13和 13d ,移植物浸润细胞中可见大量的单核细胞 (5 0 % ) ,少量的NK细胞 (8%～ 10 % ) ,CD4+ T细胞 (15 % )和CD8+ T细胞 (2 5 % )。移植物血管内皮细胞表面出现ICAM 1的表达上调 ,移植物间质中出现TNF α的表达增加。结论 单核细胞、NK细胞和T细胞介导的移植物损伤 ,在应用Y CVF处理的猪 猕猴DXR发生中发挥重要作用。(本文来源于《中华实验外科杂志》期刊2004年03期）
杨光伦[9]（2003）在《NF-κB信号传导途径在延迟性异种移植排斥反应中的作用》一文中研究指出目的延迟性异种移植排斥反应（DXR）是目前异种移植面临的最大障碍。本实验利用小鼠→大鼠心脏移植模型，研究NF-κB信号传导途径在DXR中的作用，旨在探讨DXR的发生机制及其防治措施。方法与结果第一部分 为建立适于研究DXR的动物模型，分别选择NIH小鼠和Wistar大鼠作为供体和受体。小鼠升主动脉与大鼠右颈总动脉用袖套法端端套入吻合，小鼠肺动脉与大鼠右颈外静脉也用袖套法端端套入吻合以建立小鼠→大鼠颈部异位心脏移植模型。移植后每日在大鼠颈部触摸移植心脏跳动，以心跳停止作为排斥反应的时间。排斥后取移植心脏作病理学检查。免疫组化法检测C3，IgG，和巨噬细胞（Mф）标记物CD68。结果发现移植成功率９５％（１８／２０）。移植心脏平均存活时间2.00±0.59天。病理检查示被排斥心脏中有广泛血管内血栓形成，出血及炎症细胞浸润，部分心脏有局灶性梗塞和凝固性坏死。所有移植物中未见C3沉积，但6０％（１１／４８）有ＩgＧ沉积。免疫组化检测发现浸润的炎症细胞中含有大量Mф。显示IgG和Mф参与小鼠→大鼠移植心脏排斥反应的发生，而补体并不起作用，此模型可用于DXR研究。第二部分 研究在DXR中NF-κB P65蛋白和P65 DNA结合活性。动物分二组：A组（n=6只），空白对照组；B组（n=6只），移植组。心跳停止作为排斥反应发生的时间。移植组心脏平均存活时间为2.00±0.59天,两组心脏分别作HE，Western blot检测NF-κB P65蛋白的表达；EMSA检测NF-κB P65DNA结合活性。统计显示以上各指标与空白对照组比较差异有统计学意义。提示NF-κB在DXR中起作重要作用。 第叁部分 研究免疫抑制剂CsA和Lef在DXR中对NF-κB信号传导途径的影响。实验动物分为A、B、C、D组：A组（n=6只），空白移植组；B组（n=6只），CsA20 mg/kg，每2日一次，自day0起使用；C组（n=6只），Lef 10mg/kg自day0起使用；D组（n=6只），Lef+CsA。ＨＥ作常规病理检查；免疫组化法<WP=8>和Western blot法检测IKK，P65，ＩκBα及ICAM-1的表达水平，EMSA检测NF-κB P65 DNA结合活性。结果发现单用CsA不能显着延长异种移植心脏存活时间，而单用Lef可显着延长移植心脏存活时间达4.17±1.33天（与A组比较，p<0.05）；Lef联用CsA可获协同作用，使移植心脏存活时间达6.50±2.06天(与B、C、D组比较，p均<0.05)；免疫组化及Western blot检测示A、B、C、D组间差异有统计学意义（p<0.05）。提示在DXR中免疫抑制剂的联合应用对NF-κB信号传导途径有抑制作用。第四部分 研究在DXR中PDTC与免疫抑制剂Lef和CsA联合应用对NF-κB信号传导途径的影响。实验动物分为A、B、C、D、E 5组：A组：（n=6只），空白移植；B组：（n=6只），PDTC 500mg/kg每日2次腹腔内注射；C组：（n=6只）,PDTC+CsA;D组：（n=6只）PDTC+Lef；E组：（n=6只）,PDTC+Lef+CsA。用HE作常规病理检查，免疫组化法和Western blot法检测IKK，P65，ＩκBα及ICAM-1的表达水平，EMSA检测NF-κB P65 DNA结合活性，结果发现单用PDTC不能显着延长异种移植心脏存活时间；PDTC联用CsA也可显着延长移植心脏存活时间达4.67±1.21天(与A、B组比较p<0.05,但B、C组间p>0.05)，PDTC与Lef联用可获协同作用，使移植心脏存活达7.0±1.79天（与A、B、C组比较，p<0.05）,而PDTC联用CsA和Lef可使移植心脏存活时间达9.00±1.41天（与A、B、C、D组比较p<0.05）。