四株猪伪狂犬病毒株的分离鉴定与主要毒力基因分析

四株猪伪狂犬病毒株的分离鉴定与主要毒力基因分析

论文摘要

猪伪狂犬病毒(PRV)的流行对中国养猪业造成巨大损失,而2011年后许多已免疫PRV疫苗的猪场频繁出现gE抗体转为阳性现象,感染猪出现PRV的临床症状,并出现所谓的"流产风暴",学者们怀疑PRV的重新流行与病毒毒力增强和基因变异有关。为了解PRV变异情况,从各地疑似PRV阳性病料中,通过PK-15细胞分离出4个毒株,对毒株传代培养,进行TCID50与LD50测定,对主要毒力基因gB、gC、gE和TK进行扩增测序后分析,确定该4株病毒为PRV株,分别命名为FJ01株、FJ03株、YK株和MS2018株,滴度分别为10-6.63、10-7.08、10-8.10、10-7.18TCID50s·0.1mL-1,对Balb/c小鼠的LD50分别为102.17、102.72、103.44、103.51TCID50s,可见FJ01株的毒力最强。对4个毒株的毒力基因与其他PRV毒株进行同源性比对并建立进化树,FJ01株、FJ03株、MS2018株与中国近几年流行的变异毒株如HNX株、HNB株、JS-2012株等在一个大进化分支上,亲缘性较近,而与疫苗株Bartha-K61、SA215等,国际经典毒株Becker、Kaplan等亲缘性较远,变异较大。YK株与国际毒株亲缘性更近,其原因有待进一步探索。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 病料与实验动物
  •     1.1.2 主要试剂
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 病猪的病理解剖与病料处理
  •     1.2.2 引物设计与合成
  •     1.2.3 病毒DNA的提取
  •     1.2.4 病料PCR鉴定
  •     1.2.5 病毒分离培养
  •     1.2.6 病毒TCID50测定
  •     1.2.7 小鼠LD50测定
  •     1.2.8 gB、gC、gE和TK全基因测序
  •     1.2.9 毒力基因全基因序列分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 PRV的分离鉴定
  •     2.1.1 病理剖检结果
  •     2.1.2 病料检测结果
  •     2.1.3 病毒的分离
  •     2.1.4 病毒液的PCR鉴定
  •     2.1.5 病毒滴度测定
  •     2.1.6 小鼠LD50测定
  •   2.2 PRV分离株的gB、gC、gE和TK基因的序列分析
  •     2.2.1 gB基因
  •     2.2.2 gC基因
  •     2.2.3 gE基因
  •     2.2.4 TK基因
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 易可可,阴文奇,周远成,蒋金蓁,张白玉,李中银,颜其贵

    关键词: 猪伪狂犬病毒,分离鉴定,毒力基因,序列分析

    来源: 浙江农业学报 2019年09期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 四川农业大学动物医学院,四川省畜牧科学研究院,四川华神兽用生物制品有限公司

    分类号: S852.651

    页码: 1429-1436

    总页数: 8

    文件大小: 749K

    下载量: 163

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