导读:本文包含了植物遗传转化论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:植物,转基因,亚磷酸盐,载体,基因,烟草,棉铃虫。
植物遗传转化论文文献综述
袁航[1]（2019）在《基于亚磷酸盐/细菌碱性磷酸酶的植物遗传转化体系的建立》一文中研究指出植物进行遗传转化时,选择标记是不可或缺的重要一环。目前,植物转化常用的选择标记主要有两大类——抗生素抗性基因和抗除草剂基因,但现在由它们引起的生物安全性担忧正日趋严重,所以开发一种新型且安全的选择标记越来越被重视。亚磷酸盐脱氢酶(phosphite dehydrogenase,PTDH)是一种依赖于NAD~+、将亚磷酸盐(Phi)氧化为正磷酸盐(Pi)的酶。Phi不能被植物直接利用,相反对植物具有毒害作用。基于此特性,目前利用Phi/PTDH组合已建立起一套新型多用途且有广泛应用前景的植物转化显性选择标记/植物磷利用/杂草控制系统。为了打破这套技术系统的国际专利壁垒,其关键点就是鉴定出PTDH的功能替代。由于大肠杆菌碱性磷酸酶(bacterial alkaline phosphatase,BAP)也具有将Phi氧化为Pi的活性且无辅酶依赖性,因此本工作试图通过将它的基因EcBAP(即phoA)转入植物中并以Phi作为选择剂,验证它能否顶替PTDH从而建立起Phi/BAP基础上的类似系统。取得的主要结果如下:(1)EcBAP的基因克隆及其表达载体的构建首先从大肠杆菌DH5α基因组总DNA中扩增出BAP基因(EcBAP)片段,然后分别通过BamH I/Sac I和Nde I/Xho I双酶切克隆到载体pBI121和pET32a(+)中,得到植物表达载体pBI(EcBAP)和原核表达载体pET(EcBAP)并经测序验证。(2)EcBAP转基因烟草的获得及其特性分析(1)以卡那霉素(Kan)为筛选剂进行pBI(EcBAP)的农杆菌侵染烟草转化,在正常MS培养基选择培养85~90 d就可获得EcBAP(Kan)转基因烟草,阳性转化率为66.7%。(2)通过比较EcBAP(Kan)转基因烟草和野生型(WT)烟草叶片在含不同Phi浓度的缺Pi或正常MS培养基上的抗性再生,发现EcBAP(Kan)烟草的叶片失绿程度在几乎所有情况下都显着低于WT烟草,但只有在低于3 mM Phi浓度下的正常MS培养基上才有抗性再生绿芽长出。(3)基于(2)中结果,以2.5 mM Phi为筛选剂进行农杆菌介导pBI(EcBAP)的烟草转化,在正常MS培养基上选择培养约68 d就能获得EcBAP(Phi)转基因烟草,阳性转化率为80%。相比较,在缺Pi MS培养基上培养2.5月,任何0.5~2 mM浓度范围内的Phi作为筛选剂情况下也仅有愈伤分化。另外,RT-PCR结果显示EcBAP(Phi)转基因烟草的根、茎、叶中均有转基因EcBAP的表达。(4)将Phi筛选出的EcBAP转基因烟草与WT烟草在Phi胁迫MS平板上进行种子萌发实验,发现无论是缺Pi还是正常的MS培养基上,WT烟草的幼苗生长显着受Phi抑制且随浓度加剧,而这种现象在EcBAP转基因烟草中相对不明显。而且,在同样Phi胁迫条件下正常MS培养基上的WT和转基因烟草的幼苗生长状况总体上明显好于缺Pi MS培养基。(5)温室条件下将Phi筛选出的EcBAP转基因烟草与WT烟草和杂草(狗牙根和高羊茅)在蛭石/珍珠岩/石子基质中混合播种,结果表明在含120 mg/L Phi的ddH_2O浇灌下EcBAP转基因烟草具有明显的生长竞争优势。(3)EcBAP的重组表达、纯化和酶活分析将载体pET(EcBAP)在大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达。结果显示,重组表达蛋白EcBAP在37℃诱导下的可溶性很低,而在25℃过夜诱导下可溶性有了显着增加。经His标签亲和层析纯化和胶活性染色以及分光光度法酶活测定,证实EcBAP重组蛋白具有氧化Phi为Pi的酶活性,其平均比活为8.463U/mg。