导读:本文包含了系膜增殖性肾炎论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:肾炎,细胞,紫癜,周期,炎症,因子,狼疮性肾炎。
系膜增殖性肾炎论文文献综述
白久旭[1]（2018）在《SOCS1/STAT1调节系膜增殖性肾炎的炎症反应作用和机制研究》一文中研究指出目的:系膜增殖性肾小球肾炎是我国慢性肾脏病最常见的病因,,包括lgA肾病、狼疮性肾炎等。系膜细胞在免疫介导的肾小球疾病中发挥了重要的调节作用,可能在肾脏中发挥非专职抗原提呈细胞的作用,积极参与肾脏局部的炎症反应,但机理至今尚未阐明。CD4+T淋巴细胞是参与肾脏疾病发生发展过程中的重要免疫细胞,激活后介导免疫反应诱导肾小球病变,同时还可以作为效应细胞在肾小球聚集,激活中性粒细胞和巨噬细胞,加剧肾损伤。细胞因子信号传导抑制蛋白(SOCS)是由细胞产生并反馈性阻断细胞因子信号转导过程的负性调节因子,其主要通过JAK/STAT通路参与调控细胞因子。近年研究发现,其在肾脏疾病的局部免疫中也发挥了重要的调节作用。我们拟探讨SOCS1调节系膜增殖性肾炎的肾脏局部炎症反应和调控系膜细胞抗原提呈的作用和可能机制。方法:建立大鼠Thy1肾炎和小鼠Habu肾炎两种系膜增殖性肾炎模型。免疫荧光(或免疫组化)方法检测CD4+T淋巴细胞和CD68+巨噬细胞在肾脏的浸润。实时定量PCR检测肾组织细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-12的mRNA表达。免疫荧光和Western blot方法检测抗原提呈分子标志物MHC class Ⅱ等在系膜细胞的表达情况。Western blot、免疫荧光方法和免疫组化方法检测SOCS1及STAT信号通路在系膜增殖性肾炎第3、5、7、14天的表达变化。然后利用STAT1特异性抑制剂氟达拉滨(fludarabine)干预Habu肾炎模型,观察其对Habu肾炎的肾组织炎症细胞和炎症因子表达影响,并通过溶解指数和肾小球硬化指数评分评估其对Habu肾炎的肾脏病理变化影响。细胞实验利用IFN-γ刺激系膜细胞,流式细胞仪检测活化的系膜细胞对EdU标记的OT Ⅱ小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞的增殖影响。检测抗原提呈分子标志物MHC class Ⅱ和STAT信号通路表达变化。在系膜细胞中过表达SOCS1,检测其对IFN-γ刺激系膜细胞上述分子的表达变化影响。结果:成功建立了大鼠Thy1肾炎和小鼠Habu肾炎两种系膜增殖性肾炎模型。在系膜增殖性肾炎疾病模型的早期,CD4+T淋巴细胞、CD68+巨噬细胞在肾脏浸润增多,肾脏TNF-α、IFN-γ和IL-12的mRNA表达水平升高。在肾小球系膜区可见抗原提呈分子标志物MHC class Ⅱ的表达。系膜增殖性肾炎的肾组织SOCS1表达水平下降,肾小球的STAT1磷酸化水平表达升高。STAT1抑制剂氟达拉滨能够抑制Habu肾炎肾脏STAT1的磷酸化水平,并且抑制了肾脏MHC class Ⅱ的表达。氟达拉滨还抑制了Habu肾炎肾小球CD4+T淋巴细胞的浸润和炎症因子TNF-α、IFN-y和IL-12的mRNA表达。与无干预的模型组相比,STAT1抑制剂干预组的系膜溶解指数和肾小球硬化指数评分显着降低。细胞实验中,IFN-γ刺激的系膜细胞能够促进与其共培养OT Ⅱ小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞的增殖活性。IFN-γ上调系膜细胞MHC class Ⅱ和活化STAT1信号通路,而SOCS1和STAT1抑制剂可以抑制上述分子的表达水平。结论:证实系膜细胞作为一种非专职抗原提呈细胞活化了 CD4+T淋巴细胞的增殖。SOCS1可以抑制系膜细胞抗原提呈分子标志物MHC class Ⅱ的表达。在系膜增殖性肾炎中,疾病早期的SOCS1表达水平下降,STAT1肾小球细胞激活增多,炎症细胞在肾小球浸润和炎症因子mRNA表达水平增多。系膜增殖性肾炎恢复期,SOCS1水平表达恢复正常,STAT1在肾小球细胞的活化水平下降,炎症反应减轻。提示SOCS1可能通过STAT1信号通路参与系膜细胞抗原提呈作用和炎症反应调控。(本文来源于《中国人民解放军医学院》期刊2018-06-03）
