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新城疫弱毒疫苗中禽腺病毒和鸡传染性贫血病毒混合污染的鉴定及人工模拟致病性分析

2020-12-02阅读(557)

新城疫弱毒疫苗中禽腺病毒和鸡传染性贫血病毒混合污染的鉴定及人工模拟致病性分析

论文摘要

19世纪50年代以来,新城疫弱毒疫苗在世界范围内广泛应用,为新城疫（Newcastle disease,ND）预防和控制取得了辉煌的成就。但研究显示弱毒疫苗中可能存在外源病毒的污染,进而导致多种疫病在被免疫鸡群中的发生。本研究在对禽用弱毒疫苗进行外源病毒检测时通过PCR结合斑点杂交方法也发现在同一批新城疫弱毒疫苗中存在4型禽腺病毒（fowl adenovirus type 4,FAdV-4）和鸡传染性贫血病毒（chicken infectious anemia virus,CIAV）的混合污染,随后本研究通过血清中和及鸡胚培养的方式对上述两种病毒进行了分离纯化并测定了CIAV的全基因组以及FAdV的部分hexon基因。序列比较和遗传进化分析显示其与目前中国流行株具有较高的同源性。为评估NDV弱毒疫苗中FAdV-4和CIAV混合污染的致病性,本研究通过制备人工模拟污染疫苗并分别免疫SPF和FAdV母源抗体阳性鸡群进行了系统的动物实验。结果显示,使用单独污染CIAV或无污染的疫苗并不会引发SPF鸡死亡,而使用混合污染疫苗能引发明显的心包积液-包涵体肝炎综合征（inclusion body hepatitis-hydropericardium syndrome,IBH-HPS）并导致高达75.0%的死亡率,显著高于使用单独污染FAdV疫苗后所引发的死亡率（3.70%7.40%）。同时,通过疫苗污染而感染的外源病毒可在鸡体能持续增殖,引发生长迟缓和胸腺萎缩,进而造成免疫抑制并显著降低NDV抗体水平。另一方面,NDV弱毒疫苗本身在外源病毒致病过程中发挥重要作用,FAdV-4和CIAV通过疫苗污染方式感染鸡群的致病性要显著高于其直接感染,且同等剂量FAdV-4和CIAV经口服感染SPF鸡群后并不会导致死亡。同时,外源病毒与疫苗毒株LaSota的相互作用促进了彼此在多种器官中的增殖并能有效降低宿主免疫系统产生的中和抗体水平,而多种器官中过高的LaSota病毒载量以及外源病毒的存在激发了疫苗毒株的致病性导致被免疫鸡群发生典型的淋巴滤泡出血以及腺胃点状出血等ND示病症状,最终进一步加重病情。母源抗体是保护雏鸡早期免受病毒侵袭的重要屏障,但本研究显示雏鸡孵化后母源抗体水平于三日龄到达高峰,随后迅速下降,至7日龄疫苗接种时已降至较低水平,但其与免疫系统的双重作用仍能有效抑制通过人工模拟污染疫苗单独感染的FAdV-4,而混合污染疫苗中CIAV的存在能抑制免疫反应进而辅助FAdV突破母源抗体的保护,并最终引发明显的IBH-HPS以及15%左右的死亡率。临床数据显示,部分养殖场在使用了无外源病毒污染的NDV弱毒疫苗后同样爆发了IBH-HPS,而同批未免疫鸡群发病率较低。研究发现,免疫NDV弱毒疫苗能促进FAdV和CIAV在宿主体内的复制,进而显著提升其经垂直传播感染的致病性并加速病程,引发明显的贫血症状并导致IBH-HPS在低日龄雏鸡中发生。