总之,上述结果表明,大肠杆菌EcBAP具备将Phi氧化为Pi的能力,能够替代PTDH(作为选择标记)与Phi(作为选择剂)组合一起用于植物的遗传转化,其效率可以媲美甚至优于常用的卡那霉素筛选系统。EcBAP转基因烟草具有Phi抗性并将之转化为可利用的磷素营养,从而较WT烟草和杂草在Phi胁迫下有着明显的生长竞争优势。因此,以Phi/BAP为基础建立的这种新型选择标记/植物磷利用/杂草控制系统可为植物基因工程提供一种新的技术选择。(本文来源于《云南师范大学》期刊2019-06-05）
任芳,张尊平,范旭东,胡国君,李正男[2]（2018）在《葡萄病毒B CP基因植物表达载体构建及烟草遗传转化》一文中研究指出葡萄病毒B Grapevine virus B(GVB)是葡萄皱木复合病中栓皮病的病原,为开展抗GVB转基因研究,本研究利用RT-PCR技术克隆GVB外壳蛋白(coat protein,CP)基因,与植物表达载体pRI 101-AN连接构建植物表达载体pRI-GVB CP。采用电击转化法将植物表达载体pRI-GVB CP导入农杆菌LBA4404,并利用农杆菌介导的叶盘转化法将外源基因导入西方烟‘37B’。共获得16个烟草再生株系,PCR检测其中3个株系为阳性,阳性株系播种获得的64株T_1代植株中有30株扩增到目的条带,阳性率为46.9%,表明目的基因GVB cp成功导入烟草并可成功遗传到子代。28株T_1代转基因植株接种病毒进行抗病性鉴定,其中有6株对接种病毒GVB具有抗性。(本文来源于《植物保护》期刊2018年03期）
刘娟娟[3]（2018）在《HaCDA hpRNA植物表达载体的构建和烟草的遗传转化分析》一文中研究指出RNAi是一种基因沉默技术,可引起细胞内同源的mRNA发生降解,普遍存在于真核生物中。通过基因工程技术构建昆虫关键基因的dsRNA片段导入受体植物可显着提高植物的抗虫性。棉铃虫(Helicoverpa armigera)是一种全球广泛存在的农业害虫。本论文以4个棉铃虫CDA基因为研究对象,分别构建到hpRNA植物表达载体上,利用农杆菌介导法将其转化烟草,获得具有卡那霉素抗性的植株。随之对抗性植株进行PCR和RT-PCR鉴定以及T1代转基因烟草植株发芽率进行卡方检验。最后挑选单拷贝的T0代植株叶片进行抗虫性实验研究。具体研究内容以及结果如下:1、构建含有目的基因CDA的hpRNA植物表达载体以本实验室已有的pUCm-HaCDA质粒作模板进行PCR扩增获得片段大小均在500~650bp之间的4个棉铃虫CDA基因片段。利用TA克隆法将其分别连接到中间载体pUCBXK质粒上。之后用Golden-gate克隆法将正向连接的目的基因片段构建到hpRNA植物表达载体上,经过PCR和测序技术鉴定获得4个双元表达载体。将其质粒电击转化至农杆菌感受态细胞LBA4404中,获得含有4个棉铃虫CDA基因的农杆菌菌株。2、转基因烟草植株的获得和鉴定利用农杆菌介导法将4个棉铃虫CDA基因转化烟草,经过组织培养技术初步获得的具有卡那霉素抗性的植株数为转HaCDA5a 11株,转HaCDA5b 11株,转HaCDA1 10株和转HaCDA2 16株。经过PCR和RT-PCR鉴定分别获得转基因烟草植株数为转HaCDA5a 9株,转HaCDA5b 8株,转HaCDA1 8株和转HaCDA2 11株。随后选取转每个CDA基因的阳性植株中的5株的T0代种子种植于含有卡那霉素的MS固体培养基中,对其T1代植株发育率进行卡方检验,符合孟德尔分离比的单拷贝植株数分别为转HaCDA5a 5株,转HaCDA5b 5株,转HaCDA1 5株和转HaCDA2 4株。3、转HaCDA基因的烟草植株的抗虫性分析用单拷贝的T0代转HaCDA烟草叶片和野生型烟草叶片(对照组)饲喂棉铃虫幼虫,结果显示饲喂24h后幼虫对转HaCDA5b烟草叶片的咬噬程度轻于其他3个转棉铃虫基因的,且它们均轻于对照组叶片的。