张玮,杨冉,郭惠芳,封晓娟,魏群[2]（2017）在《HMGB1和TNFAIP3在狼疮性肾炎系膜细胞增殖中的作用》一文中研究指出目的初步探讨高迁移率族蛋白1(high mobility group protein B1,HMGB1)和肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(tumor necrosis factorα-induced protein-3,TNFAIP3)在狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)患者和人类肾小球系膜细胞(human mesangial cell,HMC)增殖中的作用及机制。方法收集Ⅳ型LN患者的肾穿样本,采用免疫荧光和免疫组化技术检测肾小球细胞中HMGB1、TNFAIP3及IκBα蛋白表达水平;运用人重组HMGB1为刺激物刺激HMC,采用Brd U参入技术检测细胞增殖水平,并用Western blot技术检测TNFAIP3、IκBα及p65表达水平。结果与对照组相比,LN患者肾小球细胞中HMGB1及TNFAIP3蛋白表达升高,IκBα表达水平降低;体外实验证实,人重组HMGB1刺激HMC后,细胞增殖水平明显升高,同时在HMGB1刺激30 min后,与对照组相比,TNFAIP3的蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而IκBα蛋白表达水平降低(P<0.05),随后p65蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 HMGB1和TNFAIP3可能通过活化NF-κB信号通路促进LN系膜细胞的过度增殖。(本文来源于《中国药理学通报》期刊2017年08期）
姚菲菲,孙立秋,方伟,王化民,姚东升[3]（2016）在《miR-214在狼疮性肾炎小鼠肾小球系膜细胞增殖中的作用及其机制》一文中研究指出目的探讨微小RNA-214(miR-214)在狼疮性肾炎(LN)小鼠肾小球系膜细胞增殖中的作用及其相关机制。方法将MRL-Faslpr/JNju小鼠(简称LN小鼠,20只)和野生型小鼠(20只)处死,分离、培养其肾小球系膜细胞;将LN小鼠肾小球系膜细胞随机分为两组,分别转染miR-214 mimics(观察组)和NC mimics control(对照组)。采用实时荧光定量PCR法检测两种小鼠及两组肾小球系膜细胞miR-214相对表达量,采用MTT法检测两组转染1、2、3天的细胞增殖抑制率。采用生物信息学方法预测细胞中miR-214的靶基因,并经双荧光素酶报告基因试验验证,YKL-40是miR-214的靶基因。采用实时荧光定量PCR法和Western blotting法检测两组YKL-40 mRNA及蛋白相对表达量。取对数生长期的LN小鼠肾小球系膜细胞,分别转染si YKL-40和negative control,采用MTT法检测转染1、2、3天的细胞增殖抑制率。结果 LN小鼠和野生型小鼠肾小球系膜细胞miR-214相对表达量分别为0.35±0.09、1,两者比较P<0.01。观察组和对照组miR-214相对表达量分别为85.54±12.07、1,两组比较P<0.01。观察组转染1、2、3天的细胞增殖抑制率均高于对照组(P<0.05或<0.01)。与对照组比较,观察组YKL-40 mRNA及蛋白相对表达量均降低(P均<0.05)。与转染negative control比较,转染si YKL-40的LN小鼠肾小球系膜细胞转染1、2、3天的细胞增殖抑制率均升高(P<0.05或<0.01)。结论 LN小鼠肾小球系膜细胞中miR-214表达降低,上调miR-214表达可抑制其增殖;下调YKL-40表达可能是miR-214的作用机制。(本文来源于《山东医药》期刊2016年48期）