论文目录

  • 符号说明
  • 中文摘要
  • Abstract
  • 1 前言
  •   1.1 新城疫（Newcastle disease,ND）
  •     1.1.1 发现与命名
  •     1.1.2 化学组成与结构学特点
  •     1.1.3 生物学特性
  •     1.1.4 病毒复制周期与培养特性
  •     1.1.5 理化性质
  •     1.1.6 毒株分类
  •     1.1.7 流行病学
  •     1.1.8 致病性
  •     1.1.9 诊断
  •     1.1.10 免疫与综合防治
  •   1.2 鸡传染性贫血病毒（Chicken Infectious Anemia Virus,CIAV）
  •     1.2.1 发现与命名
  •     1.2.2 化学组成与结构特点
  •     1.2.3 生物学特性
  •     1.2.4 病毒复制周期与培养特性
  •     1.2.5 理化性质
  •     1.2.6 毒株分类
  •     1.2.7 流行病学
  •     1.2.8 致病性
  •     1.2.9 诊断
  •     1.2.10 免疫与综合防治
  •   1.3 禽腺病毒（Fowl adenovirus,FAdV）
  •     1.3.1 发现与命名
  •     1.3.2 化学组成和结构特点
  •     1.3.3 生物学特性
  •     1.3.4 病毒复制周期和培养特性
  •     1.3.5 理化性质
  •     1.3.6 毒株分类
  •     1.3.7 流行病学
  •     1.3.8 致病性
  •     1.3.9 诊断
  •     1.3.10 免疫与综合防治
  •   1.4 疫苗外源病毒污染研究现状
  •     1.4.1 产生原因
  •     1.4.2 研究进展
  •   1.5 研究目的和意义
  • 2 材料和方法
  •   2.1 材料
  •     2.1.1 疫苗来源
  •     2.1.2 单因子血清
  •     2.1.3 实验动物与SPF动物饲养设备
  •     2.1.4 主要试剂与仪器
  •     2.1.5 其他试剂配制
  •   2.2 实验方法
  •     2.2.1 疫苗中外源病毒污染的检测
  •     2.2.2 疫苗中外源病毒的分离和鉴定
  •     2.2.3 疫苗中外源病毒部分基因扩增和测序分析
  •     2.2.4 FAdV和 CIAV混合污染疫苗危害分析
  •     2.2.5 NDV弱毒疫苗对外源病毒感染宿主过程的影响
  •     2.2.6 混合污染疫苗突破母源抗体保护
  •     2.2.7 新城疫弱毒疫苗免疫对先天感染FAdV和 CIAV致病性的影响
  •     2.2.8 数据处理与分析
  • 3 结果
  •   3.1 发病场所用弱毒疫苗外源病毒检测及分析
  •     3.1.1 新城疫弱毒疫苗中存在FAdV和 CIAV的混合污染
  •     3.1.2 疫苗中污染的FAdV和 CIAV的分离和鉴定
  •     3.1.3 疫苗中FAdV和 CIAV的分离鉴定与序列分析
  •   3.2 FAdV和 CIAV混合污染疫苗危害分析
  •     3.2.1 混合污染疫苗使用引发鸡群心包积液综合征及大幅死亡
  •     3.2.2 混合污染疫苗使用引发严重的生长迟缓
  •     3.2.3 混合污染疫苗使用影响免疫器官发育
  •     3.2.4 混合污染疫苗使用后NDV抗体水平明显降低
  •     3.2.5 混合污染疫苗使用后FAdV和 CIAV复制动态
  •     3.2.6 混合污染疫苗使用后FAdV和 CIAV在不同器官中的分布
  •   3.3 NDV弱毒疫苗对外源病毒感染宿主过程的影响
  •     3.3.1 LaSota的存在是诱发鸡死亡的必要因素
  •     3.3.2 LaSota加重了FAdV和 CIAV混合感染对体重增长的抑制作用
  •     3.3.3 LaSota加剧了FAdV和 CIAV混合感染对免疫器官的损伤
  •     3.3.4 LaSota明显影响FAdV和 CIAV在不同器官中的分布
  •     3.3.5 LaSota能显著提升FAdV和 CIAV病毒血症水平
  •     3.3.6 LaSota能显著降低FAdV和 CIAV抗体水平
  •     3.3.7 FAdV和 CIAV混合感染激活增强了LaSota的致病性
  •   3.4 母源抗体与污染疫苗中外源病毒的
  •     3.4.1 混合感染能突破母源抗体保护引发心包积液综合征
  •     3.4.2 混合污染疫苗造成海兰褐鸡体重降低
  •     3.4.3 混合污染疫苗影响海兰褐鸡免疫器官发育
  •     3.4.4 混合污染疫苗影响NDV抗体水平
  •     3.4.5 混合污染疫苗使用后FAdV和 CIAV抗体动态
  •     3.4.6 混合污染疫苗使用后FAdV和 CIAV复制动态
  •   3.5 NDV弱毒疫苗免疫对垂直感染FAdV和 CIAV致病性的影响
  •     3.5.1 NDV弱毒疫苗免疫激发经垂直传播感染FAdV和 CIAV的致病性
  •     3.5.2 LaSota影响了感染FAdV和 CIAV鸡多个血液指标
  • 4 讨论
  •   4.1 混合污染FAdV和 CIAV新城疫弱毒疫苗的使用是造成鸡群心包积液-包涵体肝炎爆发的重要原因
  •   4.2 LaSota弱毒疫苗是外源病毒致病性的关键因素
  •   4.3 母源抗体无法保护鸡群不受混合污染疫苗中外源病毒的影响
  •   4.4 NDV弱毒疫苗免疫能激发FAdV和 CIAV感染的致病性
  • 5 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 攻读学位期间发表论文

    • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 苏奇

    导师: 赵鹏

    关键词: 新城疫病毒,疫苗污染,禽腺病毒,鸡传染性贫血病毒,母源抗体

    来源: 山东农业大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 山东农业大学

    基金: 十三五国家重点研发计划课题(2018YFD0500106)

    分类号: S852.65

    总页数: 96

    文件大小: 4877K

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