旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂定位及免疫保护效果评估

旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂定位及免疫保护效果评估

论文摘要

探讨旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(Ts-serpin)的抗原性、定位及免疫保护性。将本实验室前期构建的旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂的原核表达载体进行大量表达纯化。利用不同感染时间的猪旋毛虫阳性血清,通过Western blot方法对纯化后的重组丝氨酸蛋白酶抑制剂(rTs-serpin)进行反应原性鉴定,并制备多克隆抗体,用间接免疫荧光法检测Ts-serpin在旋毛虫肌幼虫中的定位。随后将rTs-serpin免疫小鼠进行免疫保护效果评估。结果显示:rTs-serpin可被不同感染时间的猪旋毛虫阳性血清特异性识别,表明rTsserpin是高反应原性抗原;Western blot结果显示旋毛虫排泄分泌物和旋毛虫虫体粗提取物均存在Ts-serpin,间接免疫荧光显示Tsserpin定位在旋毛虫肌幼虫表皮中;免疫保护试验结果显示rTs-serpin免疫后的小鼠旋毛虫肌幼虫减虫率约为32.2%。综上所述,Tsserpin主要定位在旋毛虫肌幼虫表皮,rTs-serpin具有较强的抗原性,且对小鼠具有免疫保护作用。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 旋毛虫及旋毛虫感染猪血清样本、实验动物来源
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 r Ts-serpin的大量表达与纯化
  •   1.4 r Ts-serpin反应原性鉴定
  •   1.5 多克隆抗体的制备和效价测定
  •   1.6 多克隆抗体的Westerrn blot鉴定
  •   1.7免疫荧光定位
  •   1.8 r Ts-serpin的免疫保护效果评估
  • 2 结果
  •   2.1 r Ts-serpin表达与纯化
  •   2.2 r Ts-serpin的Western blot鉴定
  •   2.3 多克隆抗体效价测定和Western blot分析
  •   2.4 多克隆抗体的Western blot分析
  •   2.5 免疫荧光定位
  •   2.6 r Ts-serpin的免疫保护效果评估
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 任博雯,刘琰,刘晓雷,白雪,丁静,张胜兰,刘明远

    关键词: 旋毛虫,减虫率

    来源: 中国动物传染病学报 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 农业科技

    专业: 畜牧与动物医学

    单位: 吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室

    基金: 国家重点研发计划项目(2017YFD0501302,2017YFC1601206),国家自然科学基金(31520103916),广东省创新创业团队(2014ZT05S123),中央高校基本科研业务费

    分类号: S852.731

    页码: 16-21

    总页数: 6

    文件大小: 2082K

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