陈大鹏,张铮,杨悦,马也娉,卓莉[4]（2016）在《抗Thy1系膜增殖性肾炎大鼠模型中G0/G1期细胞周期蛋白表达变化》一文中研究指出目的:探讨抗Thy-1系膜增殖性肾炎大鼠模型中各病理时间点G0/G1期细胞周期蛋白变化。方法:利用OX-7杂交瘤细胞株产生抗Thy1抗体,纯化后经尾静脉注射Wistar大鼠建立抗Thy1系膜增殖性肾炎大鼠模型。用免疫组化方法,检测各病理时间点(第0、3、5、7、10、14d)Ki-67及细胞周期蛋白cyclin D1的表达变化趋势;Western Blot检测各实验组时间点G0/G1期细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin E、CDK2、CDK4、CDK6、p27kip1表达变化趋势。结果:PAS染色显示各时间点Ki-67表达与病理变化正相关。与对照组比较,病理组d7Ki-67表达量显着增加(P<0.05),并随病理转归而下降。细胞周期蛋白cyclin D1的表达与Ki-67趋势相同,在病理最终的d7表达量最高(P<0.05),随病理转归而回到正常。Western Blot检测病理组细胞周期相关蛋白,与对照组相比,病理组d7,cyclin D1、cyclin E、CDK2、CDK4、CDK6的表达最高(P<0.05),p27kip1表达量最低(P<0.05)。结论:在抗Thy-1系膜增殖性肾炎大鼠模型中证实,G0/G1期细胞周期蛋白与病理变化正相关。(本文来源于《中日友好医院学报》期刊2016年06期）
李留霞[5]（2016）在《CXCL13促进系膜细胞增殖参与狼疮性肾炎的发生发展》一文中研究指出目的系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是临床上常见的自身免疫性疾病,狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)是其严重的并发症。国内外研究表明,趋化因子CXCL13可能参与了SLE的发病过程。为了进一步探讨CXCL13与SLE、LN的内在联系,本研究拟检测CXCL13在SLE患者和健康人血清中的表达情况,在体外观察CXCL13对肾小球系膜细胞产生的生物学影响,进而在细胞、分子水平上探索其可能的作用机制,为SLE、LN的诊断和治疗提供新的依据。方法1.随机选取70名确诊的SLE患者作为实验组,该70名患者按肾脏受累情况分为狼疮性肾炎组(34名)和无狼疮性肾炎组(36名),随机选取生化指标正常的32名健康人作为对照组,收集上述对象的临床资料及血清,运用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测所有对象的CXCL13水平并分析其统计学差异。2.在体外用适当浓度的CXCL13刺激人肾小球系膜细胞,观察细胞发生的生物学变化。CCK8法检测细胞增殖活性,流式细胞术(FCM)分析细胞周期的分布,蛋白免疫印迹法(Western blot)、免疫荧光技术(IF)检测可能参与的信号通路。3.结合基因转染技术进一步研究细胞发生上述变化的可能机制。结果1.SLE患者的血清CXCL13含量显着高于健康人[(517.04±552.34)pg/ml vs.(135.24±134.23)pg/ml,P<0.001],在SLE患者中LN患者比无LN患者显着增高[(702.40±710.97)pg/ml vs.(341.97±244.81)pg/ml,P=0.008],差异有统计学意义。2.CXCL13作用于系膜细胞后可以促进细胞的增殖,诱导细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路活化,且ERK1/2的磷酸化水平随着作用时间的延长而升高。3.正常系膜细胞表达一定量的CXCR5,当CXCL13刺激系膜细胞后CXCR5表达增加。干预CXCR5表达后CXCL13的促细胞增殖作用受到抑制,且ERK1/2的磷酸化水平有所下降。结论实验结果表明,CXCL13在SLE特别是LN患者中高表达。其可能是通过与CXCR5相互作用促进了系膜细胞的增殖,诱导下游信号通路的活化,从而参与了LN的发生发展。CXCL13有望成为SLE新的生物标志,甚至可能作为预测SLE肾损伤的指标,阻断CXCL13-CXCR5及ERK通路可能成为LN新的治疗靶点。(本文来源于《南通大学》期刊2016-03-17）
