导读:本文包含了丝裂原活化蛋白酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:激酶,蛋白,蛋白酶,细胞,基质,酪氨酸,骨架。
丝裂原活化蛋白酶论文文献综述
赵东杰,李琪,王玉华,董莎,常磊[1]（2019）在《针刺对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠磷酸化P38丝裂原活化蛋白酶和血清白介素1β的影响》一文中研究指出目的观察针刺对实验性自身免疫性脑脊髓炎(encephalomyelitis,EAE)小鼠神经系统损伤症状的改善程度和脊髓磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(phosphorylated P38 mitogen-activated protease,p-p38MAPK)及血清IL-1β的影响,初步探究针刺对多发性硬化(multiple sclerosis,MS)实验动物模型-EAE小鼠的治疗作用和机制。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、模型+针刺组(针刺组)、模型+激素组(激素组),每组10只。除空白组外,其余各组小鼠采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白33-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 33-55,MOG_(33-55))与完全弗氏佐剂诱导建立EAE模型。各组自造模第14天开始,每日上午同一时间干预治疗。空白组和模型组每日抓取、固定,并用生理盐水[0.1 mL/(10 g·d)]灌胃;针刺组针刺小鼠"大椎"、双侧"足叁里""肾俞"穴15分钟;激素组用醋酸泼尼松龙(0.6 mg/mL)灌胃[0.1 mL/(10 g·d)]治疗;以上各组均连续干预治疗15天。从造模当天开始,隔日测量体质量和神经功能评分评价小鼠行为学变化;于免疫第28天对各组小鼠进行眼球采血并留取脊髓组织,采用LFB染色技术检测小鼠脊髓脱髓鞘损伤程度;分别采用酶联免疫吸附法和蛋白质免疫印迹法检测小鼠血清IL-1β的含量及脊髓组织p-p38MAPK蛋白表达。结果针刺组和激素组小鼠体质量明显增加,神经功能评分明显降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,针刺组及激素组小鼠脊髓脱髓鞘程度明显减轻;免疫第28天时,模型组小鼠血清IL-1β表达与空白组相比水平升高(P<0.05);针刺组与激素组小鼠血清IL-1β水平与模型组相比均降低(P<0. 05);模型组小鼠脊髓p-p38MAPK蛋白表达水平比空白组表达水平升高(P<0.05);而针刺组与激素组小鼠脊髓p-p38MAPK蛋白水平与模型组相比均降低(P<0.05)。结论针刺可以明显改善EAE小鼠神经系统损伤症状,降低EAE小鼠的神经功能评分;针刺缓解EAE模型小鼠神经系统损伤症状的机制可能与其能抑制EAE小鼠脊髓p38MAPK蛋白激活及其能降低小鼠血清IL-1β的表达水平有关。(本文来源于《环球中医药》期刊2019年04期）
张蓓[2]（2017）在《丝裂原活化蛋白激酶、钙蛋白酶和膜联蛋白A5在醛固酮诱导原代心肌细胞凋亡中的分子机制及相关临床研究》一文中研究指出目的:1.研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、钙蛋白酶(calpain)和膜联蛋白A5(ANXA5)信号转导系统在醛固酮(ALD)诱导心肌细胞凋亡过程中的作用,了解calpain、ANXA5、MAPKs之间的调控关系,阐明ALD诱导心肌细胞凋亡的关键作用机制。2.观察氧化苦参碱(OMT)减轻ALD诱导心肌细胞损伤这一保护作用中MAPKs、calpain和ANXA5表达的变化,进一步阐释ALD诱导心肌细胞损伤的分子机制,寻找防治心肌细胞凋亡的有效作用靶点。3.阐明ANXA5基因多态性与原发性高血压左心室肥厚易感性的关系,为左心室肥厚的分子机制提供新的线索。方法:1.采用0.06%胰酶消化、差速贴壁法分离纯化1-3d SD新生大鼠心肌细胞做原代培养。用倒置显微镜观察细胞形态学改变,心肌细胞特异性肌钙蛋白免疫细胞化学鉴定心肌细胞及其纯度。MTT探索ALD损伤心肌细胞的最佳作用浓度及作用时间。