B型流感病毒在MDCK细胞上的遗传稳定性

B型流感病毒在MDCK细胞上的遗传稳定性

论文摘要

目的研究流感病毒NYMC BX-51B株在MDCK细胞上连续传代的遗传稳定性。方法将SPF级鸡胚制备的流感病毒NYMC BX-51B尿囊液毒株接种至MDCK细胞上,连续传代培养至10代(M1~M10),参照《中国药典》三部(2015版)毒种检定方法进行支原体和无菌检查、外源因子检查、鉴别试验,并进行血凝试验和病毒滴度检测。提取尿囊液、M1代、M10代病毒总RNA,RT-PCR法扩增血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因,并进行测序。结果流感病毒NYMC BX-51B株在MDCK细胞上连续传代培养至M10代,血凝滴度最高可达1∶256,病毒滴度最高可达6. 5 LgCCID50/mL;鉴别试验、无菌检查、支原体检查、外源因子检查结果均符合药典要求。尿囊液、M1代、M10代病毒的HA和NA基因的氨基酸序列与GenBank中登录的流感病毒NYMC BX-51B的HA和NA基因比对结果完全一致。结论 NYMC BX-51B型流感病毒在MDCK细胞基质上连续传代培养至M10代,遗传稳定性良好,为MDCK细胞基质流感疫苗的研究和生产奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 毒种、细胞及菌液
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 毒种传代
  •   1.4血凝试验
  •   1.5 病毒滴度测定
  •   1.6 支原体和无菌检查
  •   1.7 外源因子检查
  •   1.8 鉴别试验
  •   1.9 HA、NA基因的扩增及测序
  • 2 结果
  •   2.1 各代次病毒的检定
  •   2.2 HA、NA基因扩增产物的鉴定
  •   2.3 病毒氨基酸序列分析
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 刘飞雪,单亚明,赵大鹏,张雪梅

    关键词: 型流感病毒,细胞,遗传稳定性

    来源: 中国生物制品学杂志 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 长春生物制品研究所有限责任公司疫苗六室,吉林大学生命科学学院艾滋病疫苗国家工程实验室

    基金: 国家科技重大专项(2015ZX09102016),吉林省科技成果转化计划(201603019YY,201603052 YY,20160307029 YY),长春市“双十工程”(15SS24)

    分类号: R373.13

    DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002135

    页码: 609-613

    总页数: 5

    文件大小: 469K

    下载量: 154

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