猪德尔塔冠状病毒重组聚合酶扩增检测方法的建立与应用

猪德尔塔冠状病毒重组聚合酶扩增检测方法的建立与应用

论文摘要

为了快速检测猪德尔塔冠状病毒(PDCoV),针对PDCoV N基因设计特异的引物,建立了猪德尔塔冠状病毒重组聚合酶扩增(RPA)方法。特异性试验中以PPRSV、PEDV、PKV、TGEV和FMDV为模板时均未产生任何条带,特异性较好。该检测方法的灵敏度为103 copies/μL,敏感性较好。用该方法检测194份仔猪腹泻样品,PDCoV阳性率为14.4%,较常规RT-PCR阳性率为11.9%更高。研究所建立的猪德尔塔冠状病毒RPA检测方法具有反应快速、操作简单、结果可靠、设备要求低等优点,可为基层简易实验室提供一种方便适用的快速检测方法。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 病料样本
  •     1.1.2 主要仪器与试剂
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 引物设计
  •     1.2.2 病毒RNA的提取及cDNA的合成
  •     1.2.3 PCR反应体系
  •     1.2.4 PMD20T-N重组质粒的构建及拷贝数计算
  •     1.2.5 RPA反应体系
  •     1.2.6 RPA反应条件的优化
  •     1.2.7 RPA特异性试验
  •     1.2.8 RPA敏感性试验
  •     1.2.9 临床样品的检测
  • 2 结果
  •   2.1 质粒的鉴定及拷贝数计算
  •   2.2 RPA反应温度的优化
  •   2.3 RPA反应时间的优化
  •   2.4 RPA特异性试验
  •   2.5 RPA敏感性试验
  •   2.6 临床样品的检测
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 肖帅,刘新生,方玉珍,周鹏,张永光,王永录,魏彦明

    关键词: 猪德尔塔冠状病毒,重组聚合酶扩增,快速检测

    来源: 动物医学进展 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 甘肃农业大学生命科学技术学院,中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室

    基金: 国家自然科学基金项目(31602095),国家生猪产业体系项目(CARS-35),“十三五”国家重点研发计划项目(2016YFD0501505)

    分类号: S852.651

    DOI: 10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.03.001

    页码: 9-14

    总页数: 6

    文件大小: 236K

    下载量: 181

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