建立ALD诱导心肌细胞凋亡模型,并用MTT法和流式细胞仪验证。基因芯片检查MAPKs、calpain、ANXA5基因表达,Real-time PCR、Western-blotting法检测calpain1、calpain2、p38、JNK、ERK、ANXA5、p-caspase3的m RNA和蛋白表达水平。实验分对照组、ALD组、ALD+anti-calpain1组、ALD+anti-calpain2组、ALD+anti-P38组、ALD+anti-ERK组、ALD+anti-JNK组。对各组细胞采用Real-time PCR和Western-blotting法检测calpain1、calpain2、p38、JNK、ERK m RNA和蛋白表达水平。抗ANXA5干预ALD诱导的心肌后,Western-blotting法检测calpain1、calpain2、p38表达。2.原代心肌细胞用氧化苦参碱(OMT)干预,分为对照组、ALD组、ALD+L-OMT组(L低剂量,OMT浓度25μg/ml)、ALD+H-OMT组(H高剂量,OMT浓度50μg/ml)、ALD+阿司匹林组和ALD+螺内酯组。各组细胞采用MTT法检测细胞凋亡,LDH检测细胞毒性,Giemsa染色和HE染色观察细胞形态,Real-time PCR和Western-blotting法检测calpain1、calpain2和p38、ANXA5m RNA和蛋白表达水平。3.研究对象为贵州省贵州医科大学附属医院原发性高血压患者,共850例。其中包括337例原发性高血压伴左心室肥厚患者,513例原发性高血压非左心室肥厚患者。所有入选者均进行心脏超声的检测并采集外周静脉血。SNa Pshot法检测实验对象外周静脉血中ANXA5基因多态性,观察高血压人群外周静脉血中ANXA5基因多态性与原发性高血压并发左室肥厚发病率之间的关系。结果:1.胰酶消化法成功分离培养原代心肌细胞并经肌钙蛋白免疫细胞化学鉴定显示心肌细胞阳性率达95%以上。用MTT检测确定ALD最佳浓度为10-5mol/L,最佳作用时间为48小时,此条件下ALD诱导心肌细胞凋亡率达37.8%。10-5mol/L浓度下ALD作用48h后心肌细胞的基因表达结果:较对照组比较ANXA5增高9.63倍,p38增高4.05倍,calpain1、calpain2增高3.31倍和2.16倍,JNK、ERK1/2增高1.43和1.62倍。10-5mol/L浓度下ALD作用48h后心肌细胞中calpain1、calpain2、p38、p-p38、ANXA5、p-caspase3蛋白表达增加,m RNA表达增加(p<0.05),JNK、p-JNK、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达增加不明显,m RNA表达增高但差异无统计学差异(p>0.05)。anti-calpain1干预ALD诱导的心肌细胞后,calpain1、calpain2和p38 m RNA水平显着降低(p<0.05),表明calpain1的蛋白及m RNA表达对calpain2、p38蛋白及m RNA表达有影响,对ERK1/2、JNK蛋白及m RNA表达没有影响;anti-calpain2干预后,calpain2和p38 m RNA水平显着降低(p<0.05),表明calpain2的蛋白及m RNA表达对p38蛋白及m RNA表达有影响,对calpain1、ERK1/2、JNK蛋白及m RNA表达没有影响;anti-p38、anti-JNK,anti-ERK干预后,分别有p38、JNK、ERK1/2 m RNA水平显着降低(p<0.05),表明p38、JNK、ERK1/2的蛋白及m RNA表达对calpain1、calpain2蛋白及m RNA表达没有影响,这叁者之间也没有相互影响。anti-calpain1,anti-calpain2,anti-JNK,anti-ERK,anti-p38干预ALD诱导的心肌细胞后,ant-calpain1、ant-calpain2、ant-p38组心肌细凋亡率较ALD组显着降低(p<0.05),但仍高于对照组(p<0.05),表明与ALD诱导的心肌细胞凋亡有关的是calpain1、calpain2和p38。ANXA5抑制剂干预ALD诱导的心肌细胞中,较ALD组比较calpain1、calpain2蛋白及m RNA表达无明显改变,p38蛋白表达量降低,p38m RNA表达明显减低(p<0.001),表明ANXA5蛋白及m RNA表达对p38的蛋白和m RNA表达有影响,对calpain1、calpain2的蛋白及m RNA表达没有影响。