丁晓明[1]2003年在《地中海氏拟无枝菌酸菌（Amycolatopsis mediterranei）U-32遗传操作系统的建立》文中进行了进一步梳理地中海拟无枝菌酸菌U32是产生力复霉素SV的工业生产菌，过去的实验表明，该菌十分难以转化。利用一株地中海拟无枝菌酸菌专一噬菌体φMMR1的DNA电转染U-32导入过程作为模型，通过对影响噬菌体DNA电转染U32效率的因素特别是菌体的生长条件、电击条件的优化，确定了一系列导致高频电转染的参数。使用经过优化的条件，获得了较高的电转染频率（5x105噬菌斑/ug噬菌体DNA)。该条件也同样适用于其他地中海拟无枝菌酸菌和链霉菌。
李文华[2]2002年在《完善地中海氏拟无枝菌酸菌U32遗传操作系统的研究工作》文中研究表明本论文致力于进一步发展和完善A.meditteranei U32的遗传操作系统。 首先对适用于U32的选择性标记进行了筛选，结果表明来自pUC19E的红霉素抗性基因和来自pULAM2的淀粉酶基因可以作为U32的选择性标记。 然后又以淀粉酶基因为报告基因构建了启动子探针pZCamyP~-，测试结果表明该质粒对U32glnA基因的启动子十分敏感，可以作为U32的启动子探针。 同时本论文还构建了携带U32glnA基因的质粒pULVK2.5GE。用它转化P32(glnA：：Am、Gin~-U32变株)，得到了可以在基本培养基上生长的菌株P32′。该结果表明U32的glnA基因负责编码谷氨酰胺合成酶。 本论文还尝试了用同源重组的方法中断和缺失U32的recA基因，但没有成功。该实验结果表明recA基因对于U32的存活十分重要。 此外本论文还用U32的recA基因互补了Ecoli.JM109(DE3)(RecA~-)，结果表明它能在一定程度上修复UV照射引起的损伤。 最后通过测序和序列分析来研究质粒pRLAm和质粒pULVK2A在拷贝数和丢失频率方面存在差别的原因。序列分析结果表明pULVK2A缺失的片段可能负责编码与质粒分配有关的parA和parB基因。
丁晓明, 张霓, 田永强, 姜卫红, 赵国屏[3]2002年在《利用同源重组建立地中海拟无枝菌酸菌U32染色体的基因置换/中断系统》文中研究指明地中海拟无枝菌酸菌U32是力复霉素SV的工业产生菌 ,其遗传操作一直是一个难题。在该菌株DNA高效电转化的基础上 ,利用同源重组的原理 ,建立了地中海拟无枝菌酸菌染色体的基因置换 中断系统。通过大肠杆菌重组质粒pDK110构建、转化及两步重组筛选 ,成功地用α 淀粉酶基因 (amy)取代了地中海拟无枝菌酸菌U32染色体上的 3 氨基 5 羟基苯甲酸合成酶基因 (ahbas)。第一步单交换和第二步双交换的频率分别是 0 5 %～ 0 7%和2 %。将质粒pDK110变性后转化可显着提高重组频率 ,在第二步筛选双交换前对单交换重组子进行电击也能够提高其双交换重组的频率。此外 ,通过转化构建的两端带同源区段的线性DNA片段及一步重组筛选 ,我们在地中海拟无枝菌酸菌U32染色体的amrD ,rifO基因中间插入了阿普拉霉素抗性基因 (apr) ,其效率约为 30～ 5 0转化子 μgDNA。
参考文献：
[1]. 地中海氏拟无枝菌酸菌（Amycolatopsis mediterranei）U-32遗传操作系统的建立[D]. 丁晓明. 中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）. 2003
[2]. 完善地中海氏拟无枝菌酸菌U32遗传操作系统的研究工作[D]. 李文华. 沈阳药科大学. 2002
[3]. 利用同源重组建立地中海拟无枝菌酸菌U32染色体的基因置换/中断系统[J]. 丁晓明, 张霓, 田永强, 姜卫红, 赵国屏. 生物工程学报. 2002