连续饲喂6天后以转HaCDA5b的烟草叶片为食的幼虫死亡率最高,对照组死亡率最低,两者具有显着差异性。收集饲喂时间为24h、48h和60h的幼虫,用qRT-PCR检测目的基因沉默效率,结果显示60h时以转4个棉铃虫CDA烟草叶片为食的幼虫对应目的基因的相对表达量均表现出一定程度的下降,其中转棉铃虫CDA5b叶片的特异性沉默效率最高。转基因烟草叶片对幼虫目的基因的沉默效率与对照组相比,均表现出显着差异性。本研究为筛选新型的杀虫剂靶标基因提供一定的实验依据,同时也为利用RNAi技术防治棉铃虫以及其他农业害虫提供一些新的建议。(本文来源于《河北大学》期刊2018-06-01）
王栋鑫,彭棣,张爽[4]（2018）在《农杆菌介导木本植物遗传转化的研究进展》一文中研究指出农杆菌介导法是目前应用较广泛的转基因技术。该研究对农杆菌介导木本植物遗传转化的发展状况、转化方法进行了综述,重点分析了在木本植物中,外植体类型、农杆菌浸染时间、共培养条件和筛选转化等主要因素对农杆菌转化效率的影响,以期为提高木本植物的转化效率和转基因技术提供参考依据。(本文来源于《北方园艺》期刊2018年02期）
于岩[5]（2018）在《观赏兰科植物组培快繁及遗传转化研究进展》一文中研究指出兰科植物是一类具有极高观赏价值的植物,在我国的历史文化中作为高尚人格的象征,在近代更是成为观赏植物中的稀缺品种。为大量繁殖性状优良的兰科植物品种,满足观赏植物的市场需求,对于兰科植物加强植物组织培养与遗传转化的研究成了研究重点。本文就这两个研究重点进行讨论,为大量培育兰科植物提供技术支持。(本文来源于《乡村科技》期刊2018年03期）
[6]（2018）在《我国科学家创立高效便捷植物遗传转化新方法》一文中研究指出我国科学家通过利用磁性纳米粒子作为基因载体,创立了一种高通量、操作便捷和用途广泛的植物遗传转化新方法,推动纳米载体基因输送与遗传介导系统研究并取得了重要进展,开辟了纳米生物技术研究的新方向。相关研究成果于2017年11月27日在线发表在权威学术期刊《自然—植物(Nature Plants)》上。此次研发的基于磁性纳米颗粒基因载体的花粉磁转化植物遗传修饰方法,可以利用磁性纳米颗粒Fe_3O_4作为载体,在外加磁场介导下将外源基因输送至花粉内部,通过人工授粉利用自然生殖过程直接获(本文来源于《蔬菜》期刊2018年01期）
屈东海,赵静,谭环苗,陈东红[7]（2018）在《伽蓝菜属植物遗传转化及其应用研究进展》一文中研究指出伽蓝菜属(Kalanchoe)植物在园艺观赏和传统医药领域具有重要的应用价值,而且为基础理论的研究,特别是在景天科代谢途径和体细胞胚发生的分子机制探讨方面,提供了非常理想的模式系统。遗传转化方法是关系到植物性状定向改良和基因功能研究的核心技术,能极大加速育种进程和机制挖掘。本综述系统讲述了多种伽蓝菜属植物(K. laciniata, K. blossfeldiana, K daigremontiana, K.×houghtonii, K. pinnata, K.fedtschenkoi)的遗传转化方法,并且探讨了这些方法在改造花色、叶型、株型、花期、抗衰老等应用方面以及在景天科代谢途径和细胞命运转变的机理方面的研究进展,以期为进一步开发和利用伽蓝菜属植物提供比较全面的信息资源。(本文来源于《分子植物育种》期刊2018年18期）
杜浩[8]（2017）在《能源植物甜高粱耐盐品种的筛选、组织培养及其遗传转化研究》一文中研究指出甜高粱是一种C4植物,由于它生长速度快,产量高,含糖量高,且具有抗逆性强的特点,适宜在盐碱滩涂及干旱等边际土壤大规模种植。研究甜高粱的耐盐性,筛选耐盐品种并对其进行遗传改良,对于缓解我国粮食压力及资源化利用边际土壤,具有十分重要的意义。本研究首先从不同浓度的盐胁迫(NaCl)对四个甜高粱品种(系)大力王(DLW)、牛魔王(NMW)、海牛(HN)和帕卡(PK)种子萌发和幼苗生长等方面的影响,对甜高粱发芽期耐盐性进行初步比较与评价。研究表明NMW相对其他品种(系)的耐盐性最强,其次是DLW,而PK和HN易受盐胁迫的影响。