2.MTT实验表明ALD组细胞存活率值显着低于对照组(p<0.05);ALD+L-OMT组(25μg/ml)和ALD+H-OMT组(50μg/ml)ALD+阿司匹林组和ALD+螺内酯组细胞存活率显着高于ALD组(p<0.05)。LDH外漏实验结果提示,ALD组LDH外漏率显着高于对照组(p<0.05);ALD+L-OMT组和ALD+H-OMT组、ALD+阿司匹林组和ALD+螺内酯组LDH外漏率值均显着低于ALD组(p<0.05)。心肌细胞经Giemsa染色后,细胞核被染为蓝紫红色,细胞浆染成淡红色。正常组的细胞核稍偏、大小适宜呈正常结构;ALD组的细胞肥大、胞核居中;与ALD组比较,ALD+L-OMT组、ALD+H-OMT组、ALD+阿司匹林组和ALD+螺内酯组细胞表面积减小,形态接近于正常。Western-blotting及Real-time PCR结果显示与ALD组比较,ALD+L-OMT组和ALD+H-OMT组、ALD+阿司匹林组和ALD+螺内酯组与ALD组calpain1,calpain2和p38、ANXA5蛋白表达减低,m RNA表达减低(p<0.05)。3.左室肥厚患者中ANXA5SNPs表达是一项重要的危险因素,ANXA5SNPrs1050606与高血压左心室肥厚患病易感性有统计学差异(显性患者:p=0.008;共显性患者p=0.006)。此外,也研究也证明在原发性高血压左室左室肥厚患者中,ANXA5的M1,M2单体也被证明是危险因素(p=0.022和0.032)。结论:1.ALD可以通过上调calpain1、calpain2、ANXA5和p38表达水平,激活caspase3来诱导心肌细胞凋亡。calpain、ANXA5与MAPKs之间存在调控关系,机制可能为calpain1、2通过调控ANXA5来影响p38表达,进而影响心肌细胞凋亡。2.OMT可以通过下调calpain1、calpain2、ANXA5和p38的表达水平来减轻心肌细胞凋亡。calpain1、calpain2、ANXA5和p38可以作为减轻ALD诱导的心肌凋亡、改善高血压心肌重构、延缓心衰进程的关键作用靶点。3.ANXA5rs1050606,M1和M2单倍体与贵州原发性高血压人群的左心室肥厚显着相关。(本文来源于《贵州医科大学》期刊2017-05-25）
李国辉,王耀辉[3]（2015）在《p38丝裂原活化蛋白激酶途径对大鼠脑缺血再灌注后脑组织基质金属蛋白酶-9表达及脑水肿形成的影响》一文中研究指出目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径对大鼠脑缺血再灌注后脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达及脑水肿形成的影响。方法 54只SPF级雄性SD大鼠,随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)和p38抑制剂组(SB组)。采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。再灌注24 h后对大鼠进行神经功能缺损评分,Evans Blue法测定血-脑屏障通透性;干湿比重法测定脑组织含水量,采用Western blot检测缺血周边区脑组织磷酸化p38(p-p38)和MMP-9的表达。结果与Sham组相比,I/R组大鼠神经功能缺损加重(P<0.05);与I/R组相比,SB组大鼠神经功能缺损明显减轻(P<0.05)。与Sham组比较,I/R组血-脑屏障通透性及脑含水量明显增加(均P<0.05);与I/R组相比,SB组血-脑屏障通透性及脑含水量降低(均P<0.05)。与Sham组相比,I/R组大鼠缺血周边区脑组织p-p38、MMP-9的表达明显上调(均P<0.05);与I/R组相比,SB组大鼠缺血周边区脑组织p-p38、MMP-9的表达明显下调(均P<0.05)。结论 p38 MAPK参与了大鼠脑缺血再灌注后脑水肿的形成,机制可能为大鼠脑缺血再灌注后激活p38MAPK使缺血周边区脑组织MMP-9的表达上调,破坏血-脑屏障通透性,导致脑水肿发生。(本文来源于《临床神经病学杂志》期刊2015年03期）