吕杨,陈蕾,谢院生,吴玲玲,陈香美[6]（2015）在《转录因子DBP对系膜增殖性肾炎免疫炎症反应的作用及其机制研究》一文中研究指出目的:系膜增殖性肾炎目前被认为一种免疫炎症性疾病,其分子机制尚未明确,找到该疾病中调控系膜免疫炎症反应的关键因子尤为重要。D位点结合蛋白(the D Site Binding Protein,DBP)是重要的转录调控因子,极可能参与免疫炎症反应调节。本研究从系膜增殖性肾炎抗Thy-1肾炎模型入手,研究其各时期转录因子DBP及相关免疫炎症因子的变化规律(本文来源于《中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2015年学术年会资料汇编》期刊2015-10-15）
黄宝英,曹罗元,施进宝,富显果,杨菁[7]（2015）在《温肾健脾活血固精方治疗系膜增殖性肾炎临床研究》一文中研究指出目的:观察温肾健脾活血固精方治疗脾肾阳虚夹血瘀型系膜增殖性肾炎的临床疗效。方法:将60例脾肾阳虚夹血瘀型系膜增殖性肾炎患者分为治疗组和对照组。治疗组30例,以温肾健脾活血固精方为基本方加西药治疗;对照组30例,单纯予以西药治疗。观察两组患者治疗前后临床症状、体征、细胞免疫、体液免疫、血β-微球蛋白(βmicroglobulin,β-MG)、24 h尿蛋白定量变化情况,判定临床疗效。结果:治疗组患者临床症状、体征和免疫功能改善情况均优于对照组(P<0.05),且患者血β-MG、24 h尿蛋白定量较对照组明显降低(P<0.05);治疗组有效率为86.7%,显着高于对照组的60.0%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:温肾健脾活血固精方对脾肾阳虚夹血瘀型系膜增殖性肾炎有较好的临床疗效。(本文来源于《中医学报》期刊2015年01期）
崔雅璠,丁樱,杨晓青,姜淼,黄文龙[8]（2014）在《紫癜性肾炎患儿血清IgA1通过系膜细胞-足细胞轴对足细胞增殖及TNF-α分泌的影响》一文中研究指出目的观察过敏性紫癜性肾炎(HSPN)患儿刺激系膜细胞-足细胞轴及直接刺激足细胞对细胞增殖及肿瘤坏死因子(TNF)-α分泌的影响,从而探讨在HSPN发病机制中IgA1引起足细胞损伤的作用机制。方法采用层析法获得HSPN患儿及健康儿童血清单聚体IgA1(mIgA1),并热聚合为聚合IgA1(aIgA1),分别采用HSPN患儿aIgA1与系膜细胞共培养上清(aIgA1-MES上清组)、HSPN患儿的aIgA1(HSPN组)及健康儿童的aIgA1(健康儿童组)刺激足细胞,叁组均采用50、100、250μg/mL叁种浓度的aIgA1;并设不含aIgA1的阴性对照组。采用噻唑蓝(MTT)法检测刺激24 h及48 h足细胞的增殖情况;收集培养48 h的细胞培养基上清,用酶聚免疫吸附测定(ELISA)法测定TNF-α的水平。对比分析不同浓度的aIgA1对细胞增殖和TNF-α分泌水平的影响。结果 24 h MTT结果显示,aIgA1-MES上清组刺激足细胞在aIgA1浓度为100、250μg/mL的aIgA1中OD值明显低于阴性对照组(P<0.05),HSPN组及健康儿童组aIgA1直接刺激足细胞不能对细胞增殖产生影响(P>0.05);48 h MTT结果显示,IgA1-MES上清组在叁种aIgA1浓度下足细胞OD值明显低于阴性对照组(P<0.05),HSPN组及健康儿童组直接刺激足细胞不能对细胞增殖产生影响(P>0.05);叁种aIgA1浓度的aIgA1-MES上清组刺激足细胞分泌TNF-α含量较阴性对照组明显升高(P<0.01),叁种aIgA1浓度的HSPN组及健康儿童组TNF-α含量与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HSPN患儿aIgA1不能直接刺激足细胞造成细胞损伤,而是通过系膜细胞-足细胞轴抑制足细胞的增殖,并诱导足细胞分泌TNF-α水平增加。(本文来源于《中国医药导报》期刊2014年19期）
