论文摘要
为了消除核移植转基因动物中标记基因潜在的生物安全风险,应用Cre/Loxp系统删除人乳铁蛋白（hLF）转基因山羊乳腺上皮细胞的标记基因,并以此探索标记基因删除前后对功能基因乳腺特异性表达的影响。首先复苏hLF转基因山羊乳腺上皮细胞并纯化;然后电转染PBS185纯化质粒,培养10-14 d,胰蛋白酶消化细胞,通过自制口控式移卵针挑取单克隆细胞;最后PCR检测标记基因是否删除,催乳素诱导表达,ELISA和Western Blot检测功能蛋白hLF的表达情况。结果表明,共获得65株单克隆乳腺上皮细胞,挑取状态较好的18株用于PCR检测,有3株为删除标记基因的细胞株,删除效率达16.7%（3/18）,且删除标记基因细胞株表达水平提高约8倍(2.85 g·L-1/0.35 g·L-1),蛋白条带大小与目标蛋白一致（80 kD）。结果表明Cre/Loxp系统能够有效的删除乳腺上皮细胞基因组上的标记基因,且删除后细胞株表达水平明显提高,成功建立一套转基因山羊乳腺上皮细胞标记基因删除的系统,为进一步扩大生产无标记基因的转基因山羊奠定基础。
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文章来源
类型: 期刊论文
作者: 宋绍征,于康英,陆睿,张婷,陈朝军,潘生强,成勇,周鸣鸣
关键词: 标记基因,乳腺上皮细胞,诱导
来源: 生物技术通报 2019年12期
年度: 2019
分类: 基础科学,农业科技
专业: 畜牧与动物医学
单位: 无锡太湖学院护理学院,扬州大学兽医学院江苏省转基因动物制药工程研究中心
基金: 江苏省高校自然科学基金面上项目(19KJB180030),国家转基因生物新品种培育重大专项(2014ZX08008-004)
分类号: S827
DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0544
页码: 105-111
总页数: 7
文件大小: 3914K
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