朱国华,张琦,戴海萍,沈群[4]（2014）在《姜黄素抑制RPMI8226细胞增殖时丝裂原活化蛋白激酶及基质金属蛋白酶的表达》一文中研究指出目的姜黄素(Curcumin,Cur)对多种肿瘤细胞均具有明确的抑制增殖、诱导凋亡与部分分化、抑制迁移等方面作用。文中研究Cur体外抑制人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226增殖时丝裂原活化蛋白激酶(mitogen actived protein kinase,MAPKs)及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)家族成员的表达,探讨Cur的抗肿瘤分子机制。方法以不同浓度Cur作用RPMI8226细胞不同时间,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot检测MAPKs家族成员的表达,明胶酶谱法检测细胞培养上清中MMPs的活性。结果 Cur呈时间-剂量依赖性抑制RPMI8226细胞增殖,使细胞阻滞于G2/M期[(12.72±0.68)%vs(4.79±0.15)%]。以6.25μmol/L、12.50μmol/L及25.00μmol/L Cur分别处理RPMI8226细胞,细胞内JNK和p-JNK的表达均呈药物浓度依赖性上升(P<0.01),而ERK1/2及P38 MAPK的表达与阴性对照组相比无明显改变(P>0.05)。另各Cur处理组的细胞培养上清中MMP-2及MMP-9的活性,随着Cur药物浓度的上升而逐渐下降(P<0.01)。结论一定浓度的Cur不仅可能激活MAPKs家族中的JNK信号通路,体外诱导RPMI8226细胞的凋亡,且还可能通过抑制MMPs的活性,影响RPMI8226细胞的浸润与转移。(本文来源于《医学研究生学报》期刊2014年10期）
杨雪莲,董强,刘玲,王亮[5]（2013）在《神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂对大鼠小胶质细胞丝裂原活化蛋白激酶和核转录因子-κB信号通路的作用》一文中研究指出目的观察小胶质细胞(MG)在缺氧、缺糖(OGD)模型或组织型纤溶酶原激活剂(tPA)干预下被激活的主要信号通路,探讨神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(NSP)抑制MG进而产生神经保护作用的可能机制。方法体外原代培养大鼠皮层MG并鉴定,建立OGD模型。将MG随机分为正常组、tPA组(经终浓度为0.05μg/μL的tPA干预24h)、OGD 3h组(经OGD模型干预3h)、NSP+tPA组(经终浓度为0.025μg/μL的NSP预处理0.5h后,再以终浓度为0.05μg/μL的tPA干预24h)和NSP+OGD 3h组(经终浓度为0.025μg/μL的NSP预处理0.5h后,再经OGD模型干预3h)。采用免疫荧光双标染色法检测各干预组丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路磷酸化蛋白的表达情况和核转录因子(NF)-κB的核移位情况。采用免疫印迹法检测各组MAPK通路磷酸化蛋白表达量的变化。结果 MG纯度鉴定结果显示纯度>95%,OGD模型建立成功。免疫组织化学法检测结果显示,MAPK途径的磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)1/2、磷酸化p38(pp38)在正常组MG均有少量表达,且在tPA组和OGD 3h组的表达均显着升高;MAPK途径的磷酸化c-Jun氨基末端激酶(pJNK)在正常组MG有表达,但在tPA组和OGD 3h组的表达无明显变化。Western免疫印迹法检测结果显示,干预组(tPA组和OGD 3h组)pERK1/2、pp38和pJNK的表达量均较正常组显着升高(P值均<0.05)。NSP预处理组(NSP+tPA组和NSP+OGD 3h组)pERK1/2、pp38和pJNK的表达量均较干预组显着降低(P值均<0.05)。免疫荧光双标染色法检测结果显示,正常组MG中可见NF-κB(P65)蛋白主要表达于细胞质,细胞胞突显示清晰。tPA组和OGD 3h组MG中NF-κB发生明显的核移位现象,主要表达于细胞核,且细胞缺少胞突。NSP+tPA组和NSP+OGD 3h组MG中NF-κB的核移位现象明显减轻。结论大鼠肉瘤(Ras)/细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun-氨基末端激酶(JNK)/应激活化蛋白激酶(SAPK)和p38通路对于MG在tPA和OGD干预下的激活均起作用,其中ERK1/2和p38发挥更重要的作用。tPA和OGD干预MG后,NF-κB发生明显的核移位,此通路被激活,经NSP预处理后,各条信号通路均被不同程度抑制。(本文来源于《上海医学》期刊2013年11期）