崔雅璠,丁樱,杨晓青,段凤阳,翟宗岗[9]（2014）在《过敏性紫癜性肾炎患儿血清IgA1对肾小球系膜细胞增殖及TNF-α分泌的影响》一文中研究指出目的观察过敏性紫癜性肾炎(HSPN)患儿及健康儿童血清IgA1对小鼠肾小球系膜细胞(MES)增殖及TNF-α分泌的影响。方法采集2013年5~12月于河南中医学院第一附属医院儿科住院的40例HSPN患儿及20名健康儿童血清;通过Jacalin亲和层析联合Superdex-200分子筛层析的方法将血清中单聚体IgA1(mIgA1)纯化、分离,将mIgA1热聚合为聚合IgA1(aIgA1);采用不同浓度的患儿及健康儿童的aIgA1分别刺激MES细胞株,用MTT法检测24 h及48 h的细胞增殖情况;收集培养48 h的细胞培养基上清,用ELISA法测定TNF-α的水平。结果在HSPN患儿aIgA1刺激结果中,不同浓度aIgA1刺激组间MTT实验吸光度的比较,差异有统计学意义(P<0.05),24 h MTT实验结果显示:与阴性对照比较,aIgA1刺激浓度在250、1000μg/mL时,细胞增殖差异均有统计学意义(P<0.05),在aIgA1浓度为500和750μg/mL时,细胞增殖差异有高度统计学意义(P<0.01);48 h MTT实验结果显示:与阴性对照比较,在aIgA1刺激浓度50μg/mL时,细胞增殖差异有统计学意义(P<0.05),在100~1000μg/mL时,细胞增殖差异均有高度统计学意义(P<0.01)。健康儿童在aIgA1刺激浓度在750和1000μg/mL可刺激MES增殖,与阴性对照比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HSPN患儿aIgA1可刺激MES分泌TNF-α水平升高,与阴性对照比较,差异有高度统计学意义(P<0.01),且随aIgA1浓度增加呈上升趋势。结论HSPN患儿aIgA1可刺激MES增殖及分泌TNF-α水平增加,且这一结果具有浓度依赖性及饱和性。(本文来源于《中国医药导报》期刊2014年18期）
陈大鹏[10]（2014）在《miR-34a调控系膜增殖性肾炎的机制研究》一文中研究指出背景：系膜增殖性肾炎(mesangial proliferative glomerulonephritis, MsPGN)是我国发病率最高的肾脏疾病之一。其主要的病理变化是弥漫性肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell, GMC)增生,以及不同程度的细胞外基质(extracellular matrix, ECM)增多。同时,MsPGN是导致慢性肾脏病(chronic kidney disease, CKD)的首要原因,可引起大量蛋白尿、高血压肾损害等一系列并发症,如果病情继续进展恶化,还可引起肾小球硬化及肾间质纤维化,最终成为导致终末期肾脏病(end-stage renal disease, ESRD)的主要病因。抑制系膜细胞增殖是治疗系膜增殖性肾小球疾病重要的治疗策略。近年来生命科学研究领域的一个重大突破就是在真核生物体内发现了具有调节功能的非编码RNA——microRNA (miRNA)。这些小RNA广泛参与调控生物增殖／凋亡、发育/衰老等病理生理过程,与人类疾病的发生发展密切相关。目前研究表明,miR-34a可能参与调控多个信号通路而影响细胞的增殖。RNA干扰(RNAi)在实验室中是一种强大的实验工具,利用具有同源性的双链RNA (dsRNA)诱导序列特异的目标基因的沉寂,可以迅速阻断基因活性。