β-联蛋白促进大鼠外周血间充质干细胞存活及扩增

β-联蛋白促进大鼠外周血间充质干细胞存活及扩增

论文摘要

本研究旨在探讨β-联蛋白在促进外周血间充质干细胞(PBMSCs)的存活和扩增中的作用。采取SD大鼠外周血,分离培养得到PBMSCs,随机将细胞分3组:未处理组(CON)、β-联蛋白激动剂组(WAY-262611,WAY)和β-联蛋白抑制剂组(XAV-939,XAV)。体外培养90 d,观察各组细胞增生和凋亡情况。应用Western印迹和ELISA方法观察细胞衰老标记性蛋白质p16和p21表达情况,以及β-联蛋白信号通路分子表达情况。外周血经过3代培养,可获得纯度较高的PBMSCs,体外培养40 d即发生衰老和凋亡,但WAY-262611可延长细胞存活时间至90 d以上,增加其体外增殖率1. 08倍(P<0. 05),明显提高细胞增殖能力(P<0. 05);使WAY组p21和p16蛋白含量较CON组减少72. 1%和68. 4%(两者均P<0. 05),较XAV组减低92. 9%和93. 3%(两者均P<0. 05)。与CON组比较,WAY组衰老细胞数减少61. 4%(P<0. 05),而XAV组则增加53. 3%(P<0. 05); WAY组细胞凋亡率减少50. 2%(P<0. 05),而XAV组细胞凋亡率增加35. 7%(P<0. 05); WAY组β-联蛋白表达水平增加2. 2倍(P<0. 05),而XAV组则降低77. 7%(P<0. 05)。WAY-262611可升高WAY组β-联蛋白磷酸化水平(包括p-Ser552和p-Ser675) 97%和79%(两者均P<0. 05),升高抗凋亡蛋白质Bcl2表达水平1. 39倍(P<0. 05),降低凋亡蛋白Bax和胱天蛋白酶3表达67. 6%和83. 3%(两者均P<0. 05);而XAV-939则降低Bcl2蛋白表达水平69. 1%(P<0. 05),升高Bax和胱天蛋白酶3表达水平1. 27倍和1. 02倍(两者均P<0. 05)。β-联蛋白可能是影响MSCs存活和增殖的重要信号途径。这些发现可能有助于提高用于组织工程的PB-MSCs的体外生产。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 大鼠创伤模型的构建
  •   1.3 外周血间充质干细胞的分离、培养和收集
  •   1.4 外周血间充质干细胞分组、干预和培养
  •   1.5 细胞表型鉴定
  •   1.6 生长曲线测定
  •   1.7 CCK-8检测细胞增殖
  •   1.8 Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡
  •   1.9 Western印迹检测
  •   1.1 0 酶联免疫吸附试验 (ELISA)
  •   1.1 1 衰老相关的β-半乳糖苷酶 (β-galactosidase) 活性测定
  •   1.1 2 统计学方法
  • 2 结果
  •   2.1 外周血间充质干细胞形态观察和表型鉴定
  •   2.2 β-联蛋白促进外周血间充质干细胞生长和增殖
  •   2.3 β-联蛋白抑制外周血间充质干细胞衰老和凋亡
  •   2.4 激活β-联蛋白信号通路促进外周血间充质干细胞中抗凋亡信号分子表达
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 赵岚,季洲,张锐,崔进,黄伟光,张少衡

    关键词: 联蛋白,外周血间充质干细胞,凋亡,扩增

    来源: 中国生物化学与分子生物学报 2019年08期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 上海市徐汇区大华医院心内科,暨南大学附属广州红十字会医院心内科

    基金: 上海市科学技术委员会自然基金(No.16ZR1432700),国家自然科学基金(No.81770291),广东省自然科学基金(重点项目,No.2018B030311011)资助~~

    分类号: R329.2

    DOI: 10.13865/j.cnki.cjbmb.2019.08.14

    页码: 880-887

    总页数: 8

    文件大小: 384K

    下载量: 107

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