陈欣欣,张舒,石玉镯[6]（2013）在《在肿瘤细胞模型中联合应用磷脂酰肌醇3激酶/蛋白酶B通路抑制剂BEZ235和细胞外调解蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶通路抑制剂U0126的效果》一文中研究指出目的探讨通过联合应用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白酶B(AKT)通路抑制剂BEZ235和细胞外调解蛋白激酶(ERK)通路抑制剂U0126抑制膜受体酪氨酸激酶/PI3K/AKT/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路与ERK/丝裂原活化蛋白激酶通路对细胞增殖的影响。方法以磷酸酶和张力蛋白同源物缺失(PTEN-/-)的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)系作为研究对象,联合应用PI3K、mTOR双重抑制剂BEZ235及ERK激酶抑制剂U0126,通过MTT和Western blot方法检测药物对细胞增殖的影响。结果 BEZ235及U0126对PTEN-/-MEF细胞均有抑制作用,二者半数抑制浓度分别为6.257 nmol/L及22.85μmol/L。但联合应用BEZ235与U0126,二者表现为拮抗的作用方式。结论在PTEN缺失的细胞系中或PTEN突变的肿瘤的联合靶向治疗中,不推荐应用BEZ235与U0126联合使用。(本文来源于《中国医学科学院学报》期刊2013年05期）
高怀林,王玲玲,贾振华,董小伟,朱慧明[7]（2013）在《p38丝裂原活化蛋白酶通路在内皮细胞纤维状肌动蛋白表达中的作用及通络药物的影响》一文中研究指出目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路在络气虚滞型血管内皮功能障碍模型大鼠血清诱导的内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)表达中的作用及通络药物保护血管内皮,防治血管病变的作用机制。方法首先建立络气虚滞型血管内皮功能障碍(VED)大鼠模型,用模型大鼠血清体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞株,实验分为5个组:空白对照组、正常血清组、模型血清组、通心络(TXL)组、SB203580组。采用Westem blot技术检测各组中F-actin、p38、磷酸化p38(phospho-p38)蛋白表达的变化。结果与空白对照组和正常血清组比较,模型血清组F-actin的蛋白表达明显下调(P<0.05),phospho-p38蛋白表达明显升高(P<0.01,P<0.05);与模型血清组比较,通心络组和SB203580组F-actin的蛋白表达明显升高(P<0.01)、phospho-p38蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论 p38MAPK信号通路的激活可能参与了络气虚滞型血管内皮功能障碍模型大鼠血清诱导的F-actin蛋白表达的变化及通心络可能通过抑制p38MAPK信号通路而对内皮功能起保护作用的,这可能是通心络防治血管病变的机制之一。(本文来源于《首届中西医血管病学大会论文汇编》期刊2013-07-14）