研究表明当盐胁迫浓度较低(80 m M)时,保护酶活性升高及渗透压调节物质的增加有利于增强甜高粱的耐盐性,而当盐胁迫浓度过高(240 m M)时,植物的保护酶系统产生不可逆破坏,此时渗透压调节物质对保护植物起到重要的作用。以甜高粱成熟种子为外植体建立甜高粱组织培养体系的研究发现:诱导甜高粱愈伤组织时2,4-D最佳浓度为4 mg/L,而IAA和6-BA的添加会降低愈伤组织的诱导率及胚性愈伤组织产生。四个甜高粱品种(系)中DLW的愈伤组织诱导效果最佳,其次为NMW,而HN和PK的愈伤组织诱导效果较差。以DLW为外植体进行愈伤组织的再分化及生根实验得出:最佳的愈伤组织分化培养基为MS+4 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA,不定根诱导培养基为MS+3 mg/L IAA。本实验成功建立了DLW的高效组织培养体系,为DLW遗传改良的研究奠定了基础。以甜高粱品种DLW的愈伤组织为外植体,对甜高粱遗传转化过程中乙酰丁香酮浓度、潮霉素筛选浓度、农杆菌菌液浓度、真空浸染时间、共培养时间等条件进行优化,通过农杆菌介导的植物遗传转化法成功将新疆盐穗木的耐盐碱基因HcNHX1转入甜高粱品种DLW中。DLW遗传转化的最佳条件为:100μM乙酰丁香酮,菌液浓度OD600≈0.6,抽真空5 min,共培养时间3 d,潮霉素筛选浓度为20 mg/L。通过对转基因抗性植株进行分子水平检测,表明本研究共获得5株T0代含有功能基因HcNHX1的转基因植株。对转基因植株与野生型植株的根尖细胞活力、根尖活性氧及植株的Na+、K+含量进一步比较的研究表明,与野生型植株相比,转基因植株具有较高的根尖细胞活力、较少的根尖活性氧含量,以及Na+含量,说明获得的转基因植株对盐胁迫具有较好的抗性。(本文来源于《江苏大学》期刊2017-06-01）
林楠[9]（2017）在《抗虫基因Cry8-like植物根系特异性表达载体的构建及在大豆中的遗传转化》一文中研究指出大豆(Glycine max(L)Merr)作为我国一种重要的油料作物,被应用于社会生活的各个领域,但由于我国大豆的生产受到地下害虫的危害,导致大豆大面积的减产,其中,鞘翅目类地下害虫蛴螬对我国大豆的生产影响尤为严重。大豆生长期间,鞘翅目地下害虫蛴螬哺食大豆根系,影响大豆正常生长,每年因鞘翅目地下害虫蛴螬的危害造成大豆减产10.0%~20.0%,严重的情况下能减产30.0%以上。利用基因工程技术将抗虫基因转入大豆,能够显着提高大豆对地下害虫蛴螬的抗性。本试验根据Seamless Assembly Cloning无缝克隆技术的原理,以pCAMBIA3301为骨架,将抗虫基因Cry8-like以及大豆根系特异性启动子片段RSP重组到该基础载体上,构建了含有筛选标记Bar的植物根系特异性表达载体pCAMBIA3301-RSP-Cry8-like-nos。通过农杆菌介导法将构建好的重组植物根系特异性载体分别转入大豆受体品种‘吉农28’和‘吉农42’中。通过PCR进行了初步检测,将收获的阳性植株种子于人工气候室进行加代,并分别对T2代转基因植株进行了Southern blotting整合度检测,荧光定量PCR转录水平检测以及室内抗虫初步鉴定。得到的主要试验结果如下:1.利用无缝克隆技术,将抗虫基因Cry8-like和大豆根系特异性启动子片段RSP重组到pCAMBIA3301载体上,成功构建了含有抗草铵膦筛选标记的植物根系特异性表达载体pCAMBIA3301-RSP-Cry8-like-nos。2.使用农杆菌介导法将构建的植物根系特异性表达载体转入两个大豆受体品种‘吉农28’和‘吉农42’中。转化植株经PCR检测,农杆菌介导法得到T0代‘吉农28’阳性植株5株,转化率为2.33%;T0代‘吉农42’阳性植株2株,转化率1.74%。3.