siRNA在RNA沉默中起中心作用,可对特定信使RNA (mRNA)进行特异性的降解。siRNA是RNAi途径中的中间产物,是RNAi发挥效应所必需的元件。siRNA与miRNA具有众多相似性,所以利用siRNA模拟miRNA实验以证明miRNA对于靶基因作用的特异性。胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)是细胞培养中最常用的营养物质,其中含有几十种蛋白质、微量元素、生长因子等。在培养细胞时通常采用10%-15%FBS进行,实验中我们可以利用高浓度(20%)FBS培养细胞,以刺激细胞进行过度增殖,与以往单一利用某种刺激因子比较,高浓度FBS更能模拟生物体内病理情况复杂的环境。如果我们可以利用miR-34a可以拮抗这一现象,可以推测其在体内也可以有相似作用。目的：制备抗Thyl抗体并制备抗Thyl系膜增殖性肾炎大鼠模型。观察miR-34a在各病理时间点变化趋势。之后,利用siPDGFR-β证明miR-34a对于已经证明的靶基因PDGFR-β及Ras/MAPK信号通路的调控作用,并在体外证实miR-34a可以拮抗外源性刺激引起的细胞过度增殖现象。方法：1.利用OX-7杂交瘤细胞株产生抗Thy1抗体,纯化后经尾静脉注射Wistar大鼠建立抗Thyl系膜增殖性肾炎大鼠模型。检测不同病理时间点(第0、3、5、7、10、14天)肾功能和24小时尿蛋白定量；2.利用免疫组化方法,检测各病理时间点Ki67及细胞周期蛋白cyclin D1的表达变化趋势；3.留取各病理时间点肾脏组织并提取肾小球,Western Blot检测G0/G1期细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin E、CDK2、CDK4、CDK6、p27kip1表达变化趋势；4.利用TaqMan Real-time PCR检测各病理时间点miR-34a表达的变化趋势；5.将siPDGFR-β或siRNA negative control转染大鼠系膜细胞系(RMC),利用Cell Counting Kit-8方法检测不同时间点(24h,48h,72h)各组细胞增殖速率的变化程度；6.将siPDGFR-β或siRNA negative control转染大鼠系膜细胞系(RMC)48h后,利用流式细胞仪检测RMC细胞周期变化；7.将siPDGFR-β或siRNA negative control转染大鼠系膜细胞系(RMC)48h后,检测靶基因PDGFR-β. Ras/MAPK信号通路的各个靶点K-ras、Rafl、 p-Rafl、MEK1、p-MEK1、ERK1/2、p-ERK1/2及细胞周期相关蛋白cyclin D1、 cyclin E、CDK2、CDK4、CDK6、p27kip1的蛋白表达变化趋势；8.利用双荧光素酶报告质粒系统检测miR-34a对可能靶基因CDK2、cyclin E表达的调控作用；9.利用高浓度胎牛血清(20%FBS)刺激转染miR-34a mimics的大鼠系膜细胞,利用Cell Counting Kit-8方法检测不同时间点(24h,48h,72h)各组细胞增殖速率的变化程度；10.利用高浓度胎牛血清(20%FBS)刺激转染miR-34a mimics的大鼠系膜细胞,利用流式细胞仪检测RMC细胞周期变化；11.利用高浓度胎牛血清(20%FBS)刺激转染miR-34a mimics的大鼠系膜细胞,检测靶基因PDGFR-β、Ras/MAPK信号通路的各个靶点K-ras、Raf1、p-Raf1、 MEK1、p-MEK1、ERK1/2、p-ERK1/2及细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin E、CDK2、CDK4、CDK6、p27kipl的蛋白表达变化趋势。结果：1.成功制备抗Thy1抗体,并利用该抗体制备了抗Thyl系膜增殖性肾炎大鼠模型。