付文娟,王承敏,全超,杨克敌[8]（2013）在《双酚A对大鼠睾丸支持细胞P38丝裂原活化蛋白激酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3表达的影响》一文中研究指出目的研究双酚A(bisphenol A,BPA)对离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞P38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)及相关凋亡基因表达的影响。方法将睾丸支持细胞分别暴露于0(溶剂对照)、30、50、70μmol/L的BPA。采用MTT法检测离体培养细胞活力,采用RT-PCR的方法检测p38 MAPK、caspase-3、FasL、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)mRNA的相对表达情况,采用western-blotting的方法检测细胞中P38 MAPK、磷酸化P38 MAPK和caspase-3酶原蛋白的表达情况。结果与溶剂对照组相比,30μmol/L BPA组支持细胞p38 MAPK mRNA的相对表达量升高,而50μmol/L BPA组p38 MAPK的表达明显降低(P<0.05);各浓度BPA染毒组caspase-3 mRNA的相对表达量均较高(P<0.05);仅50μmol/L BPA组TNF-αmRNA的相对表达量增加(P<0.05);50、70μmol/L BPA组FasL mRNA的相对表达量增加(P<0.05);各剂量BPA染毒组总P38MAPK蛋白的相对表达量无显着变化;50和70μmol/L BPA组磷酸化P38 MAPK蛋白的相对表达量均明显升高(P<0.05);仅70μmol/L BPA组caspase-3酶原蛋白的相对表达量下降(P<0.05)。结论 BPA可激活离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞p38 MAPK,并诱发caspase-3活化,导致细胞凋亡,这可能是通过FasL凋亡途径介导的。(本文来源于《环境与健康杂志》期刊2013年06期）
李青波,徐学武,王宝宁,钟京[9]（2012）在《重复高压氧预处理对大鼠脑皮层神经元缺氧损伤中丝裂原活化蛋白酶p38蛋白及其活化状态的影响》一文中研究指出目的观察重复高压氧预处理对大鼠脑皮层神经元缺氧损伤中丝裂原活化蛋白激酶p38(p38 MAPK)与其活化状态P-p38 MAPK蛋白表达水平的影响。方法原代培养的大鼠脑皮层神经元分为4组:正常对照组(Con组),细胞置常规培养箱内培养;高压氧预处理组(P组),培养细胞行0.35 MPa、2 h高压氧预处理,1次/d,连续3 d;缺氧处理组(H组),细胞置叁气培养箱内培养4 h,设置培养条件为95%N2、5%CO2;高压氧预处理加缺氧处理组(PH组),高压氧预处理后行缺氧处理,条件设置同上,每项实验操作3次。四组细胞均在处理4 h后行免疫细胞化学染色和免疫蛋白印迹(Western blot)检测。实验数据采用单因素方差分析进行统计。结果 p38 MAPK表达水平在各组之间差异无统计学意义;缺氧损伤后,H组P-p38 MAPK水平比Con组高(q=8.15,P<0.01);高压氧预处理使PH组神经元P-p38 MAPK水平比H组低(q=4.06,P<0.05)。结论重复高压氧预处理抑制p38 MAPK激活,可能参与了对皮层神经元缺氧损伤的保护作用。(本文来源于《中华脑科疾病与康复杂志(电子版)》期刊2012年06期）
高怀林,王玲玲,贾振华,董小伟,朱慧明[10]（2012）在《p38丝裂原活化蛋白酶通路在内皮细胞纤维状肌动蛋白表达中的作用及通络药物的影响》一文中研究指出目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路在络气虚滞型血管内皮功能障碍模型大鼠血清诱导的内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)表达中的作用及通络药物保护血管内皮,防治血管病变的作用机制。方法首先建立络气虚滞型血管内皮功能障碍(VED)大鼠模型,用模型大鼠血清体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞株,实验分为5个组:空白对照组、正常血清组、模型血清组、通心络(TXL)组、SB203580组。采用Western blot技术检测各组中F-actin、p38、磷酸化p38(phospho-p38)蛋白表达的变化。结果与空白对照组和正常血清组比较,模型血清组F-actin的蛋白表达明显下调(P<0.05),phospho-p38蛋白表达明显升高(P<0.01,P<0.05);与模型血清组比较,通心络组和SB203580组F-actin的蛋白表达明显升高(P<0.01)、phospho-p38蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论 p38MAPK信号通路的激活可能参与了络气虚滞型血管内皮功能障碍模型大鼠血清诱导的F-actin蛋白表达的变化及通心络可能通过抑制p38MAPK信号通路而对内皮功能起保护作用的,这可能是通心络防治血管病变的机制之一。(本文来源于《络病学基础与临床研究（8）——第八届国际络病学大会》期刊2012-02-17）
