基于微滴式和芯片式数字PCR技术的转基因克螟稻成分的定量检测

基于微滴式和芯片式数字PCR技术的转基因克螟稻成分的定量检测

论文摘要

以转基因克螟稻品系为研究对象,通过大米内源蔗糖磷酸合成酶基因和转基因克螟稻品系特异性序列的绝对拷贝数分析,建立转基因克螟稻成分的双重数字聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)定量分析方法。本研究中转基因克螟稻定量体系中最适DNA添加量在10 pg~13 ng之间,模板断裂程度、PCR扩增退火温度等因素对定量结果的影响不大。其定量的绝对灵敏度达1 copies/μL,可在微滴式和芯片式数字PCR平台上准确检测质量分数在0.1%~100%之间的转基因克螟稻成分,尤其是对低于1%的样品,其定量准确性高于传统的实时荧光PCR方法。本研究建立的转基因克螟稻成分定量分析方法适用性较好,可用于转基因水稻规范化与标准化的定量分析。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与试剂
  •   1.2 仪器与设备
  •   1.3 方法
  •     1.3.1 基因组DNA提取
  •     1.3.2 引物和探针的设计及合成
  •     1.3.3 扩增体系和反应参数
  •       1.3.3. 1 数字PCR扩增体系
  •       1.3.3. 2 数字PCR扩增参数及数据分析
  •       1.3.3. 3 实时荧光PCR扩增体系和参数
  •     1.3.4 引物探针的筛选及其特异性
  •     1.3.5 转基因克螟稻定量体系的条件优化
  •     1.3.6 转基因克螟稻定量方法在芯片式数字PCR平台上的适用性
  •     1.3.7 转基因克螟稻定量的绝对灵敏度和线性范围
  •     1.3.8 数字PCR与实时荧光PCR对不同含量转基因克螟稻的测定
  •   1.4 数据分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 引物探针筛选
  •   2.2 转基因克螟稻微滴式数字PCR定量体系的条件优化
  •   2.3 转基因克螟稻定量绝对灵敏度和线性范围
  •   2.4 转基因克螟稻数字PCR定量结果与实时荧光PCR方法定量结果比较
  • 3 讨论与结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 邓婷婷,黄文胜,葛毅强,陈颖

    关键词: 转基因大米,克螟稻,定量,数字聚合酶链式反应

    来源: 食品科学 2019年08期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 中国农业大学食品科学与营养工程学院,中国检验检疫科学研究院,科技部中国农村技术开发中心

    基金: 国家转基因生物新品种培育重大专项(2018ZX08012-001)

    分类号: TS210.7

    页码: 311-318

    总页数: 8

    文件大小: 2524K

    下载量: 216

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