与对照组相比,病理组大鼠第5天和第7天24h尿蛋白定量显着升高(p<0.05),第10天后24h尿蛋白定量开始下降。2.各病理时间点Ki67表达随病理变化成正关系。与对照组相比,病理组第7天Ki67表达量显着增加(p<0.05),并随病理转归而下降。细胞周期蛋白cyclinD1的表达与Ki67趋势相同,在病理最终的第7天表达量最高(p<0.05),随病理转归而回到正常。3. Western Blot检测各病理组细胞周期相关蛋白表达。结果表明,与对照组相比,病理组第7天,cyclin D1、cyclin E、CDK2、CDK4、CDK6的表达最高(p<0.05),而p27kiP1表大量最低(P<0.05)。4. TaqMan Real-time PCR检测各病理组mIR-34a表达量变化,结果表明,与对照组相比,miR-34a表达与病理变化成负相关,病理组第7天表达量最低(p<0.05),随病理转归回到正常。5.用siPDGFR-β或siRNA negative control转染大鼠系膜细胞系(RMC)。与对照组相比,siPDGFR-β组增殖活性从48h开始明显下降(p<0.05),至72h更加明显(p<0.05)。同时通过流式细胞技术检测细胞周期变化,siPDGFR-β组细胞周期主要是阻滞在G0/G1期(p<0.05)(使得G0/G1期延长)；6.用siPDGFR-β或siRNA negative control转染大鼠系膜细胞系(RMC),Western Blot检测对PDGFR-β与p-PDGFR-β的影响。与对照组相比,siPR-β处理组的PDGFR-β、p-PDGFR-β蛋白表达量明显下降(p<0.05)。7.利用siPDGFR-β或siCON转染RMCs,检测其对RAS/MAPK信号通路关键靶点的改变。结果表明,与对照组相比,K-Ras的总蛋白水平下调(p<0.05),Rafl、MEK1、ERK1/2的总蛋白水平不变(p>0.05)。p-Rafl、p-MEK1、 p-ERK1/2蛋白水平下调(p<0.05)；8.利用siPDGFR-β或siCON转染RMC后,检测其对细胞周期蛋白cyclin D1、 cyclin E, CDK蛋白CDK2、CDK4、CDK6, CKI蛋白,p27kiPl的蛋白影响。结果表明,siPDGFR-β可以下调cyclin D1, cyclin E, CDK2, CDK4, CDK6的蛋白水平(p<0.05),p27kip1表达量明显上调(p<0.05)；9.为验证CDK2或cyclin E是否为miR-34a的靶基因,我们将CDK2/cyclin E mRNA的3'UTR序列克隆至双荧光素酶报告载体质粒psiCHECKTM-2上。结果显示,miR-34a mimics可以下调RMC细胞psiCHECK-CDK2/cyclin E的荧光素酶活性(p<0.05)；10.利用miR-34a mimics或者niRNA negative control转染细胞后,并用20%FBS血清刺激细胞。结果表明,从48小时开始,20%FBS组与20%FBS+Con组增殖能力高于10%FBS组及20%FBS+miR34a组(p<0.05),但是10%FBS与20%FBS+miR34a组无差别(p>0.05)；11.利用niR-34a mimics或者miRNA negative control转染细胞后,并用20%FBS血清刺激细胞。结果表明,在48小时开始,20%FBS+Con组的细胞周期G0/G1期与10%FBS组相比明显缩短(p<0.05),而20%FBS+miR34a组的G0/G1期与20%FBS+Con相比明显延长(p<0.05)。每次检测的CV(%)均小于10%,表明结果可信；12.利用miR-34a mimics或者miRNA negative control转染细胞后,并用20%FBS血清刺激细胞。结果表明,在刺激48小时后,与10%FBS组与20%FBS+miR34a组相比,20%FBS+Con组PDGFR-β与p-PDGFR-β的蛋白表达明显增高(p<0.05),20%FBS+miR34a组与10%组无差别(p>0.05)；13.