丝裂原活化蛋白酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:1.研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、钙蛋白酶(calpain)和膜联蛋白A5(ANXA5)信号转导系统在醛固酮(ALD)诱导心肌细胞凋亡过程中的作用,了解calpain、ANXA5、MAPKs之间的调控关系,阐明ALD诱导心肌细胞凋亡的关键作用机制。2.观察氧化苦参碱(OMT)减轻ALD诱导心肌细胞损伤这一保护作用中MAPKs、calpain和ANXA5表达的变化,进一步阐释ALD诱导心肌细胞损伤的分子机制,寻找防治心肌细胞凋亡的有效作用靶点。3.阐明ANXA5基因多态性与原发性高血压左心室肥厚易感性的关系,为左心室肥厚的分子机制提供新的线索。方法:1.采用0.06%胰酶消化、差速贴壁法分离纯化1-3d SD新生大鼠心肌细胞做原代培养。用倒置显微镜观察细胞形态学改变,心肌细胞特异性肌钙蛋白免疫细胞化学鉴定心肌细胞及其纯度。MTT探索ALD损伤心肌细胞的最佳作用浓度及作用时间。建立ALD诱导心肌细胞凋亡模型,并用MTT法和流式细胞仪验证。基因芯片检查MAPKs、calpain、ANXA5基因表达,Real-time PCR、Western-blotting法检测calpain1、calpain2、p38、JNK、ERK、ANXA5、p-caspase3的m RNA和蛋白表达水平。实验分对照组、ALD组、ALD+anti-calpain1组、ALD+anti-calpain2组、ALD+anti-P38组、ALD+anti-ERK组、ALD+anti-JNK组。对各组细胞采用Real-time PCR和Western-blotting法检测calpain1、calpain2、p38、JNK、ERK m RNA和蛋白表达水平。抗ANXA5干预ALD诱导的心肌后,Western-blotting法检测calpain1、calpain2、p38表达。2.原代心肌细胞用氧化苦参碱(OMT)干预,分为对照组、ALD组、ALD+L-OMT组(L低剂量,OMT浓度25μg/ml)、ALD+H-OMT组(H高剂量,OMT浓度50μg/ml)、ALD+阿司匹林组和ALD+螺内酯组。各组细胞采用MTT法检测细胞凋亡,LDH检测细胞毒性,Giemsa染色和HE染色观察细胞形态,Real-time PCR和Western-blotting法检测calpain1、calpain2和p38、ANXA5m RNA和蛋白表达水平。3.研究对象为贵州省贵州医科大学附属医院原发性高血压患者,共850例。其中包括337例原发性高血压伴左心室肥厚患者,513例原发性高血压非左心室肥厚患者。所有入选者均进行心脏超声的检测并采集外周静脉血。SNa Pshot法检测实验对象外周静脉血中ANXA5基因多态性,观察高血压人群外周静脉血中ANXA5基因多态性与原发性高血压并发左室肥厚发病率之间的关系。结果:1.胰酶消化法成功分离培养原代心肌细胞并经肌钙蛋白免疫细胞化学鉴定显示心肌细胞阳性率达95%以上。用MTT检测确定ALD最佳浓度为10-5mol/L,最佳作用时间为48小时,此条件下ALD诱导心肌细胞凋亡率达37.8%。10-5mol/L浓度下ALD作用48h后心肌细胞的基因表达结果:较对照组比较ANXA5增高9.63倍,p38增高4.05倍,calpain1、calpain2增高3.31倍和2.16倍,JNK、ERK1/2增高1.43和1.62倍。10-5mol/L浓度下ALD作用48h后心肌细胞中calpain1、calpain2、p38、p-p38、ANXA5、p-caspase3蛋白表达增加,m RNA表达增加(p<0.05),JNK、p-JNK、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达增加不明显,m RNA表达增高但差异无统计学差异(p>0.05)。