免疫组化及Western blot检测示C、D、E与A、B组比较有较差异有显着性（p<0.05）。抑制剂Lef和CsA联用NF-κB信号途径抑制剂PDTC可显着抑制NF-κB信号传导途径的激活而延长异种移植心脏的存活时间。 结论（1）袖套法建立小鼠大→鼠心脏移植模型，容易操作，容易观察，稳定可行，可用作研究DXR的动物模型。（2）NF-κB信号传导途径在小鼠→大鼠移植心脏排斥后被激活而表达增强，说明该信号传导途径的激活是被排斥心肌细胞死亡的始动机制之一。（3）单用免疫抑制剂Lef或与CsA联用均可延长小鼠→大鼠移植心脏的存活时间并能抑制NF-κB信号传导途径的激活。（4）NF-κB信号传导途径抑制剂PDTC联合免疫抑制剂Lef 和CsA可显着延长小鼠→大鼠移植心脏的存活时间，并能显着抑制NF-κB信号途径的激活。总之，NF-κB信号传导途径的激活在小鼠→大鼠异种移植中是DXR发生的始动机制之一，抑制或阻断NF-κB信号传导途径的激活能有效地减缓DXR的发生。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2003-05-01）
关兆杰[10]（2003）在《抗凝治疗对延迟性异种移植排斥反应的作用》一文中研究指出目的：异种移植是解决目前器官移植中供体严重不足现状的可能途径。异种心脏移植后将面临剧烈的超急性排斥反应(HAR)。延迟性异种移植排斥反应(DXR)是异种移植超急性排斥反应被避免或者抑制后发生的一种反应，表现为内皮细胞激活，单核细胞、NK细胞浸润，细胞因子、粘附分子表达上调，血小板聚集，血栓形成。通过转基因猪成功克服了HAR后的几天内，将出现DXR。研究表明免疫激活与凝血激活是相互关联的两个重要因素。抗凝治疗成为对抗DXR的重要方法之一。本研究应用中药川芎嗪、丹参或西药阿司匹林、低分子量肝素联合对抗DXR，以找到能够延长移植物存活时间的有效抗凝治疗方法。 方法：用离子交换层析与凝胶过滤层析的方法从中华眼镜蛇毒冻干粉中提取眼镜蛇毒因子。在豚鼠—大鼠异种心脏移植中，给以眼镜蛇毒因子以避免发生超急性排斥反应，制作延迟性排斥反应模型。然后分别分组给予相应药物治疗，并与地塞米松合用，观察移植物排斥。 结果：各组移植物平均存活时间：超急性排斥组17±4分钟，延迟性排斥组41±3小时，应用肝素加阿司匹林组43±3小时，粉防己碱组42±3小时，川芎嗪加丹参组61±4小时，地塞米松组53±2小时，川芎嗪加丹参与地塞米松组61±2小时。经统计学分析，与延迟性排斥组相比，肝素加阿司匹林组和粉防己碱组无显着性差别(p＞0.05)，地塞米松组、川芎嗪加丹参组、地塞米松和川芎嗪加丹参联用组有极显着差异(p＜0.01)。川芎嗪加丹参组与川芎嗪加丹参和地塞米松联用相比无显着性差异(p＞0.05)。 结论 延迟性异种移植排斥反应中，较大剂量低分子量肝素加阿司匹林、单用粉防己碱未能有效延长移植物存活时间，川芎嗪加丹参、单用地塞米松可以显着延长移植物存活时间，但是川芎嗪加丹参与地塞米松联合未能进一步延长存活时间。移植物的延迟性排斥反应未能最终避免。(本文来源于《汕头大学》期刊2003-05-01）
延迟性异种排斥反应论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:器官移植现在已经成为治疗终末期器官功能衰竭的有效手段,为缓解临床同种供体的不足,异种器官作为最可能的供体来源越来越受到重视。然而,异种器官移植作为远缘移植,其面临的排斥反应较同种移植更为强烈、复杂。异种器官移植排斥反应包括超急排(HAR)、延迟性排斥(DXR)、急性细胞性排斥(ACR)、移植物慢性失功(CGD)四个阶段。目前HAR被大量研究普遍认为已有方法(转基因猪、天然抗体抑制剂等)克服,接下来异种移植研究亟待克服的主要障碍是DXR,在这一过程中,由诱生抗体诱导的移植物Ⅱ型血管内皮细胞激活是异种移植物被排斥、功能丧失的关键。而核转录因子κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)对Ⅱ型血管内皮细胞激活起关键性作用。现已表明NF-κB的功能涉及到免疫反应、胸腺发育、胚胎发生、炎症和急性反应、细胞繁殖、细胞凋亡、病毒感染和其他多种病理过程。但尚未见有应用于研究心脏移植抗排斥方面。小鼠→大鼠心脏移植不发生HAR,而直接表现DXR,是研究DXR的理想动物模型。