利用miR-34a mimics或者miRNA negative control转染细胞后,并用20%FBS血清刺激细胞。结果表明,在刺激48小时后,与10%FBS组与20%FBS+miR34a组相比,20%FBS+Con组的Raf1、ERK1/2的总蛋白无明显差异((P>0.05), K-Ras的总蛋白水平上调(p<0.05)。p-Raf1、p-MEK1、 p-ERK1/2蛋白水平上调(p<0.05)。与20%FBS+Con组相比,20%FBS+miR34a组的MEK1蛋白明显降低(p<0.05)；14.利用miR-34a mimics或者miRNA negative control转染细胞后,并用20%FBS血清刺激细胞。我们检测其对细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin E, CDK蛋白CDK2、CDK4、CDK6, CKI蛋白,p27kiP;的蛋白影响。结果表明,与20%FBS+miR34组相比,20%FBS+Con组的cyclin D1, cyclin E, CDK2,CDK4, CDK6的蛋白水平明显上调(p<0.05), p27kip1表达量明显下调p<0.05)。结论：1.在抗Thy1系膜增殖性肾炎大鼠模型中,miR-34a随着病理变化而变化,呈负相关；2. miR-34a可以通过直接作用于靶基因PDGFR-β,进而作用于Ras/MAPK信号通路活性,影响细胞周期G0/G1期,从而抑制系膜细胞增殖；3. siPDGFR-β可以通过抑制PDGFR-β而作用于Ras/MAPK信号通路,延长G0/G1期,从而使RMC细胞增殖活性下降,此结果有力证实miR-34a是通过作用于靶基因PDGFR-β从而影响大鼠系膜细胞增殖；4.miR-34a可以拮抗外源性刺激引起的细胞过度增殖现象。(本文来源于《南开大学》期刊2014-05-01）
系膜增殖性肾炎论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的初步探讨高迁移率族蛋白1(high mobility group protein B1,HMGB1)和肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(tumor necrosis factorα-induced protein-3,TNFAIP3)在狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)患者和人类肾小球系膜细胞(human mesangial cell,HMC)增殖中的作用及机制。方法收集Ⅳ型LN患者的肾穿样本,采用免疫荧光和免疫组化技术检测肾小球细胞中HMGB1、TNFAIP3及IκBα蛋白表达水平;运用人重组HMGB1为刺激物刺激HMC,采用Brd U参入技术检测细胞增殖水平,并用Western blot技术检测TNFAIP3、IκBα及p65表达水平。结果与对照组相比,LN患者肾小球细胞中HMGB1及TNFAIP3蛋白表达升高,IκBα表达水平降低;体外实验证实,人重组HMGB1刺激HMC后,细胞增殖水平明显升高,同时在HMGB1刺激30 min后,与对照组相比,TNFAIP3的蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而IκBα蛋白表达水平降低(P<0.05),随后p65蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 HMGB1和TNFAIP3可能通过活化NF-κB信号通路促进LN系膜细胞的过度增殖。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
系膜增殖性肾炎论文参考文献
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