anti-calpain1干预ALD诱导的心肌细胞后,calpain1、calpain2和p38 m RNA水平显着降低(p<0.05),表明calpain1的蛋白及m RNA表达对calpain2、p38蛋白及m RNA表达有影响,对ERK1/2、JNK蛋白及m RNA表达没有影响;anti-calpain2干预后,calpain2和p38 m RNA水平显着降低(p<0.05),表明calpain2的蛋白及m RNA表达对p38蛋白及m RNA表达有影响,对calpain1、ERK1/2、JNK蛋白及m RNA表达没有影响;anti-p38、anti-JNK,anti-ERK干预后,分别有p38、JNK、ERK1/2 m RNA水平显着降低(p<0.05),表明p38、JNK、ERK1/2的蛋白及m RNA表达对calpain1、calpain2蛋白及m RNA表达没有影响,这叁者之间也没有相互影响。anti-calpain1,anti-calpain2,anti-JNK,anti-ERK,anti-p38干预ALD诱导的心肌细胞后,ant-calpain1、ant-calpain2、ant-p38组心肌细凋亡率较ALD组显着降低(p<0.05),但仍高于对照组(p<0.05),表明与ALD诱导的心肌细胞凋亡有关的是calpain1、calpain2和p38。ANXA5抑制剂干预ALD诱导的心肌细胞中,较ALD组比较calpain1、calpain2蛋白及m RNA表达无明显改变,p38蛋白表达量降低,p38m RNA表达明显减低(p<0.001),表明ANXA5蛋白及m RNA表达对p38的蛋白和m RNA表达有影响,对calpain1、calpain2的蛋白及m RNA表达没有影响。2.MTT实验表明ALD组细胞存活率值显着低于对照组(p<0.05);ALD+L-OMT组(25μg/ml)和ALD+H-OMT组(50μg/ml)ALD+阿司匹林组和ALD+螺内酯组细胞存活率显着高于ALD组(p<0.05)。LDH外漏实验结果提示,ALD组LDH外漏率显着高于对照组(p<0.05);ALD+L-OMT组和ALD+H-OMT组、ALD+阿司匹林组和ALD+螺内酯组LDH外漏率值均显着低于ALD组(p<0.05)。心肌细胞经Giemsa染色后,细胞核被染为蓝紫红色,细胞浆染成淡红色。正常组的细胞核稍偏、大小适宜呈正常结构;ALD组的细胞肥大、胞核居中;与ALD组比较,ALD+L-OMT组、ALD+H-OMT组、ALD+阿司匹林组和ALD+螺内酯组细胞表面积减小,形态接近于正常。Western-blotting及Real-time PCR结果显示与ALD组比较,ALD+L-OMT组和ALD+H-OMT组、ALD+阿司匹林组和ALD+螺内酯组与ALD组calpain1,calpain2和p38、ANXA5蛋白表达减低,m RNA表达减低(p<0.05)。3.左室肥厚患者中ANXA5SNPs表达是一项重要的危险因素,ANXA5SNPrs1050606与高血压左心室肥厚患病易感性有统计学差异(显性患者:p=0.008;共显性患者p=0.006)。此外,也研究也证明在原发性高血压左室左室肥厚患者中,ANXA5的M1,M2单体也被证明是危险因素(p=0.022和0.032)。结论:1.ALD可以通过上调calpain1、calpain2、ANXA5和p38表达水平,激活caspase3来诱导心肌细胞凋亡。calpain、ANXA5与MAPKs之间存在调控关系,机制可能为calpain1、2通过调控ANXA5来影响p38表达,进而影响心肌细胞凋亡。2.OMT可以通过下调calpain1、calpain2、ANXA5和p38的表达水平来减轻心肌细胞凋亡。calpain1、calpain2、ANXA5和p38可以作为减轻ALD诱导的心肌凋亡、改善高血压心肌重构、延缓心衰进程的关键作用靶点。3.ANXA5rs1050606,M1和M2单倍体与贵州原发性高血压人群的左心室肥厚显着相关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
丝裂原活化蛋白酶论文参考文献
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