我们现拟利用RNA干扰(RNAi)技术特异性地抑制小鼠心脏核因子κB(NF-κB)的表达,以期抑制异种移植延迟性排斥反应中Ⅱ型血管内皮细胞的激活,从而克服或减弱DXR,探讨RNA干扰技术在异种器官移植中的应用前景。方法:1.设计并化学合成针对小鼠NF-κB p65的siRNA,合成时对用于转染后示踪的部分siRNA进行荧光素FAM标记。2.小鼠血管内皮细胞(EOMA)的体外转染。分组:(1)空白对照组(细胞内不加任何干扰因素);(2)阴性对照组(细胞转染阴性对照siRNA,即siRNA-NC);(3)实验组(细胞转染NF-κB siRNA)。于转染前一天,接种EOMA细胞,在转染后的24h~72h时提取各组细胞总RNA,行RT-PCR测定细胞内NF-κB p65 mRNA水平;提取各组细胞总蛋白,行Western blot测定NF-κB p65蛋白表达。3.将转染混合物(含2OD阴性对照siRNA)经颈静脉或尾静脉注入实验小鼠。48h后获取心、肺、肝、肾标本,快速冰冻切片荧光显微镜观察体内组织分布,对尾静脉途径与颈静脉途径对组织分布的影响进行比较。4.将转染复合物(含2OD siRNA-NC)经颈静脉注入小鼠,在从1小时到1周的五个时间点摘除心、肝、肺、肾四个器官切片行荧光显微镜检查。将2OD NF-κB p65siRNA和阳离子聚合物in vivo-jetPEI形成的复合物静脉注入成年小鼠,注射后第1、3、5、7天的五个时间点摘取心脏,提取总RNA,行Real-time PCR检查各时间点NF-κB p65mRNA水平动态变化。5.为分析剂量效应关系,实验分五组,每组3只小鼠,四组动物单次注射siRNA和in vivo-jetPEI复合物,siRNA量各组分别为1OD, 2OD, 3OD和4OD,in vivo-jetPEI量按N/P ratio=6和siRNA的量相应配置。其中一假手术组注射同等体积PBS溶液作对照。72h后获取小鼠心脏,行定量RT-PCR测定NF-κB p65 mRNA的表达。6.实验分四组,每组叁只小鼠均被注射相同剂量的复合物(含2OD siRNA),实验动物的存活情况被连续观察一周。第1、3、5、7天抽血检测血清主要生化指标。7.分别将siRNA-NC和NF-κB p65 siRNA经in vivo-jetPEI乳化形成的复合物(含2ODsiRNA)一次性经颈静脉注入小鼠,注射后24h摘取心脏,提取总RNA,行Real-time PCR检测NF-κB p65和下游基因ICAM-1、VCAM-1、IL-1a mRNA水平。8.将2ODsiRNA-NC和NF-κB p65 siRNA经in vivo-jetPEI乳化形成的复合物经颈静脉转染小鼠,48h后小鼠心脏移植至大鼠颈部,观察供心存活时间、病理学改变、心脏NF-κB p65的表达和相关粘附分子、细胞因子基因mRNA水平以及大鼠体内诱生抗体移植前后水平变化。结果:1.NF-κB p65 siRNA和阴性对照siRNA均能被阳离子脂质体转染培养细胞,转染效率几近90%。RT-PCR检测发现转染NF-κB p65 siRNA后mRNA的表达水平下调明显,而转染阴性对照siRNA则无干扰效应。2.经尾静脉途径注射,siRNA主要分布于肝脏,心脏和肺分布极少;经颈静脉途径注射则心脏和肺可以获得较多的分布。3.将转染复合物(含2OD siRNA-NC)一次性经颈静脉注入小鼠,结果:在注射后1小时仅肝和肺看到荧光染色,24小时后在心、肺、肝、肾四个器官都看到了荧光染色,并在48h至72h间达到最高,1w时又见减弱。4.将2OD NF-κB p65 siRNA转染复合物经颈静脉注射后第1、3、5、7天的五个时间点监测到NF-κB p65基因表达均受到抑制,沉默效应大于50%,与假手术组和正常小鼠相比P<0.05。5.目的基因NF-κB p65mRNA表达在2OD~4OD剂量组出现明显下调(与1OD组相比较P<0.05),但各组间差别不大(P>0.05),而1OD组表达下降程度轻微(与假手术组相比P>0.05)。6.转染动物均存活,其活力和食欲无任何改变;除了一只小鼠在注射后第一天ALT升高至337U/L,第叁天降至正常范围外,所有受试动物的主要生化指标在转染后均未受明显影响。7.剂量为2OD时NF-κB p65 siRNA体内转染小鼠,其心脏NF-κB p65和下游基因ICAM-1、VCAM-1、IL-1a mRNA的表达均下调。8.转染siRNA 48h后,小鼠心脏移植至大鼠颈部。无处理组(单纯将小鼠心脏移植到大鼠颈部)供心平均存活时间为(1.80±0.83)d。