论文摘要
本研究采用RT-PCR检测方法从内蒙古呼和浩特某屠宰场采集的32份牛肺脏样品中检测到两个BVDV阳性样本。通过在MDBK细胞上传代、IFA鉴定、5’-UTR序列测定及分子进化分析对其进行分离鉴定。结果显示两分离株在MDBK细胞中盲传10代后没有产生病变;经IFA检测,在病毒感染的细胞中可见明显的特异性荧光;系统进化分析表明两毒株属于BVDV-2a型,将两毒株命名为HT1704、HT1723 株。在相继研究中,应用DIA技术对BVDV-1型的CP型毒株和NCP型毒株分别感染MDBK细胞后18 h和48 h进行定量蛋白质组学分析,同时设有未感染病毒的细胞对照。对定量到的5094个有效蛋白进行差异表达筛选以及生物信息学分析,将四组样本（CP18hpi、CP48hpi、NCP18hpi和NCP48hpi）与相应对照组比对分析,分别筛选到351、327、156、120个差异蛋白。差异表达蛋白主要参与代谢过程、生物调节以及定位作用等生物过程。两生物型毒株在感染早期与晚期的差异表达蛋白在参与通路等方面存在差异。本研究为BVDV的致病机制及防控思路的研究提供了一定的参考依据。
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摘要Abstract缩略语表1 引言 1.1 牛病毒性腹泻病毒概述 1.1.1 牛病毒性腹泻病毒的病原学与基因组 1.1.2 牛病毒性腹泻病毒在我国的流行现状 1.1.3 牛病毒性腹泻病毒的诊断 1.1.4 牛病毒性腹泻病毒的防制 1.2 蛋白质学及DIA技术在病毒上的研究概述 1.2.1 蛋白质组学概述 1.2.2 DIA技术概述 1.2.3 DIA技术在病毒研究中的应用 1.3 本研究的目的及意义2 牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定 2.1 试验材料 2.1.1 病料来源 2.1.2 病毒与细胞 2.1.3 试验试剂耗材及引物 2.1.4 主要仪器设备 2.1.5 主要溶液配制 2.2 试验方法 2.2.1 样品前处理 2.2.2 病毒基因组RNA的提取及反转录 2.2.3 RT-PCR鉴定 2.2.4 细胞培养及病毒传代 2.2.5 目的基因克隆及测序 2.2.6 间接免疫荧光（IFA）鉴定 2.2.7 分离株毒力测定 2.2.8 分子进化分析 2.3 结果 2.3.1 RT-PCR鉴定结果 2.3.2 病毒传代及免疫荧光鉴定结果 2.3.3 分离株毒力测定结果 2.3.4 进化树分析结果3 BVDV-1两生物型毒株感染MDBK细胞的比较蛋白质组学分析 3.1 试验材料 3.1.1 细胞与病毒 3.1.2 主要试验试剂 3.1.3 主要仪器设备 3.1.4 生物信息学分析平台 3.1.5 主要溶液配制 3.2 试验方法 3.2.1 BVDV-1两生物型毒株的增殖与感染细胞的动力试验 3.2.2 蛋白质组学分析样品制备 3.2.3 细胞总蛋白质的提取与定量 3.2.4 样品蛋白的SDS-PAGE检测 3.2.5 样品蛋白FASP酶解 3.2.6 High pH RP分级 3.2.7 LC-MS/MS检测 3.2.8 蛋白质定量数据库的构建 3.2.9 差异表达蛋白的筛选 3.2.10 差异表达蛋白的生物信息学分析 3.3 结果 3.3.1 BVDV-1两生物型毒株在MDBK细胞上的增殖情况 3.3.2 蛋白质组样本收集与定量结果 3.3.3 差异表达蛋白筛选结果 3.3.4 生物信息学分析结果4 讨论 4.1 牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定 4.2 BVDV-1两生物型毒株感染MDBK细胞的比较蛋白质组学分析5 结论致谢参考文献作者简介
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 范峻豪
导师: 张七斤,温永俊
关键词: 分离,鉴定,蛋白质组学
来源: 内蒙古农业大学
年度: 2019
分类: 基础科学,农业科技
专业: 生物学,畜牧与动物医学
单位: 内蒙古农业大学
分类号: S852.653
DOI: 10.27229/d.cnki.gnmnu.2019.000328
总页数: 58
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标签：分离论文; 鉴定论文; 蛋白质组学论文;
BVDV的分离鉴定及BVDV-1型毒株感染细胞的蛋白质组学分析
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