将收获的T0代阳性植株的种子于人工气候室加代,经过PCR初步检测分别得到T1代‘吉农28’阳性植株17株,T1代‘吉农42’阳性植株13株;将部分T1代阳性植株的种子于人工气候室加代,经过PCR初步检测分别得到T2代‘吉农28’阳性植株36株,T2代‘吉农42’阳性植株25株。4.T2代转基因植株Southern blotting结果显示,抗虫基因Cry8-like以单拷贝的形式整合到大豆基因组中,且杂交信号强度不同。5.对Southern杂交出现单拷贝杂交信号的转基因植株进行荧光定量PCR,结果显示,抗虫基因Cry8-like在转基因植株幼根得到表达,转基因植株相对表达量与非转化受体对照相比最高提高了13.83倍,最低提高了1.33倍。6.室内抗暗黑鳃金龟幼虫鉴定结果表明,杀虫率最高达到20.00%,抑制率最高达到56.39%,本试验的抗虫效果与目标基因的表达强度达到显着正相关,转基因植株提高了抗暗黑鳃金龟幼虫的能力。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2017-03-01）
王晓雪,杨祥波,任旭东,刘威,蔡勤安[10]（2016）在《植物耐盐碱基因的克隆及其在水稻中遗传转化研究进展》一文中研究指出由于土壤盐碱化逐年增加造成可耕作面积逐年减少,使盐碱等非生物胁迫已成为严重影响我国粮食生产的重要因素。目前,提高作物耐盐碱性是植物育种工作的重中之重。随着现代生物技术的快速发展,已经获得较多与耐盐碱相关的基因,并通过遗传转化技术获得了一些耐盐碱转基因水稻。本研究就植物耐盐碱相关基因的克隆及其在水稻中的遗传转化等方面进行了综述,并探讨了转基因水稻这一领域研究中存在的问题及应用前景。(本文来源于《东北农业科学》期刊2016年05期）
植物遗传转化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
葡萄病毒B Grapevine virus B(GVB)是葡萄皱木复合病中栓皮病的病原,为开展抗GVB转基因研究,本研究利用RT-PCR技术克隆GVB外壳蛋白(coat protein,CP)基因,与植物表达载体pRI 101-AN连接构建植物表达载体pRI-GVB CP。采用电击转化法将植物表达载体pRI-GVB CP导入农杆菌LBA4404,并利用农杆菌介导的叶盘转化法将外源基因导入西方烟‘37B’。共获得16个烟草再生株系,PCR检测其中3个株系为阳性,阳性株系播种获得的64株T_1代植株中有30株扩增到目的条带,阳性率为46.9%,表明目的基因GVB cp成功导入烟草并可成功遗传到子代。28株T_1代转基因植株接种病毒进行抗病性鉴定,其中有6株对接种病毒GVB具有抗性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
植物遗传转化论文参考文献
[1].袁航.基于亚磷酸盐/细菌碱性磷酸酶的植物遗传转化体系的建立[D].云南师范大学.2019
[2].任芳,张尊平,范旭东,胡国君,李正男.葡萄病毒BCP基因植物表达载体构建及烟草遗传转化[J].植物保护.2018
[3].刘娟娟.HaCDAhpRNA植物表达载体的构建和烟草的遗传转化分析[D].河北大学.2018
[4].王栋鑫,彭棣,张爽.农杆菌介导木本植物遗传转化的研究进展[J].北方园艺.2018
[5].于岩.观赏兰科植物组培快繁及遗传转化研究进展[J].乡村科技.2018
[6]..我国科学家创立高效便捷植物遗传转化新方法[J].蔬菜.2018
[7].屈东海,赵静,谭环苗,陈东红.伽蓝菜属植物遗传转化及其应用研究进展[J].分子植物育种.2018
[8].杜浩.能源植物甜高粱耐盐品种的筛选、组织培养及其遗传转化研究[D].江苏大学.2017
[9].林楠.抗虫基因Cry8-like植物根系特异性表达载体的构建及在大豆中的遗传转化[D].吉林农业大学.2017
[10].王晓雪,杨祥波,任旭东,刘威,蔡勤安.植物耐盐碱基因的克隆及其在水稻中遗传转化研究进展[J].东北农业科学.2016
论文知识图