对照组(转染siRNA-NC的小鼠心脏移植到大鼠颈部)供心存活时间无延长(与无处理组比较,P>0.05),平均存活时间为(1.60±0.87)d。实验组(转染NF-κB p65 siRNA的小鼠心脏移植到大鼠颈部)见供心存活时间明显延长(与无处理组比较,*P<0.01),移植物平均存活时间为(5.17±1.63)d。9.供心未排斥时,对照组和实验组移植心脏光镜下可见心肌组织排列整齐,部分细胞可见轻度水肿,间质炎症细胞浸润和少量淋巴细胞浸润;电镜下血管内皮肿胀在对照组表现较明显,而实验组表现为部分内皮细胞凋亡。发生排斥时,对照组和实验组供心光镜下见心肌细胞广泛水肿,排列变紊乱,心肌组织间大量的出血,大量炎细胞和少量单个核细胞和淋巴细胞浸润;电镜下实验组和对照组一致呈现部分血管内皮细胞胞质肿胀、粗面内质网增生的激活表现。10.阴性对照组未排斥时供心NF-κB p65 mRNA表达升高,但与正常心肌相比P>0.05;排斥时供心NF-κB p65 mRNA高表达,与正常心肌相比较P<0.05。实验组未排斥时供心NF-κB p65 mRNA表达明显下降,与正常心肌相比较<0.05;排斥时供心NF-κB p65 mRNA仍高表达,但与正常心肌相比较P>0.05。11.阴性对照组供心水平在移植后较正常小鼠心脏明显升高(siNCn VS N, p<0.05; siNCp VS N, p<0.01),且排斥后较排斥前升高更明显(siNCp VS siNCn, P<0.05)。实验组供心VCAM-1 mRNA水平在移植后较正常小鼠心脏明显下降(p<0.01),排斥后表达又明显升高,高于正常水平且与正常心脏相比p<0.01。12.阴性对照组供心移植后ICAM-1 mRNA水平较正常小鼠心脏明显升高(p<0.05),且排斥前后无明显差别(P>0.05)。实验组供心移植后ICAM-1 mRNA水平较正常小鼠心脏明显下降(p<0.05),排斥后表达又升高,但与正常心脏相比别p>0.05。13.阴性对照组供心移植后IL-1a mRNA水平较正常小鼠心脏明显升高(p<0.01),且排斥前后无明显差别(P>0.05)。实验组供心移植后IL-1a mRNA水平较正常小鼠心脏明显下降(p<0.05),但排斥后表达明显升高,与正常心脏相比别p<0.01。14.无处理组(单纯将小鼠心脏移植到大鼠颈部)、对照组(将转染siRNA-NC的小鼠心脏移植到大鼠)、实验组(将转染NF-κB p65 siRNA的小鼠心脏移植到大鼠颈部)叁组间受体外周血IgM、IgG水平在移植前、移植后均无明显差异(P>0.05);各组的IgM、IgG水平在移植后较移植前均明显升高(P<0.05)。结论:1.阳离子脂质体Lipofectamine?2000可在小鼠EOMA细胞高效转染化学合成的NF-κB p65 siRNA。2.细胞转染NF-κB p65 siRNA可实现内源性RNA降解,抑制相应的功能蛋白表达;本实验设计针对NF-κB p65的siRNA序列有效,适宜进行体内转染研究。3.颈静脉注射途径是靶向心脏体内转染研究的理想途径。4.颈静脉注射NF-κB p65 siRNA/in vivo-jetPEI复合物能介导ICR小鼠心脏的NF-κB p65基因表达沉默;且获得50%以上沉默效应的siRNA最小剂量为2OD。5. NF-κB p65 siRNA(剂量2OD)转染ICR小鼠后48h至72h心脏siRNA表达最高,是进行心脏移植的最佳时间。6.剂量为2OD时NF-κB p65 siRNA体内转染对ICR鼠是安全的。7.体内转染NF-κB p65 siRNA(剂量2OD)可抑制小鼠心脏NF-κB p65蛋白水平,实现NF-κB下游靶基因转录的有效抑制。8.体内转染NF-κB p65 siRNA(剂量2OD)使小鼠供心存活时间延长。9.体内转染NF-κB p65 siRNA(剂量2OD),小鼠供心未排斥时血管内皮细胞表现为凋亡,而发生排斥时表现为激活。10.体内转染NF-κB p65 siRNA(剂量2OD)可抑制心脏移植后内环境刺激下的供心NF-κB表达和下游基因ICAM-1、VCAM-1、IL-1αmRNA水平。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
延迟性异种排斥反应论文参考文献
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